血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、增殖細(xì)胞核抗原在良惡性腮腺多形性腺瘤中的表達(dá)及意義

楊重恒

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔科，遼寧 錦州 121000)

腫瘤的生物學(xué)行為與多種因素有關(guān)，通過研究表明血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)與多種腫瘤的病理分級(jí)、 惡性程度、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有密切關(guān)系〔1，2〕，據(jù)此推測(cè)可能也與腮腺多形性腺瘤有關(guān)。本研究探討VEGF、PCNA在良惡性腮腺多形性腺瘤中的表達(dá)及意義。

1 材料與方法

1.1臨床資料 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院和第二醫(yī)院病理科1992～2012年腮腺多形性腺瘤61例，其中良性腮腺多形性腺瘤30例，男14例，女16例，年齡18～75(平均48)歲；惡性腮腺多形性腺瘤31例，男16例，女15例，年齡50～75(平均67)歲。29例正常腮腺組織為隨機(jī)從良性腮腺多形性腺瘤旁的正常腮腺組織中選取。

1.2免疫組織化學(xué)法 鼠抗人單克隆VEGF抗體(ZM-040)、鼠抗人單克隆PCNA抗體(ZM-0213)及通用性二抗(SP-9000)均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。實(shí)驗(yàn)步驟按照免疫組織化學(xué)SP法說明進(jìn)行操作。

1.3結(jié)果判定 VEGF陽性信號(hào)表達(dá)于腫瘤細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，染色由淺黃至棕褐色〔3〕；PCNA陽性信號(hào)定位于細(xì)胞核，呈棕褐色顆粒。陽性染色細(xì)胞選取條件為細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰、陽性顆粒定位好，著色與背景對(duì)比明顯。視野選取染色均勻的腫瘤區(qū)。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400)，各計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)取均值，再計(jì)算該標(biāo)本的陽性表達(dá)率。無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。按著色強(qiáng)度判斷，無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。著色強(qiáng)度積分與數(shù)量積分的乘積>3分判為免疫反應(yīng)(+)〔4〕。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS10.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1VEGF、PCNA的表達(dá) VEGF陽性表達(dá)主要在細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)和細(xì)胞膜上，染色由淺黃至棕褐色；PCNA陽性信號(hào)定位于細(xì)胞核，呈棕褐色顆粒。見圖1。

2.2VEGF、PCNA在良惡性腮腺多形性腺瘤中的表達(dá) VEGF、PCNA在正常腮腺組織中的陽性表達(dá)率分別為6.9%，10.3%，在良性腮腺多形性腺瘤組中分別為36.7%，46.7%。腮腺多形性腺瘤組織中分別為71.0%，80.6%，其中正常腮腺與良性多形性腺瘤組及良、惡性多形性腺瘤組均有顯著差異(P<0.05，P<0.01)。

2.3VEGF、PCNA蛋白表達(dá)的相關(guān)性 61例多形性腺瘤中，VEGF陽性33例中，PCNA陽性27例，陰性6例；VEGF陰性28例中，PCNA陽性12例，陰性16例。VEGF與PCNA相比較，兩種方法的一致性非常顯著(P<0.01)。

良性腺瘤VEGF

良性腺瘤PCNA

惡性腺瘤VEGF

惡性腺瘤PCNA

3 討 論

血管生成的啟動(dòng)是腫瘤生長(zhǎng)微環(huán)境中血管生成刺激因子和抑制因子平衡改變的結(jié)果，其中VEGF是目前發(fā)現(xiàn)的最重要的促進(jìn)腫瘤血管形成的因子〔5〕，它能夠特異性刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，與正常和異常的血管生成均密切相關(guān)。VEGF調(diào)控的腫瘤新生血管均有功能和結(jié)構(gòu)異常，如扭曲、分叉、基底膜不完整、無神經(jīng)支配、血流紊亂等，有助于血漿的滲出和腫瘤細(xì)胞脫離母瘤后進(jìn)入血管，形成轉(zhuǎn)移〔6，7〕；另外它還可以通過自分泌途徑作用于腫瘤細(xì)胞本身促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，進(jìn)一步加速腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。

PCNA又稱周期素，是一種36 kD、酸性、無組蛋白的細(xì)胞核多肽，其免疫反應(yīng)大多局限于增殖細(xì)胞的核中，胞質(zhì)則很少或沒有。它的表達(dá)合成與增殖細(xì)胞的增殖周期有關(guān)，G1期在核中表達(dá)逐漸增加，S期達(dá)到高峰，而G2和M期減少。它是DNA多聚酶δ的輔助蛋白，直接參與細(xì)胞增殖過程的DNA復(fù)制，是DNA復(fù)制過程中所必需的〔8〕。PCNA發(fā)揮功能需要ATP，它具有ATP酶活性。PCNA在細(xì)胞核內(nèi)陽性表達(dá)的高低與細(xì)胞增殖活性密切相關(guān)〔9〕。

本研究提示VEGF、PCNA與腫瘤的惡性程度和病理分級(jí)有關(guān)。傳統(tǒng)病理形態(tài)學(xué)分級(jí)確定異型性明顯的腫瘤較準(zhǔn)確，而對(duì)形態(tài)表現(xiàn)相似、生物學(xué)行為卻不同者，進(jìn)一步病理分級(jí)困難。目前研究認(rèn)為：腫瘤分級(jí)、分期相同，而轉(zhuǎn)移率、生存率不同時(shí)，只有使用分子生物學(xué)技術(shù)(如檢測(cè)癌相關(guān)基因的表達(dá))，才能合理解釋腫瘤的生長(zhǎng)特性。一般而言，分子病理改變總是先于形態(tài)病理，只是由于病因不同，這種先后和變化差異表現(xiàn)程度不同而已。

本研究結(jié)果表明VEGF與PCNA的表達(dá)有明顯的相關(guān)性，隨著VEGF表達(dá)的升高PCNA表達(dá)也升高。說明它們之間有著某種必然的聯(lián)系，可能為：①VEGF刺激腫瘤血管的形成，為腫瘤細(xì)胞帶來營養(yǎng)物質(zhì)，帶走廢物，促進(jìn)細(xì)胞的增殖。②VEGF直接刺激腫瘤細(xì)胞的增殖，造成PCNA增加。本研究，認(rèn)為VEGF、PCNA的異常表達(dá)在腮腺多形性腺瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。兩者對(duì)腫瘤的作用是密切相關(guān)的，二者共同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。

4 參考文獻(xiàn)

1Ebos JM,Lee CR,Cruz-Munoz W,etal.Accelerated metastasis after short-term treatment with a potent inhibitor of tumor angiogenesis〔J〕.Cancer Cell,2009；15:232-9.

2周祥榮,李忠音,楊小東，等.PCNA和VEGF在胃癌組織中表達(dá)的關(guān)系及意義〔J〕.華西醫(yī)學(xué),2009；24(10):2585-7.

3Mukohara T，Kudoh S，Yamauchi S，etal.Expression of epidermal growth factor receptor(EGFR)and downstream activated peptides in surgically excised non-small cell lung cancer(NSCLC)〔J〕.Lung Cancer，2003；41(2)：123-30.

4許良中,楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)〔J〕.中國癌癥雜志,1996；6(4):229-30.

5李京佳，林相國，許 濤，等.VEGF家族及其在腫瘤生長(zhǎng)中作用的研究〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012；12(4)：777-9.

6Wong YK，Liu CJ，Kwan PC，etal.Microvacsular density and vascular endothelial growth factor immunoreactivity as predictors of regional lymph node metastasis from betel-associated oral squamous cell carcinoma〔J〕.Oral Maxillofac Surg，2003；61(11)：1257-62.

7Arora S，Kaur J，Sharma C，etal.Stromelysin 3，Ets-1，and vascular endothelial growth factor expression in oral precancerous and cancerous lesions： correlation with microvessel density，progression，and prognosis〔J〕.Clin Cancer Res，2005；11(6)：2272-84.

8趙 璟,方小玲，龔穎萍.子宮肌瘤中IGF-Ⅱ、PCNA的表達(dá)及意義〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2012；22(21)：37-40.

9于曉謨.前列腺癌Bcl-2、p53和PCNA表達(dá)的研究〔J〕.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2010；19(36)：4665-7.