腫瘤干細胞標志物CD133和CD117在卵巢癌中的表達及意義

楊麗萍　侯俊德　段愛紅等

[摘 要] 目的：探討腫瘤干細胞標志物CD133與CD117在卵巢癌中的表達及臨床意義。方法：采用免疫組化SP法檢測50例上皮性卵巢癌組織及20例正常卵巢組織中CDl33與CD117的表達情況。結果：（1）上皮性卵巢癌組織中CDl33及CD117的表達較正常卵巢組織明顯增高，組間差異有統計學意義（P<0.05）。（2）低分化卵巢癌組CD133及CD117陽性表達率明顯高于高、中分化組（P<0.05）。（3） Spearman相關性分析顯示CD133表達與CD117的表達有相關性（r=0.364，P=0.04）。結論：高表達的CDl33及CD117可能與上皮性卵巢癌的發生、發展有一定關系。

[關鍵詞] CD133；CD117；卵巢癌；免疫組化

中圖分類號：R737.31 文獻標識碼：A 文章編號：2095-5200（2014）05-008-03

[Abstract] Objective： To investigate expression and significance of CD133 and CD117 as the tumor stem cells markers in the ovarian cancer. Methods： CD133 and Ki67 protein levels were detencted in 50 cases of epithelial ovarian cancer and 20 cases of normal ovarian tissue by immunohistochemistry. Results： （1） The positive expression rates of CD133 and CD117 protein in epithelial ovarian cancer were gradually increased than normal ovarian tissue，and statistical difference was significant（P<0.05）. （2） The expression rate of CD133 and CD117 in poorly differentiated ovarian carcinoma was significantly higher than in high or middle differentiated group（P <0.05）. （3） Spearman correlation analysis showed that the expression of CD133 protein was positively related to that of CD117 protein （r=0.364，P=0.04）. Conclusion： Over-expression of CDl33 and CD117 protein maybe play an important role in the development of epithelial ovarian cancer.

[Key words] CD133；CD117；epithelial ovarian cancer；immunohistochemical

卵巢上皮性癌是女性三大惡性腫瘤之一，由于起病隱匿，進展迅速，多數卵巢癌患者確診時已屬晚期，以至治療困難，預后差，五年生存率在30%左右。本實驗應用免疫組織化學法檢測卵巢上皮性癌組織中腫瘤干細胞標志物CDl33與CD117的表達，探討它們在卵巢上皮性癌發生、發展中的生物作用及其與臨床病理特征之間的關系。探索它們對卵巢癌的臨床指導意義，以期為卵巢癌的診斷與治療奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 研究對象

本研究標本取自邯鄲市中心醫院2012年10月-2013年10月間就診于婦科、初診的上皮性卵巢癌患者50例及同期非卵巢腫瘤疾病行卵巢切除術患者10例。術后標本均經病理確診，病歷完整。年齡32-67歲，其中漿液性腺癌20例，宮內膜樣癌20例、粘液性腺癌10例。組織分化G1、G2、G3級別分別為9例、25例、16例。術前均未行放、化療或服用激素類藥物等。

1.2 方法

所有標本通過10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4um厚連續切片，最后分別進行HE和免疫組化染色。免疫組化采用S-P法，將制好的組織切片，經二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水后行免疫組化染色。操作步驟按試劑盒說明書進行，以PBS代替一抗為陰性對照。

1.3 判斷標準

CDl33蛋白陽性表達主要定位于胞膜和胞漿，表現為胞膜和胞漿內有棕黃色顆粒。顯微鏡下盲法閱片，400×高倍鏡下隨機觀察10個視野，每個視野計數100個細胞中的陽性細胞數。陽性細胞數占癌細胞數的10%以上為陽性，陽性細胞數低于癌細胞總數的10%或癌細胞全部不著色為陰性。CD117陽性細胞為胞膜或胞漿內出現棕黃色顆粒集聚。

1.4 統計方法

運用SPSS14.0統計學軟件對相關數據進行χ2檢驗及Spearman檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CD133與CD117在卵巢上皮性癌及正常卵巢組織中的表達

CD133在正常卵巢上皮組織中陽性表達率為10%，在卵巢上皮性癌中陽性表達率62%，CDl33的陽性表達率在卵巢上皮性癌中明顯高于正常卵巢上皮組織（P<0.05）。CD117在正常卵巢組織中陽性表達率為10%，在卵巢上皮性癌中陽性表達率為76%，CD117的陽性表達率在卵巢上皮性癌中明顯高于正常卵巢上皮組織（P<0.05），見表1。

2.2 卵巢上皮性癌組織中CD133、CD117表達與臨床病理的關系

CDl33蛋白陽性表現為胞膜和胞漿內有棕黃色顆粒，其在卵巢癌的表達情況見圖1，在高分化、中分化、低分化組織中分別為33.3%、56%、87.5%，三者相比有顯著性差異（P<0.05），見表2。

CD117的染色陽性為胞核內出現棕黃色顆粒，其在卵巢癌的表達情況見圖2，在高分化、中分化、低分化組織中分別為55.5%、72%、93.8%，三者相比有顯著性差異（P<0.05），見表2。

2.3 CD133與CD117在卵巢上皮性癌中表達的相關性

卵巢上皮性癌中21例為CD133和CD117共表達，17例為CD117表達陽性而CD133陰性表達，10例CD133陽性表達而CD117陰性表達；采用計數資料的相關分析顯示，CD133與CD117在卵巢上皮性癌中的表達有相關性（r=0.364，P=0.04）。

3 討論

干細胞因子CDl33是一種分子量為120kDa，由865個氨基酸組成的跨膜糖蛋白，它的基因定位于4p15×32。其最早發現于造血干細胞/祖細胞和神經上皮干細胞表面及各類原始細胞如間質干細胞[1]、內皮祖細胞等細胞中有特異表達[2]。研究表明，它在細胞膜形成和生理作用發揮方面有一定作用。隨后發現，一些腫瘤細胞中含CDl33+細胞，包括急慢性淋巴細胞白血病和腦膜膠質瘤等[3-4]，這種細胞只占腫瘤細胞極少一部分，卻具有自我更新、自我分化、自我增殖的能力。動物實驗證實只有這種細胞有致瘤性，而其它大部腫瘤細胞不具備。CDl33+腫瘤干細胞表現為更強的增殖能力和不良的預后，并發現其表達與多種癌干細胞密切相關，故認為CDl33+腫瘤干細胞主宰了腫瘤的惡性表型和浸潤能力[5]。目前CDl33作為腫瘤干細胞標志物的一種，主要用于各種惡性腫瘤干細胞的研究。

CD117又稱c-Kit，是一種酪氨酸激酶。常表達于造血干細胞、生殖細胞、胃腸道Cajal細胞及其對應的腫瘤等[6]，最近研究[7]表明CD117在卵巢癌組織中也有表達。正常情況下c-kit的活化需要配體干細胞因子（stem cell factor，SCF）參與，c-kit與其配體SCF結合形成二聚體，使得酪氨酸激酶及其效應分子磷酸化。磷酸化的酪氨酸位點為胞內底物提供識別、錨靠和結合的部位，使這些底物進一步依次磷酸化，這些效應分子的磷酸化促發細胞間信號的瀑布級聯反應，調控下游底物，包括絲裂原活化蛋白激酶和磷酸肌醇-3激酶（PI3K）等多條信號傳導通路，最終活化胞質內的轉錄因子，從而調節基因表達，控制細胞生長、增殖和分化。CD117的基因突變刺激腫瘤細胞的持續增殖和抗凋亡信號的失控，有利于腫瘤的惡性克隆[8]。研究發現許多腫瘤中有CD117的過表達，如肺癌、乳腺癌，前列腺癌、直腸癌等[9]。 Hassan統計了在5類血液系統腫瘤及16類實體瘤組織中，CDl17的陽性表達率波動于2.3%～100%之間[10]。

大量研究顯示，腫瘤的生物學行為包括增殖、浸潤、轉移、復發等涉及到許多生物因子和蛋白的表達。本研究顯示，卵巢組織中CD133和CD117表達呈正相關，二者表達上調與卵巢癌的發生發展、浸潤、轉移過程相關。通過本研究，我們認為聯合檢測CD133和CD117有利于闡明二者在卵巢腫瘤發生發展、浸潤、轉移中的演變規律，為上皮性卵巢癌早期診斷提供參考依據。

參 考 文 獻

[1] Yu Y，Fuhr J，Boye E，et a1. Mesenchymal stem cells and adipogenesis in Hemangiona involution[J]. Stem Cells，2006，24（6）：1605-l612.

[2] Friedrich EB，Walenta K，Scharlau J，et a1. CD34-/CD133+/VEGFR-2+ endothelial Progenitor cell subpopulation with potent vasoregenerative capacities[J]. Circ Res，2006，98（3）：20-25.

[3] Hall PE，Lathia JD，Miller NG，et a1. Integrins are markers of human neural stem cells[J]. Stem Cells，2006，24（9）：2078-2084.

[4] Waller CF，Martens UM，Lange W. Philadelphia chromosomes-positive cells are equally distributed in AC 133+and AC 133-fractions of CD34+ peripheral blood progenitor cells from patienis with CML[J]. Leukemia，1999，13（9）：1466-1470.

[5] 唐畢鋒，馬立業，翟羽佳等.腫瘤干細胞標志物CDl33在胃癌中的表達及其臨床意義[J].臨床腫瘤學雜志，2008，13（6）：58-60.

[6] Zou，GM. Cancer initiating cells or cancer stem cells in the gastrointestinal tract and liver[J]. Cell Physiol，2008，217：598-604.

[7] Burgos-Ojeda D，Rueda BR，Buckanovich RJ. Ovarian cancer stem cell markers： Prognostic and therapeutic implications[J]. Cancer Letter，2012，322（1）：1-7.

[8] Ali S Role of c-kit/SCF in cause and treatment of gastronintestinal stomal tumors（GIST）[J]. Gene，2007，401：38-45.

[9] Boldrini L，Ursino S，Gisfredi S，et al. Expression and mutational status of c-kit in small-cell lung cancer； prognostic relevance[J]. Clin Cancer Res，2004，10：4101-4108.

[10] Hassan，H. T. c-Kit expression in human normal and malignant stem cells prognostic and therapeutic implications[J]. Leuk Res，2009，33：5-10.

CDl33蛋白陽性表現為胞膜和胞漿內有棕黃色顆粒，其在卵巢癌的表達情況見圖1，在高分化、中分化、低分化組織中分別為33.3%、56%、87.5%，三者相比有顯著性差異（P<0.05），見表2。

CD117的染色陽性為胞核內出現棕黃色顆粒，其在卵巢癌的表達情況見圖2，在高分化、中分化、低分化組織中分別為55.5%、72%、93.8%，三者相比有顯著性差異（P<0.05），見表2。

2.3 CD133與CD117在卵巢上皮性癌中表達的相關性

卵巢上皮性癌中21例為CD133和CD117共表達，17例為CD117表達陽性而CD133陰性表達，10例CD133陽性表達而CD117陰性表達；采用計數資料的相關分析顯示，CD133與CD117在卵巢上皮性癌中的表達有相關性（r=0.364，P=0.04）。

3 討論

干細胞因子CDl33是一種分子量為120kDa，由865個氨基酸組成的跨膜糖蛋白，它的基因定位于4p15×32。其最早發現于造血干細胞/祖細胞和神經上皮干細胞表面及各類原始細胞如間質干細胞[1]、內皮祖細胞等細胞中有特異表達[2]。研究表明，它在細胞膜形成和生理作用發揮方面有一定作用。隨后發現，一些腫瘤細胞中含CDl33+細胞，包括急慢性淋巴細胞白血病和腦膜膠質瘤等[3-4]，這種細胞只占腫瘤細胞極少一部分，卻具有自我更新、自我分化、自我增殖的能力。動物實驗證實只有這種細胞有致瘤性，而其它大部腫瘤細胞不具備。CDl33+腫瘤干細胞表現為更強的增殖能力和不良的預后，并發現其表達與多種癌干細胞密切相關，故認為CDl33+腫瘤干細胞主宰了腫瘤的惡性表型和浸潤能力[5]。目前CDl33作為腫瘤干細胞標志物的一種，主要用于各種惡性腫瘤干細胞的研究。

CD117又稱c-Kit，是一種酪氨酸激酶。常表達于造血干細胞、生殖細胞、胃腸道Cajal細胞及其對應的腫瘤等[6]，最近研究[7]表明CD117在卵巢癌組織中也有表達。正常情況下c-kit的活化需要配體干細胞因子（stem cell factor，SCF）參與，c-kit與其配體SCF結合形成二聚體，使得酪氨酸激酶及其效應分子磷酸化。磷酸化的酪氨酸位點為胞內底物提供識別、錨靠和結合的部位，使這些底物進一步依次磷酸化，這些效應分子的磷酸化促發細胞間信號的瀑布級聯反應，調控下游底物，包括絲裂原活化蛋白激酶和磷酸肌醇-3激酶（PI3K）等多條信號傳導通路，最終活化胞質內的轉錄因子，從而調節基因表達，控制細胞生長、增殖和分化。CD117的基因突變刺激腫瘤細胞的持續增殖和抗凋亡信號的失控，有利于腫瘤的惡性克隆[8]。研究發現許多腫瘤中有CD117的過表達，如肺癌、乳腺癌，前列腺癌、直腸癌等[9]。 Hassan統計了在5類血液系統腫瘤及16類實體瘤組織中，CDl17的陽性表達率波動于2.3%～100%之間[10]。

大量研究顯示，腫瘤的生物學行為包括增殖、浸潤、轉移、復發等涉及到許多生物因子和蛋白的表達。本研究顯示，卵巢組織中CD133和CD117表達呈正相關，二者表達上調與卵巢癌的發生發展、浸潤、轉移過程相關。通過本研究，我們認為聯合檢測CD133和CD117有利于闡明二者在卵巢腫瘤發生發展、浸潤、轉移中的演變規律，為上皮性卵巢癌早期診斷提供參考依據。

參 考 文 獻

[1] Yu Y，Fuhr J，Boye E，et a1. Mesenchymal stem cells and adipogenesis in Hemangiona involution[J]. Stem Cells，2006，24（6）：1605-l612.

[2] Friedrich EB，Walenta K，Scharlau J，et a1. CD34-/CD133+/VEGFR-2+ endothelial Progenitor cell subpopulation with potent vasoregenerative capacities[J]. Circ Res，2006，98（3）：20-25.

[3] Hall PE，Lathia JD，Miller NG，et a1. Integrins are markers of human neural stem cells[J]. Stem Cells，2006，24（9）：2078-2084.

[4] Waller CF，Martens UM，Lange W. Philadelphia chromosomes-positive cells are equally distributed in AC 133+and AC 133-fractions of CD34+ peripheral blood progenitor cells from patienis with CML[J]. Leukemia，1999，13（9）：1466-1470.

[5] 唐畢鋒，馬立業，翟羽佳等.腫瘤干細胞標志物CDl33在胃癌中的表達及其臨床意義[J].臨床腫瘤學雜志，2008，13（6）：58-60.

[6] Zou，GM. Cancer initiating cells or cancer stem cells in the gastrointestinal tract and liver[J]. Cell Physiol，2008，217：598-604.

[7] Burgos-Ojeda D，Rueda BR，Buckanovich RJ. Ovarian cancer stem cell markers： Prognostic and therapeutic implications[J]. Cancer Letter，2012，322（1）：1-7.

[8] Ali S Role of c-kit/SCF in cause and treatment of gastronintestinal stomal tumors（GIST）[J]. Gene，2007，401：38-45.

[9] Boldrini L，Ursino S，Gisfredi S，et al. Expression and mutational status of c-kit in small-cell lung cancer； prognostic relevance[J]. Clin Cancer Res，2004，10：4101-4108.

[10] Hassan，H. T. c-Kit expression in human normal and malignant stem cells prognostic and therapeutic implications[J]. Leuk Res，2009，33：5-10.

CDl33蛋白陽性表現為胞膜和胞漿內有棕黃色顆粒，其在卵巢癌的表達情況見圖1，在高分化、中分化、低分化組織中分別為33.3%、56%、87.5%，三者相比有顯著性差異（P<0.05），見表2。

CD117的染色陽性為胞核內出現棕黃色顆粒，其在卵巢癌的表達情況見圖2，在高分化、中分化、低分化組織中分別為55.5%、72%、93.8%，三者相比有顯著性差異（P<0.05），見表2。

2.3 CD133與CD117在卵巢上皮性癌中表達的相關性

卵巢上皮性癌中21例為CD133和CD117共表達，17例為CD117表達陽性而CD133陰性表達，10例CD133陽性表達而CD117陰性表達；采用計數資料的相關分析顯示，CD133與CD117在卵巢上皮性癌中的表達有相關性（r=0.364，P=0.04）。

3 討論

干細胞因子CDl33是一種分子量為120kDa，由865個氨基酸組成的跨膜糖蛋白，它的基因定位于4p15×32。其最早發現于造血干細胞/祖細胞和神經上皮干細胞表面及各類原始細胞如間質干細胞[1]、內皮祖細胞等細胞中有特異表達[2]。研究表明，它在細胞膜形成和生理作用發揮方面有一定作用。隨后發現，一些腫瘤細胞中含CDl33+細胞，包括急慢性淋巴細胞白血病和腦膜膠質瘤等[3-4]，這種細胞只占腫瘤細胞極少一部分，卻具有自我更新、自我分化、自我增殖的能力。動物實驗證實只有這種細胞有致瘤性，而其它大部腫瘤細胞不具備。CDl33+腫瘤干細胞表現為更強的增殖能力和不良的預后，并發現其表達與多種癌干細胞密切相關，故認為CDl33+腫瘤干細胞主宰了腫瘤的惡性表型和浸潤能力[5]。目前CDl33作為腫瘤干細胞標志物的一種，主要用于各種惡性腫瘤干細胞的研究。

CD117又稱c-Kit，是一種酪氨酸激酶。常表達于造血干細胞、生殖細胞、胃腸道Cajal細胞及其對應的腫瘤等[6]，最近研究[7]表明CD117在卵巢癌組織中也有表達。正常情況下c-kit的活化需要配體干細胞因子（stem cell factor，SCF）參與，c-kit與其配體SCF結合形成二聚體，使得酪氨酸激酶及其效應分子磷酸化。磷酸化的酪氨酸位點為胞內底物提供識別、錨靠和結合的部位，使這些底物進一步依次磷酸化，這些效應分子的磷酸化促發細胞間信號的瀑布級聯反應，調控下游底物，包括絲裂原活化蛋白激酶和磷酸肌醇-3激酶（PI3K）等多條信號傳導通路，最終活化胞質內的轉錄因子，從而調節基因表達，控制細胞生長、增殖和分化。CD117的基因突變刺激腫瘤細胞的持續增殖和抗凋亡信號的失控，有利于腫瘤的惡性克隆[8]。研究發現許多腫瘤中有CD117的過表達，如肺癌、乳腺癌，前列腺癌、直腸癌等[9]。 Hassan統計了在5類血液系統腫瘤及16類實體瘤組織中，CDl17的陽性表達率波動于2.3%～100%之間[10]。

大量研究顯示，腫瘤的生物學行為包括增殖、浸潤、轉移、復發等涉及到許多生物因子和蛋白的表達。本研究顯示，卵巢組織中CD133和CD117表達呈正相關，二者表達上調與卵巢癌的發生發展、浸潤、轉移過程相關。通過本研究，我們認為聯合檢測CD133和CD117有利于闡明二者在卵巢腫瘤發生發展、浸潤、轉移中的演變規律，為上皮性卵巢癌早期診斷提供參考依據。

參 考 文 獻

[1] Yu Y，Fuhr J，Boye E，et a1. Mesenchymal stem cells and adipogenesis in Hemangiona involution[J]. Stem Cells，2006，24（6）：1605-l612.

[2] Friedrich EB，Walenta K，Scharlau J，et a1. CD34-/CD133+/VEGFR-2+ endothelial Progenitor cell subpopulation with potent vasoregenerative capacities[J]. Circ Res，2006，98（3）：20-25.

[3] Hall PE，Lathia JD，Miller NG，et a1. Integrins are markers of human neural stem cells[J]. Stem Cells，2006，24（9）：2078-2084.

[4] Waller CF，Martens UM，Lange W. Philadelphia chromosomes-positive cells are equally distributed in AC 133+and AC 133-fractions of CD34+ peripheral blood progenitor cells from patienis with CML[J]. Leukemia，1999，13（9）：1466-1470.

[5] 唐畢鋒，馬立業，翟羽佳等.腫瘤干細胞標志物CDl33在胃癌中的表達及其臨床意義[J].臨床腫瘤學雜志，2008，13（6）：58-60.

[6] Zou，GM. Cancer initiating cells or cancer stem cells in the gastrointestinal tract and liver[J]. Cell Physiol，2008，217：598-604.

[7] Burgos-Ojeda D，Rueda BR，Buckanovich RJ. Ovarian cancer stem cell markers： Prognostic and therapeutic implications[J]. Cancer Letter，2012，322（1）：1-7.

[8] Ali S Role of c-kit/SCF in cause and treatment of gastronintestinal stomal tumors（GIST）[J]. Gene，2007，401：38-45.

[9] Boldrini L，Ursino S，Gisfredi S，et al. Expression and mutational status of c-kit in small-cell lung cancer； prognostic relevance[J]. Clin Cancer Res，2004，10：4101-4108.

[10] Hassan，H. T. c-Kit expression in human normal and malignant stem cells prognostic and therapeutic implications[J]. Leuk Res，2009，33：5-10.