五鶴續斷多糖對大鼠糖尿病腎病的防治作用

王振富 鐘 靈 楊付明

(湖北民族學院醫學院，湖北 恩施 445000)

糖尿病腎病(DN)是糖尿病常見的并發癥之一，也是糖尿病死亡的主要因素。目前尚無療效確切的西藥可延緩其病程的發展，因此，用中藥防治DN的研究備受人們關注。研究表明黃芪等中藥有防治DN的作用〔1〕。五鶴續斷因其生長于湖北省五峰及鶴峰兩縣境內而得名，屬于川續斷科植物，并且是川續斷中的優質品，藥用部位為其干燥根，具有補肝益腎、續接筋骨、抗骨質疏松、止血安胎等功效，臨床上主要用于治療腰膝酸軟，跌打損傷，骨折，腰椎骨質增生，先兆性流產和習慣性流產等癥狀〔2〕。現代藥理學研究顯示五鶴續斷具有增強免疫力、抗氧化和延緩衰老的作用〔3〕，但在防治DN方面的實驗研究未見報道。五鶴續斷多糖是五鶴續斷的主要高效活性成分之一，本實驗旨在探討五鶴續斷多糖對大鼠DN的作用及機制。

1 材料與方法

1.1主要試劑和儀器 鏈脲佐菌素(STZ)購于Sigma公司；氫化可的松注射液購于山西晉新雙鶴藥液有限公司；苯那普利(洛汀新)購于北京諾華制藥有限公司。Beckman全自動生化分析儀(湖北民族學院附屬民大醫院)，TGL-16G 高速臺式離心機(上海安亭儀器廠)，DL-50型超級恒溫器，F-160型藥物粉碎機(北京市永光明醫療儀器廠)，RE52-3旋轉蒸發器(上海滬西分析儀器廠)。

1.2五鶴續斷多糖提取物的制備 五鶴續斷由恩施自治州中藥材生產GAP 示范基地提供。取五鶴續斷干燥根1 kg，用粉碎機打成粉末，過60目篩。提取工藝流程參照武蕓等〔4〕：石油醚脫脂-熱水浸提-水提液過濾-冷凍濃縮-乙醇沉淀多糖-sevage試劑去蛋白-冷凍干燥-測定含量。

1.3實驗動物分組、造模及處理〔5〕純種SD大鼠，體重220～250 g，由湖北民族學院實驗動物中心提供。將40只SD大鼠隨機分為4組，每組10只(雌雄各5只)：對照組、模型組、苯那普利組和五鶴續斷多糖組。參照文獻〔5〕，采用STZ(60 mg/kg 1次腹腔注射)和氫化可的松制作DN大鼠模型,造模完成后每天定時灌胃：對照組和模型組給予蒸餾1 ml·kg-1·d-1灌胃;苯那普利組給予苯那普利溶液1.5 mg·kg-1·d-1灌胃；五鶴續斷多糖組給予五鶴續斷多糖溶液1 ml ·kg-1·d-1灌胃。實驗第8周統一處死大鼠。處死前將大鼠置洗凈的金屬代謝籠收集24 h尿，留尿期間禁食，不禁水，記錄尿量后取5 ml，5 000 r/min離心5 min,將上清液保存于-70℃冰箱待測。稱量大鼠體重后,用戊巴比妥溶液40 mg/kg 腹腔內注射麻醉,經腹主動脈采血6 ml， 常溫下5 000 r/ min 離心10 min 分離血清，置于-70℃冰箱保存待測。取出雙腎,以4℃0.85%氯化鈉洗凈，小心剝去腎包膜，以4℃0.85%氯化鈉沖洗腎血管3次以上。微量電子天平稱量雙腎重。

1.4血、尿生化指標測定 血糖(PG)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)采用Beckman 全自動生化分析儀測定,并計算內生肌酐排泄率(Ccr),Ccr(ml/min)= 尿肌酐濃度×每分鐘尿量/血漿肌酐濃度；β2-微球蛋白(β2-MG)水平采用放射免疫法測定；24 h尿微量清蛋白排泄率(UAER)= 尿清蛋白水平(mg/ml)×24 h 尿量(ml)。

1.5統計學方法 采用SPSS15.0軟件進行配對t檢驗。

2 結 果

2.1五鶴續斷多糖對DN大鼠腎重/體重、PG及血脂的影響 與對照組比較，模型組大鼠腎重/體重明顯增加，PG、血脂增高(P<0.01)；與模型組比較，五鶴續斷多糖能明顯降低模型大鼠腎重/體重、PG及血脂(P<0.01)，見表1。

2.2五鶴續斷多糖對DN大鼠腎功能的影響 與對照組比較，模型組大鼠出現明顯腎衰竭(P<0.01)，與模型組比較，五鶴續斷多糖能明顯改善腎功能(P<0.01)，見表2。

表1 五鶴續斷多糖對DN大鼠腎重/體重、及血脂的影響

表2 五鶴續斷多糖對DN大鼠腎功能的影響

3 討 論

DN早期病理特點為腎小球肥大、腎小球和腎小管基底膜增厚以及系膜外基質進行性積聚；其后期為腎小球和腎小管纖維化，并最終導致蛋白尿和腎衰竭。DN的發病機制較為復雜，目前尚不完全明了。大多數學者人為：腎血流動力學改變、糖代謝紊亂及由此所致的非酶糖基化、多元醇通路激活、血管活性物質及細胞因子激活、氧化應激、蛋白激酶C激活、腎病蛋白、脂代謝紊亂、遺傳等因素有關〔6〕。DN的治療采用一體化治療原則：嚴格控制高血糖、高血壓、糾正脂代謝紊亂、逆轉胰島素抵抗、減少蛋白尿、保護腎功能和積極治療并發癥。雖然這些措施可以減緩蛋白尿的增加和腎功能減退,降低病死率,但DN的治療仍然是一個巨大的難題,更有效的治療措施和新藥的研發迫在眉睫〔7〕。研究表明：黃芪、冬蟲夏草等中藥具有防止DN的作用〔8〕。本實驗結果表明：五鶴續斷多糖具有增加腎重/體重、降低血糖和血脂及減緩腎衰竭的作用?？赡軝C制為：雙向調節血糖、抑制一氧化氮(NO)合成、擴張血管、改善微循環、降低血漿滲透壓和血液黏度、調節脂代謝的作用,能增加腎血流量,減輕脂質在腎小球和腎間質的沉積和微血栓的形成,還能改善腎功能、防止腎小球硬化，但其具體機制還有待于進一步研究。

4 參考文獻

1閆凌云，楊叔禹，李學軍.黃芪多糖對糖尿病腎病防治機制的研究進展〔J〕.醫學綜述,2012；18(11)：1727-9.

2全國中草藥匯編寫組.全國中草藥匯編(下冊)〔M〕.北京：人民衛生出版社，2000：135.

3艾明仙.五鶴續斷注射液對大鼠學習記憶及抗氧化酶的影響〔J〕.中國老年學雜志，2007；6(11):1044-6.

4武 蕓，丁 莉.五鶴續斷多糖的提取及動態分布規律的研究〔J〕.時珍國醫國藥，2009；20(6):1325-6.

5陳小野.實用中醫征候動物模型〔M〕.北京：北京醫科大學·中國協和醫科大學聯合出版社,1993：100-5.

6廖 鈺,夏 寧.糖尿病腎病發病機制研究進展〔J〕.醫學綜述,2011；17(22)：3453-5.

7方岐瑩，邵鳳民.糖尿病腎病的發病機制及治療新進展〔J〕.實用診斷與治療雜志，2008；22(3)：201-3.

8張 穎，苗明三.糖尿病腎病動物模型及中醫藥治療特點〔J〕.中醫學報，2011；26(3)：329-32.