蕎麥黃酮復合物的抗真菌性陰道炎研究

姜妍+王妍+金玲+韓淑英

摘 要：為了觀察蕎麥黃酮復合物對小鼠真菌性陰道炎的影響，本文采用了體外實驗MTT法評價蕎麥黃酮復合物對白色念珠菌的抑制作用以及體內試驗鏡檢陰道上皮脫落細胞數目。與模型對照組相比，各治療組均可以使白色念珠菌減少且陰道上皮細胞脫落減少。蕎麥黃酮復合物高劑量與中藥潔爾陰洗液療效相近似。由此得知，蕎麥黃酮復合物具有抑制白色念珠菌生長的能力，并且可以減少陰道上皮細胞的脫落。

關鍵詞：蕎麥黃酮復合物；抗菌活性；白色念珠菌性陰道炎

一、材料

雌性SPF級昆明小鼠（天津市山川紅實驗動物科技有限公司）；唐山市開灤醫院檢驗科提供白色念珠菌臨床新分離菌株；蕎麥黃酮復合物（課題組成員已獲得專利）采用正交試驗法以水加分離劑（殼聚糖）技術從蕎麥花葉提取的黃酮成分為主，配伍葛根、天花粉、麥冬、玄參和麻仁的水提物制成；顯微鏡（常州銳品精密儀器有限公司）、流式細胞儀（Sigma公司）。

二、方法

1.體外實驗。取12支10ml滅菌試管。每支試管加入1.0ml培養基和1.0ml藥液（蕎麥黃酮復合物，西藥對照氟康唑和中藥對照潔爾陰），分別采用試管二倍稀釋法，稀釋倍數為：1：2～1：512。第11管不加菌液作為空白對照，第12管作為陽性對照。

2.體內實驗。將110只昆明雌性小鼠隨機挑出15只做空白對照組。剩余60只隔日皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1ml·d-1使小鼠處于假發情狀態，6天后將密度為2.5×106cfu·mL-1的菌懸液20·L（即白色念珠菌孢子接種量為5×104cfu），灌注入小鼠陰道內。在接種白色念珠菌孢子后第2與第5天對小鼠進行模型鑒定。將造模成功的50只小鼠進行隨機分組：模型對照組、西藥氟康唑組、中藥潔爾陰洗液對照組、蕎麥黃酮復合物高劑量組、蕎麥黃酮復合物中劑量組及蕎麥黃酮復合物低劑量組。

三、指標檢測

1.體外實驗。采用MTT法，應用流式細胞儀，檢測各實驗組白色念珠菌數目。

2.體內試驗。于實驗結束時，用100ul PBS灌洗陰道5～6次，取10μl灌洗液置于清潔玻片上，鏡檢陰道上皮脫落細胞數。頸椎脫臼處死小鼠后，取陰道粘膜，Western-Blot法檢測各組IGFBP7蛋白含量。

四、統計分析方法

采用SPSSl6.0統計軟件處理數據。計量資料以表示。統計結果分別采用卡方檢驗和t檢驗進行數據處理，P<0.05作為顯著性界限。

五、結果

1.體外實驗結果。表1顯示，正常對照組無白色念珠菌。模型組含有大量白色念珠菌（P<0.01）。中、西陽性藥物及蕎麥黃酮復合物高劑量組白色念珠菌數目明顯減少。蕎麥黃酮復合物高劑量與中藥潔爾陰洗液對照組作用相近（P<0.01）。

表1蕎麥黃酮復合物對白色念珠菌數的影響

■

1p<0.05vs正常，2p<0.01vs 正常，3p<0.05vs 模型，4p<0.01vs模型

2.體內實驗結果。各組小鼠陰道灌洗液脫落上皮細胞檢查結果：見表2。

表2 蕎麥黃酮復合物對陰道上皮脫落細胞數的影響

■

注：統計方法采用卡方檢驗。χ2=24.263，ν=6，P<0.005，差異有顯著性意義，可以認為七組藥物對小鼠陰道上皮脫落細胞抑制有差別。

六、討論

目前的研究表明，白念珠菌為該病的主要致病菌，妊娠、口服避孕藥物、糖尿病、使用抗生素以及免疫抑制劑導致的菌群失調與該病關系十分密切。迄今為止，臨床對本病的治療重點還是西醫抗真菌藥物直接殺滅病原菌，如氟康唑、制霉菌素等。藥物的毒副作用和菌株的耐藥性成為一個潛在的問題。隨著對本病認識的深入以及醫學微生態學的研究，出現了新的替代療法：沖洗療法、乳酸桿菌、硼酸及大蒜素治療等。但是，由于藥物帶來的副作用或者使用的不便利性，一直沒有廣泛應用于臨床。近年來，我國醫學不斷發展，中藥制劑新劑型不斷涌現，許多學者應用念珠菌動物模型，對中藥制劑的安全性及有效性進行了研究。本次試驗體內試驗證實蕎麥黃酮復合物具有逆轉陰道上皮細胞脫落的作用，并且體外實驗證明其可以抑制白色念珠菌生長。而在藥物的副作用及遠期療效方面的研究不夠深入。在以后的工作中，還可以篩選劑型穩定、效高、價廉、副作用少、順應性好的藥物進行廣泛、多層次研究，以更好地服務于患者。

摘 要：為了觀察蕎麥黃酮復合物對小鼠真菌性陰道炎的影響，本文采用了體外實驗MTT法評價蕎麥黃酮復合物對白色念珠菌的抑制作用以及體內試驗鏡檢陰道上皮脫落細胞數目。與模型對照組相比，各治療組均可以使白色念珠菌減少且陰道上皮細胞脫落減少。蕎麥黃酮復合物高劑量與中藥潔爾陰洗液療效相近似。由此得知，蕎麥黃酮復合物具有抑制白色念珠菌生長的能力，并且可以減少陰道上皮細胞的脫落。

關鍵詞：蕎麥黃酮復合物；抗菌活性；白色念珠菌性陰道炎

一、材料

雌性SPF級昆明小鼠（天津市山川紅實驗動物科技有限公司）；唐山市開灤醫院檢驗科提供白色念珠菌臨床新分離菌株；蕎麥黃酮復合物（課題組成員已獲得專利）采用正交試驗法以水加分離劑（殼聚糖）技術從蕎麥花葉提取的黃酮成分為主，配伍葛根、天花粉、麥冬、玄參和麻仁的水提物制成；顯微鏡（常州銳品精密儀器有限公司）、流式細胞儀（Sigma公司）。

二、方法

1.體外實驗。取12支10ml滅菌試管。每支試管加入1.0ml培養基和1.0ml藥液（蕎麥黃酮復合物，西藥對照氟康唑和中藥對照潔爾陰），分別采用試管二倍稀釋法，稀釋倍數為：1：2～1：512。第11管不加菌液作為空白對照，第12管作為陽性對照。

2.體內實驗。將110只昆明雌性小鼠隨機挑出15只做空白對照組。剩余60只隔日皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1ml·d-1使小鼠處于假發情狀態，6天后將密度為2.5×106cfu·mL-1的菌懸液20·L（即白色念珠菌孢子接種量為5×104cfu），灌注入小鼠陰道內。在接種白色念珠菌孢子后第2與第5天對小鼠進行模型鑒定。將造模成功的50只小鼠進行隨機分組：模型對照組、西藥氟康唑組、中藥潔爾陰洗液對照組、蕎麥黃酮復合物高劑量組、蕎麥黃酮復合物中劑量組及蕎麥黃酮復合物低劑量組。

三、指標檢測

1.體外實驗。采用MTT法，應用流式細胞儀，檢測各實驗組白色念珠菌數目。

2.體內試驗。于實驗結束時，用100ul PBS灌洗陰道5～6次，取10μl灌洗液置于清潔玻片上，鏡檢陰道上皮脫落細胞數。頸椎脫臼處死小鼠后，取陰道粘膜，Western-Blot法檢測各組IGFBP7蛋白含量。

四、統計分析方法

采用SPSSl6.0統計軟件處理數據。計量資料以表示。統計結果分別采用卡方檢驗和t檢驗進行數據處理，P<0.05作為顯著性界限。

五、結果

1.體外實驗結果。表1顯示，正常對照組無白色念珠菌。模型組含有大量白色念珠菌（P<0.01）。中、西陽性藥物及蕎麥黃酮復合物高劑量組白色念珠菌數目明顯減少。蕎麥黃酮復合物高劑量與中藥潔爾陰洗液對照組作用相近（P<0.01）。

表1蕎麥黃酮復合物對白色念珠菌數的影響

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1p<0.05vs正常，2p<0.01vs 正常，3p<0.05vs 模型，4p<0.01vs模型

2.體內實驗結果。各組小鼠陰道灌洗液脫落上皮細胞檢查結果：見表2。

表2 蕎麥黃酮復合物對陰道上皮脫落細胞數的影響

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注：統計方法采用卡方檢驗。χ2=24.263，ν=6，P<0.005，差異有顯著性意義，可以認為七組藥物對小鼠陰道上皮脫落細胞抑制有差別。

六、討論

目前的研究表明，白念珠菌為該病的主要致病菌，妊娠、口服避孕藥物、糖尿病、使用抗生素以及免疫抑制劑導致的菌群失調與該病關系十分密切。迄今為止，臨床對本病的治療重點還是西醫抗真菌藥物直接殺滅病原菌，如氟康唑、制霉菌素等。藥物的毒副作用和菌株的耐藥性成為一個潛在的問題。隨著對本病認識的深入以及醫學微生態學的研究，出現了新的替代療法：沖洗療法、乳酸桿菌、硼酸及大蒜素治療等。但是，由于藥物帶來的副作用或者使用的不便利性，一直沒有廣泛應用于臨床。近年來，我國醫學不斷發展，中藥制劑新劑型不斷涌現，許多學者應用念珠菌動物模型，對中藥制劑的安全性及有效性進行了研究。本次試驗體內試驗證實蕎麥黃酮復合物具有逆轉陰道上皮細胞脫落的作用，并且體外實驗證明其可以抑制白色念珠菌生長。而在藥物的副作用及遠期療效方面的研究不夠深入。在以后的工作中，還可以篩選劑型穩定、效高、價廉、副作用少、順應性好的藥物進行廣泛、多層次研究，以更好地服務于患者。

摘 要：為了觀察蕎麥黃酮復合物對小鼠真菌性陰道炎的影響，本文采用了體外實驗MTT法評價蕎麥黃酮復合物對白色念珠菌的抑制作用以及體內試驗鏡檢陰道上皮脫落細胞數目。與模型對照組相比，各治療組均可以使白色念珠菌減少且陰道上皮細胞脫落減少。蕎麥黃酮復合物高劑量與中藥潔爾陰洗液療效相近似。由此得知，蕎麥黃酮復合物具有抑制白色念珠菌生長的能力，并且可以減少陰道上皮細胞的脫落。

關鍵詞：蕎麥黃酮復合物；抗菌活性；白色念珠菌性陰道炎

一、材料

雌性SPF級昆明小鼠（天津市山川紅實驗動物科技有限公司）；唐山市開灤醫院檢驗科提供白色念珠菌臨床新分離菌株；蕎麥黃酮復合物（課題組成員已獲得專利）采用正交試驗法以水加分離劑（殼聚糖）技術從蕎麥花葉提取的黃酮成分為主，配伍葛根、天花粉、麥冬、玄參和麻仁的水提物制成；顯微鏡（常州銳品精密儀器有限公司）、流式細胞儀（Sigma公司）。

二、方法

1.體外實驗。取12支10ml滅菌試管。每支試管加入1.0ml培養基和1.0ml藥液（蕎麥黃酮復合物，西藥對照氟康唑和中藥對照潔爾陰），分別采用試管二倍稀釋法，稀釋倍數為：1：2～1：512。第11管不加菌液作為空白對照，第12管作為陽性對照。

2.體內實驗。將110只昆明雌性小鼠隨機挑出15只做空白對照組。剩余60只隔日皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1ml·d-1使小鼠處于假發情狀態，6天后將密度為2.5×106cfu·mL-1的菌懸液20·L（即白色念珠菌孢子接種量為5×104cfu），灌注入小鼠陰道內。在接種白色念珠菌孢子后第2與第5天對小鼠進行模型鑒定。將造模成功的50只小鼠進行隨機分組：模型對照組、西藥氟康唑組、中藥潔爾陰洗液對照組、蕎麥黃酮復合物高劑量組、蕎麥黃酮復合物中劑量組及蕎麥黃酮復合物低劑量組。

三、指標檢測

1.體外實驗。采用MTT法，應用流式細胞儀，檢測各實驗組白色念珠菌數目。

2.體內試驗。于實驗結束時，用100ul PBS灌洗陰道5～6次，取10μl灌洗液置于清潔玻片上，鏡檢陰道上皮脫落細胞數。頸椎脫臼處死小鼠后，取陰道粘膜，Western-Blot法檢測各組IGFBP7蛋白含量。

四、統計分析方法

采用SPSSl6.0統計軟件處理數據。計量資料以表示。統計結果分別采用卡方檢驗和t檢驗進行數據處理，P<0.05作為顯著性界限。

五、結果

1.體外實驗結果。表1顯示，正常對照組無白色念珠菌。模型組含有大量白色念珠菌（P<0.01）。中、西陽性藥物及蕎麥黃酮復合物高劑量組白色念珠菌數目明顯減少。蕎麥黃酮復合物高劑量與中藥潔爾陰洗液對照組作用相近（P<0.01）。

表1蕎麥黃酮復合物對白色念珠菌數的影響

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1p<0.05vs正常，2p<0.01vs 正常，3p<0.05vs 模型，4p<0.01vs模型

2.體內實驗結果。各組小鼠陰道灌洗液脫落上皮細胞檢查結果：見表2。

表2 蕎麥黃酮復合物對陰道上皮脫落細胞數的影響

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注：統計方法采用卡方檢驗。χ2=24.263，ν=6，P<0.005，差異有顯著性意義，可以認為七組藥物對小鼠陰道上皮脫落細胞抑制有差別。

六、討論

目前的研究表明，白念珠菌為該病的主要致病菌，妊娠、口服避孕藥物、糖尿病、使用抗生素以及免疫抑制劑導致的菌群失調與該病關系十分密切。迄今為止，臨床對本病的治療重點還是西醫抗真菌藥物直接殺滅病原菌，如氟康唑、制霉菌素等。藥物的毒副作用和菌株的耐藥性成為一個潛在的問題。隨著對本病認識的深入以及醫學微生態學的研究，出現了新的替代療法：沖洗療法、乳酸桿菌、硼酸及大蒜素治療等。但是，由于藥物帶來的副作用或者使用的不便利性，一直沒有廣泛應用于臨床。近年來，我國醫學不斷發展，中藥制劑新劑型不斷涌現，許多學者應用念珠菌動物模型，對中藥制劑的安全性及有效性進行了研究。本次試驗體內試驗證實蕎麥黃酮復合物具有逆轉陰道上皮細胞脫落的作用，并且體外實驗證明其可以抑制白色念珠菌生長。而在藥物的副作用及遠期療效方面的研究不夠深入。在以后的工作中，還可以篩選劑型穩定、效高、價廉、副作用少、順應性好的藥物進行廣泛、多層次研究，以更好地服務于患者。