治郁顆粒活性成分大鼠體內分布的研究

張煒煜，孫敬蒙，葉豆丹

(長春中醫藥大學，長春 130117)

治郁顆?；钚猿煞执笫篌w內分布的研究

張煒煜，孫敬蒙，葉豆丹*

(長春中醫藥大學，長春 130117)

目的 觀察采用經典強迫游泳試驗確定治郁顆粒的最佳給藥劑量及高效液相色譜法，以芍藥苷的含量為內標物，研究治郁顆粒活性成分梔子苷在大鼠體內各組織臟器中的分布。方法 以4種劑量小鼠灌胃給予治郁顆粒混懸液，以4 min內累計不動時間為考察指標，確定藥物的最佳給藥劑量。治郁顆?；鞈乙?.02 g/mL灌胃給予大鼠，給藥劑量為0.10 mL/kg體質量，連續給藥4 d。結果 確定藥物的濃度為0.02 g/mL為最佳給藥濃度，即小鼠劑量為0.2 g/kg體質量，換算成人的服用量為每日4.4 g/60 kg。大鼠末次給藥45 min后，各組織及血液中均檢出梔子苷，各臟器中梔子苷含量大小順序為肝＞腎＞肺＞脾＞血＞心＞腦，其中腦組織梔子苷含量為(1.223±0.277)μg/g。結論 該方法穩定、可行，方中活性成分梔子苷能通過血腦屏障，為治郁顆粒的抗抑郁機制提供了理論依據。

治郁顆粒;活性成分;高效液相色譜法;大鼠

治郁顆粒是在長春中醫藥大學附屬醫院趙建軍教授20多年來的經驗方劑基礎上研制而成，由梔子、郁金、黃連等藥材組成，具有疏肝解郁，清肝瀉火之功效。其活性成分梔子苷可以降低腦缺血型大鼠腦內TNF-α、IL-1β和ICAM-1等炎性因子的表達，減輕腦缺血對腦神經元的損害，從而對腦神經元起到保護作用［1-3］。本文采用經典強迫游泳試驗確定治郁顆粒的最佳給藥劑量，對灌胃給藥后梔子苷在大鼠各組織臟器及血液中的含量進行測定，研究其體內的分布規律，為深入研究治郁顆粒抗抑郁的機制提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 材料 治郁顆粒混懸液(自治)，梔子苷對照品和芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110749-200714、110736-200934)，乙腈和甲醇(Sigma公司)，哇哈哈純凈水(娃哈哈集團有限公司)，舒肝解郁膠囊(成都康弘制藥有限公司，批號:20110802)。昆明種小鼠體質量(20±2)g、SD大鼠體質量(200±2)g，雌雄各半，由長春高新醫用實驗動物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 采用經典強迫游泳試驗篩選治郁顆粒最佳給藥劑量 取昆明種小鼠 72只，雄性，體質量(20±2)g，隨機分成6組，分別為空白組，陽性對照組，給藥1～4組，每組12只;陽性對照組灌胃給予舒肝解郁膠囊混懸液，給藥1～4組分別灌胃給予濃度為0.20，0.10，0.05，0.02 g/mL 治郁顆?；鞈乙?，給藥劑量均為0.10 mL/kg體質量，空白對照組小鼠灌胃給予等量生理鹽水。1次/d，連續7 d。末次給藥后1 h進行試驗。將小鼠單個放入高20 cm、直徑18 cm、水深10 cm、水溫(25±2)℃水缸中，觀察6 min，適應2 min，記錄后4 min內累計不動時間(s)，采用t檢驗進行組間比較。

1.2.2 測定治郁顆粒主要活性成分體內分布規律取SD大鼠24只，雄性，體質量(20±2)g，隨機分為2組，每組12只，分別為空白組和治郁顆粒組，治郁顆粒組灌胃給最佳劑量的治郁顆粒混懸液，給藥劑量為0.10 mL/kg體質量，空白組給以等量生理鹽水，連續給藥4 d。末次給藥45 min后，將大鼠斷頭處死，取各臟器及血液，計算各臟器及血液中治郁顆粒活性成分梔子苷的含量。

2 結果

2.1 治郁顆粒最佳給藥劑量 見表1。

2.2 治郁顆粒主要活性成分體內分布規律 見表2。

表1 治郁顆粒對小鼠游泳不動時間的影響(±s，n=12)

表1 治郁顆粒對小鼠游泳不動時間的影響(±s，n=12)

注:與空白對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組 別 劑量/(g/mL) 游泳不動時間/s空白對照組 — 124.88±40.47陽性對照組 0.01 82.86±24.92#給藥組1 0.20 70.38±15.86##給藥組2 0.10 73.37±19.21##給藥組3 0.05 80.86±23.54#給藥組4 0.02 82.30±13.74##

表2 大鼠各臟器及血液梔子苷含量測定結果(±s，n=12)μg/g

表2 大鼠各臟器及血液梔子苷含量測定結果(±s，n=12)μg/g

臟器 梔子苷含量 臟器 梔子苷含量心3.676±0.526 腎5.519±1.223肝7.286±1.856 腦 1.223±0.277脾4.387±1.126 血 4.256±1.641肺4.835±1.793

3 小結

梔子苷的體內分析方法國內僅有少數報道。有學者在給大鼠灌胃給藥后將動物臟器勻漿，取勻漿液經吸附樹脂純化后測定其中梔子苷含量。該方法操作相對繁瑣，干擾因素較多，對試驗結果影響較大。也有學者［4-7］將臟器勻漿后離心，取上清液，揮干，以HPLC檢查時的流動相將殘渣溶解，測定含量，雖操作相對簡單，并能保證梔子苷的濃度，但是如果使用的是混合流動相，在溶解殘渣的過程中流動相的比例可能發生變化，有可能對試驗結果造成影響。本試驗中所建立的梔子苷的體內分析方法方便快捷，專屬性強，重復性好，為同類試驗提供了一定參考。

:

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［2］汪玉芳.心達欣膠囊對抑郁模型小鼠行為學的影響及抗抑郁作用機理的研究［D］.廣州:暨南大學，2009.

［3］晏艷，馮芳，王丹.梔子厚樸湯抗抑郁活性成分的研究［J］.藥學進展，2010，34(6):275-280.

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［5］王巧明，楊建瑜，焦海勝，等.梔子中梔子苷家兔藥動學研究［J］.中國新藥雜志，2009，18(11):1047-1049.

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Active ingredient ofZhiyu Particlesdistribution in rats

ZHANG Weiyu，SUN Jingmeng，YE Doudan*
(Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China)

Abstract:ObjectiveUsing the forced swimming test to determine the optimum dosage ofZhiyu Particles，using high performance liquid chromatography，with paeoniflorin as internal standard，to study the jasminoidin distribution in rats，that was active ingredient ofZhiyu particles.MethodsWith 4 different dosages mice were orally administeredZhiyu Particles，suspension，4 min motionless time as the indexes，determine the best concentration.With 0.02 g·mLZhiyu Particles，suspen-sion，administered at a dose of 0.10 mL·kg bw，was best，the mice at a dose of 0.2 g·kg bw，dose conversion of 4.4 g/60(kg·d)for continuous administration for 4 Days.ResultsThe drug concentration of 0.02 g·mL adult.45 min after the last administration，the organization of jasminoidin was detected，the order is kidney ＞kidney＞lungs＞spleen＞blood＞heart＞brain，the content of jasminoidin in brain tissue was(1.223±0.277)μg/g，to prove the active ingredients in the prescription can pass the blood-brain barrier.Conclusion the result provides a theoretical basis for antidepressant mechanism ofZhiyu Particles.

Key words:Zhiyu Particles;active component;HPLC;rat

R285.5

A

2095－6258(2014)04－0596－02

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.04.012

吉林省中醫藥管理局中醫藥科技項目(2012-075)。

張煒煜(1963－)，女，教授，博士研究生導師。研究方向:藥物新劑型與新技術研究。

葉豆丹，女，碩士，副教授，電話:0431-86172289，電子信箱:807783067@qq.com。

(

2014－03－24)