試析血管內皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子在人胃癌組織中的表達

吳永勇

【摘要】 目的：分析探討血管內皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子在人胃癌組織中的表達情況。方法：選取來本院就診的36例胃癌患者，采用免疫組化SP法檢測患者胃癌組織中血管內皮抑素和堿性成纖維細胞生長因子的表達水平。結果：發生淋巴結轉移和未發生淋巴結轉移胃癌患者其胃癌組織中的血管內皮抑素陽性表達率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細胞生長因子陽性表達率分別為93.3%、61.9%，差異均有統計學意義（P<0.05）。結論：血管內皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子是人胃癌組織腫瘤血管的生成過程中的重要調節因子，兩者的消長關系可能與胃癌的發生發展等生物學行為相關。

【關鍵詞】 血管內皮抑素； 堿性成纖維細胞生長因子； 胃癌

【Abstract】 Objective：To investigate and analyze the expression of somatostatin and alkaline endothelial fibroblast growth factor in human gastric cancer.Method：36 patients with gastric cancer in our hospital were selected，they were detected by immunohistochemical SP method in patients with gastric cancer tissue endostatin and basic fibroblast growth factor expression.Result：The positive expression of endostatin in lymph node metastasis and no lymph node metastasis in gastric cancer patients with gastric carcinoma were 46.7%，81.0%，respectively.Basic fibroblast growth factor expression rates were 93.3%，61.9%，the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion：Somatostatin and alkaline endothelial fibroblast growth factor are the important regulator of tumor angiogenesis in human gastric cancer tissue generation process in the growth，the relationship between them may be related to the occurrence and development of the biological behavior of gastric carcinoma.

【Key words】 Endostatin； Basic fibroblast growth factor； Gastric cancer

First-authors address：The People's Hospital of Heyuan City，Heyuan 517000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.22.052

胃癌是最為常見的消化系統惡性腫瘤之一，具有較高的發病率以及致死率，對人類健康及生命造成嚴重的影響[1-2]。因此，胃癌的早期診斷以及監測其浸潤轉移具有重要的臨床意義。研究證實，腫瘤的生長和轉移依賴于血管生成，而血管生成的過程是被血管生成促進因子和抑制因子的平衡所調控的[3-6]。堿性成纖維細胞生長因子是一種存在于胞質中的血管生成促進因子，可通過自分泌或者旁分泌的方式參與腫瘤血管生成的調節[7-8]。而血管內皮抑素是1997年發現的一種血管生成抑制因子，可通過直接作用于VEGF受體Flt-1或KDR阻斷VEGF受體及下游分子磷酸化來抑制腫瘤血管生成[9-11]。本研究采用免疫組化SP法檢測患者胃癌組織中血管內皮抑素和堿性成纖維細胞生長因子的表達水平，旨在分析探討兩者在胃癌的發生發展過程中的相互關系，為胃癌的早期診斷及治療提供有價值的參考依據，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年5月-2013年10月在本院就診的胃癌患者36例，其中男20例，女16例，年齡23～76歲，平均（56.50±3.15）歲；伴有淋巴結轉移患者15例，無淋巴結轉移患者21例；高分化16例，低分化20例。

1.2 方法 對36例患者手術切除的胃癌組織用10%的福爾馬林固定，用石蠟包埋，然后做4μm厚切片。采用免疫組化SP法檢測患者胃癌組織中血管內皮抑素和堿性成纖維細胞生長因子的表達水平。具體步驟如下：（1）將切邊脫蠟水化：將切片置于60 ℃烤箱中烤片60 min，用二甲苯及梯度酒精逐級脫蠟，然后置于雙蒸水中中分水化5 min，用PBS沖洗切片3次，5 min/次。（2）每張切片滴加過氧化氫溶液50 μL，室溫孵育10 min，用PBS沖洗切片3次，3 min/次。（3）將切片浸于檸檬酸緩沖溶液中，置于微波爐中，加熱至沸騰后，關閉微波爐，10 min后，再次置于微波爐中加熱至沸騰。然后取出，待冷卻至室溫后，用PBS沖洗切片3次，3 min/次。（4）甩棄切片上的PBS溶液，每張切片滴加羊血清50 μL，室溫孵育15 min。（5）棄去多余血清，每張切片加相應一抗50 μL，

4 ℃孵育過夜。（6）棄去一抗，用PBS沖洗切片3次，5 min/次。甩棄PBS，每張切片加相應二抗50 μL，室溫孵育30 min。用PBS沖洗切片3次，3 min/次。（7）甩棄PBS溶液，每張切片加鏈霉菌-親和素50 μL，室溫孵育30 min。用PBS沖洗切片3次，3 min/次。（8）DAB顯色，水洗終止。（9）蘇木精復染90 s～2 min。（10）梯度酒精脫水后，二甲苯透明，然后用中性樹膠進行封片。endprint

1.3 觀察指標 對于血管內皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子采用半定量標準進行陽性判斷，即依據細胞染色強度以及染色細胞所占的面積之和進行判斷[12]。血管內皮抑素蛋白陽性判定：血管內皮抑素蛋白為胞漿著色。陽性細胞染色評分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕褐色為3分。血管內皮抑素染色細胞面積評定：陰性為0分，<25%細胞著色為1分，25%～50%細胞著色為2分，>50%細胞著色為3分。堿性成纖維細胞生長因子染色細胞面積評定：陰性為0分，10%細胞著色為1分，11%～50%細胞著色為2分，>50%細胞著色為3分。若細胞染色強度以及染色細胞所占的面積之和>2，則為陽性表達，≤2則為陰性表達[13]。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數據進行統計分析，計數資料采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

經免疫組化染色發現，不同分化程度的胃癌組織中血管內皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子的表達均無顯著性差異。發生淋巴結轉移和未發生淋巴結轉移胃癌患者其胃癌組織中的血管內皮抑素陽性表達率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細胞生長因子陽性表達率分別為93.3%、61.9%，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

3 討論

血管內皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子是胃癌血管生成過程中的兩個重要的調節因子[12-13]。本研究中發現，伴有淋巴結轉移和未發生淋巴結轉移胃癌患者其胃癌組織中的血管內皮抑素陽性表達率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細胞生長因子陽性表達率分別為93.3%、61.9%，差異均有統計學意義（P<0.05）。伴淋巴結轉移的胃癌組織中，血管內皮抑素的陽性表達率低（46.7%），而堿性成纖維細胞生長因子的陽性表達率高（93.9%）；無淋巴結轉移的胃癌組織中血管內皮抑素的陽性表達率高（81.0%），而堿性成纖維細胞生長因子的陽性表達率低（61.9%），這表明，兩者的消長關系可能與胃癌的發生發展等生物學行為相關。

參考文獻

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[9]秦艷芳，向春儉，楊紅宇，等.堿性成纖維細胞生長因子與腫瘤[J].國外醫學：腫瘤學分冊，2001，28（4）：256-259.

[10]劉棟才，李永國，楊竹林，等.VEGFmRNA和bFGFmRNA在胃癌組織中的表達及其意義[J].湖南醫學，2001，18（6）：410-412.

[11]Rieard-Blum S，Femud O，Lortat-Jacob H，et al.Characterization of endostatin binding to heparin and heparan sulfate by surface plasmon rcsona_rlce and molecular modeling[J].Biol Chem，2004，279（4）：2927-2936.

[12]丁旭青，韓玉培.食管鱗癌p53、TSP-1、VEGF表達與腫瘤血管生成[J].中國腫瘤外科雜志，2009，1（4）：209-211.

[13]陳凜，李濤.胃癌綜合治療現狀與進展[J].世界華人消化雜志，2008，16（6）：571-574.

（收稿日期：2014-05-17） （本文編輯：歐麗）endprint

1.3 觀察指標 對于血管內皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子采用半定量標準進行陽性判斷，即依據細胞染色強度以及染色細胞所占的面積之和進行判斷[12]。血管內皮抑素蛋白陽性判定：血管內皮抑素蛋白為胞漿著色。陽性細胞染色評分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕褐色為3分。血管內皮抑素染色細胞面積評定：陰性為0分，<25%細胞著色為1分，25%～50%細胞著色為2分，>50%細胞著色為3分。堿性成纖維細胞生長因子染色細胞面積評定：陰性為0分，10%細胞著色為1分，11%～50%細胞著色為2分，>50%細胞著色為3分。若細胞染色強度以及染色細胞所占的面積之和>2，則為陽性表達，≤2則為陰性表達[13]。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數據進行統計分析，計數資料采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

經免疫組化染色發現，不同分化程度的胃癌組織中血管內皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子的表達均無顯著性差異。發生淋巴結轉移和未發生淋巴結轉移胃癌患者其胃癌組織中的血管內皮抑素陽性表達率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細胞生長因子陽性表達率分別為93.3%、61.9%，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

3 討論

血管內皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子是胃癌血管生成過程中的兩個重要的調節因子[12-13]。本研究中發現，伴有淋巴結轉移和未發生淋巴結轉移胃癌患者其胃癌組織中的血管內皮抑素陽性表達率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細胞生長因子陽性表達率分別為93.3%、61.9%，差異均有統計學意義（P<0.05）。伴淋巴結轉移的胃癌組織中，血管內皮抑素的陽性表達率低（46.7%），而堿性成纖維細胞生長因子的陽性表達率高（93.9%）；無淋巴結轉移的胃癌組織中血管內皮抑素的陽性表達率高（81.0%），而堿性成纖維細胞生長因子的陽性表達率低（61.9%），這表明，兩者的消長關系可能與胃癌的發生發展等生物學行為相關。

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[12]丁旭青，韓玉培.食管鱗癌p53、TSP-1、VEGF表達與腫瘤血管生成[J].中國腫瘤外科雜志，2009，1（4）：209-211.

[13]陳凜，李濤.胃癌綜合治療現狀與進展[J].世界華人消化雜志，2008，16（6）：571-574.

（收稿日期：2014-05-17） （本文編輯：歐麗）endprint

1.3 觀察指標 對于血管內皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子采用半定量標準進行陽性判斷，即依據細胞染色強度以及染色細胞所占的面積之和進行判斷[12]。血管內皮抑素蛋白陽性判定：血管內皮抑素蛋白為胞漿著色。陽性細胞染色評分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕褐色為3分。血管內皮抑素染色細胞面積評定：陰性為0分，<25%細胞著色為1分，25%～50%細胞著色為2分，>50%細胞著色為3分。堿性成纖維細胞生長因子染色細胞面積評定：陰性為0分，10%細胞著色為1分，11%～50%細胞著色為2分，>50%細胞著色為3分。若細胞染色強度以及染色細胞所占的面積之和>2，則為陽性表達，≤2則為陰性表達[13]。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數據進行統計分析，計數資料采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

經免疫組化染色發現，不同分化程度的胃癌組織中血管內皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子的表達均無顯著性差異。發生淋巴結轉移和未發生淋巴結轉移胃癌患者其胃癌組織中的血管內皮抑素陽性表達率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細胞生長因子陽性表達率分別為93.3%、61.9%，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

3 討論

血管內皮抑素及堿性成纖維細胞生長因子是胃癌血管生成過程中的兩個重要的調節因子[12-13]。本研究中發現，伴有淋巴結轉移和未發生淋巴結轉移胃癌患者其胃癌組織中的血管內皮抑素陽性表達率分別為46.7%、81.0%。堿性成纖維細胞生長因子陽性表達率分別為93.3%、61.9%，差異均有統計學意義（P<0.05）。伴淋巴結轉移的胃癌組織中，血管內皮抑素的陽性表達率低（46.7%），而堿性成纖維細胞生長因子的陽性表達率高（93.9%）；無淋巴結轉移的胃癌組織中血管內皮抑素的陽性表達率高（81.0%），而堿性成纖維細胞生長因子的陽性表達率低（61.9%），這表明，兩者的消長關系可能與胃癌的發生發展等生物學行為相關。

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[11]Rieard-Blum S，Femud O，Lortat-Jacob H，et al.Characterization of endostatin binding to heparin and heparan sulfate by surface plasmon rcsona_rlce and molecular modeling[J].Biol Chem，2004，279（4）：2927-2936.

[12]丁旭青，韓玉培.食管鱗癌p53、TSP-1、VEGF表達與腫瘤血管生成[J].中國腫瘤外科雜志，2009，1（4）：209-211.

[13]陳凜，李濤.胃癌綜合治療現狀與進展[J].世界華人消化雜志，2008，16（6）：571-574.

（收稿日期：2014-05-17） （本文編輯：歐麗）endprint