微柱凝膠免疫檢測法在新生兒溶血病中的應(yīng)用研究＊

蔣峻峰（重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院輸血科 402360）

新生兒溶血病（HDN）是由于母親體內(nèi)存在可結(jié)合胎兒紅細(xì)胞的IgG血型抗體而引起的被動免疫性疾病，未及時治療極易導(dǎo)致高膽紅素血癥等并發(fā)癥，嚴(yán)重時可導(dǎo)致新生兒智力缺陷，甚至死亡［1－2］。微柱凝膠免疫檢測是免疫學(xué)檢測常用方法，廣泛應(yīng)用于血型抗體檢測臨床［3－4］。本研究以401例疑似HDN新生兒為研究對象，探討了微柱凝膠免疫檢測在HDN診斷中的應(yīng)用價值。現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年5月至2014年3月與本院就診的疑似HDN新生兒401例，出生時間小于或等于5d的新生兒303例，出生時間大于5d的新生兒98例。

1.2 儀器與試劑 FYQ型免疫微柱孵育器、TD－3A型血型血清學(xué)檢測專用離心機(jī)、新生兒ABO及RhD血型檢測卡、胎兒及嬰兒HDN不完全抗體檢測卡、放散試劑盒均購自長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.3 方法 采集乙二胺四乙酸二鉀抗凝靜脈血3～4mL，無溶血標(biāo)本，且采集后立即送檢。檢測項目包括ABO血型、RhD血型、直接抗人球蛋白試驗（DAT）、游離抗體試驗、放散試驗，其中DAT、游離抗體試驗、放散試驗同時采用試管法和微柱凝膠免疫法。微柱凝膠免疫法結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：紅細(xì)胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中判為陽性，提示血清中含有相應(yīng)抗體或血細(xì)胞被致敏；紅細(xì)胞完全沉降至凝膠底部并形成紅細(xì)胞扣判為陰性，提示血清中無相應(yīng)抗體且血細(xì)胞未被致敏。微柱凝膠免疫檢測注意事項：檢測前采用專用離心機(jī)將檢測卡離心1次（離心時間2～3min），避免使用有干膠和氣泡的檢測卡；檢測前將靜脈血標(biāo)本3 000 r／min離心3min，使纖維蛋白充分沉降，避免血漿殘留的纖維蛋白干擾檢測結(jié)果；在環(huán)境溫度15～25℃條件下進(jìn)行標(biāo)本檢測，避免因溫度過低而產(chǎn)生冷凝集；加入標(biāo)本及試劑的檢測卡離心1次后立即判讀結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗。P＜0.05為比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血型檢測結(jié)果 401例新生兒中檢出HDN患兒檢出率為65.58%（275／401）。275例 HDN患兒中，ABO血型系統(tǒng)不合占96.00%（264／275），其中母親為O型、新生兒為A或B型占95.83%（253／264），母親為A型、新生兒為B型或母親為B型、新生兒為 A 型占4.17（11／264）；Rh血型不合占4.00%（11／275）。

2.2 溶血試驗檢測結(jié)果 401例新生兒中，DAT、游離抗體試驗與放散試驗微柱凝膠免疫檢測結(jié)果均為陰性者占31.42%（126／401），3項試驗中至少1項為陽性者占68.58%（275／401）；3項試驗試管法檢測至少1項為陽性者占44.39%（178／401）。兩種方法陽性檢出率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2＝47.73，P＜0.05）。見表1。

表1 新生兒溶血試驗檢測結(jié)果［n（%）］

3 討 論

HDN是由于母嬰血型不合，母親血型抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒血液循環(huán)中，導(dǎo)致胎兒或新生兒體內(nèi)紅細(xì)胞被破壞，屬于被動免疫性疾病。HDN主要由ABO血型系統(tǒng)、Rh血型系統(tǒng)及其他少見的血型系統(tǒng)不合所致，國內(nèi)以ABO血型不合最為常見，約占85.3%，Rh血型不合約占14.6%［5－7］。病情較輕的HDN患兒表現(xiàn)為貧血、水腫、肝脾腫大，病情嚴(yán)重時可導(dǎo)致新生兒運(yùn)動障礙、智力發(fā)育不全、核黃疸，甚至死亡。早期診斷和治療HDN極為重要。目前常用的HDN診斷試驗包括：DAT、游離抗體試驗和放散試驗［8－9］，檢測方法包括試管法和微柱凝膠免疫法。試管法可用于血型抗原與不完全抗體檢測，但存在操作繁瑣、檢測耗時長、結(jié)果準(zhǔn)確率較低等不足。微柱凝膠免疫法可用于血型鑒定、不規(guī)則抗體篩查和鑒定、交叉配血等血清學(xué)試驗，可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的血型檢測方法進(jìn)行紅細(xì)胞抗原、抗體檢測。與試管法相比，微柱凝膠免疫法該具有標(biāo)本用量少（更適用于新生兒）、結(jié)果容易判斷、靈敏度高、準(zhǔn)確率高等優(yōu)點［10］。

本研究采用試管法和微柱凝膠免疫檢測法對疑似HDN新生兒進(jìn)行DAT、游離抗體試驗和放散試驗檢測，結(jié)果顯示3項試驗微柱凝膠法檢測陽性率為68.58%，試管法檢測陽性率僅為44.39%。血型鑒定結(jié)果顯示，母嬰ABO血型系統(tǒng)不合占96.00%，Rh血型系統(tǒng)不合占4.00%。在ABO血型系統(tǒng)不合的患兒中，母親為O型、患兒為A或B型占95.83%。母親為O型時，外周血中的IgG類抗A、抗B抗體可通過胎盤屏障進(jìn)入胎兒血循環(huán)。母親為A型，胎兒為B或AB型，或母親為B型，胎兒為A或AB型也可導(dǎo)致HDN，但臨床比較少見，主要是由于母親為A或B型時，外周血中的抗B、抗A抗體主要為IgM類抗體，不易通過胎盤屏障進(jìn)入胎兒血循環(huán)。O型婦女極易在孕前因血型物質(zhì)（如寄生蟲、疫苗等）的刺激產(chǎn)生IgG類抗A、抗B抗體，導(dǎo)致其孕育的胎兒存在較高的HDN發(fā)病風(fēng)險。母嬰Rh血型系統(tǒng)不合主要是由于Rh陰性孕婦孕育Rh陽性胎兒，一旦胎兒紅細(xì)胞在分娩時因胎盤失血進(jìn)入母親外周血，可導(dǎo)致母親產(chǎn)生相應(yīng)的血型抗體，但由于母親為初次致敏時產(chǎn)生的抗體為IgM類抗體，只有在抗原長期刺激后才產(chǎn)生IgG型抗體，因此Rh血型系統(tǒng)不合所致HDN不會在第1胎發(fā)生。極少數(shù)未輸過血的母親第1次孕育的胎兒在分娩后發(fā)生HDN，可能與產(chǎn)婦為Rh陰性而產(chǎn)婦的母親為Rh陽性有關(guān)。

綜上所述，微柱凝膠免疫檢測技術(shù)具有操作簡單、靈敏度高、準(zhǔn)確率高、易于標(biāo)準(zhǔn)化（可減少操作者主觀因素的影響）等優(yōu)點，已廣泛應(yīng)用于臨床［11－12］。微柱凝膠免疫檢測技術(shù)在HDN檢測方面也具有一定的優(yōu)勢，在產(chǎn)前及產(chǎn)后HDN早期診斷方面具有極高的應(yīng)用價值，適合臨床推廣應(yīng)用。

［1］李保才，黎海瀾.母嬰血型不合引起新生兒溶血病的實驗室診斷［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9（23）：2886－2887.

［2］Paidas MJ，Hossain N，Shamsi TS，et al.Hemolytic disease of the newborn［M］.Oxford，UK：Wiley－Blackwell，2011：28－40.

［3］陳曉軍，艾清.微柱凝膠法抗人球蛋白試驗檢測孕婦IgG抗體效價診斷新生兒溶血病的應(yīng)用研究［J］.中國實驗診斷學(xué)，2012，16（2）：330－331.

［4］李燕華，聶樹濤.微柱凝膠免疫對免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少癥的診斷價值［J］.醫(yī)學(xué)信息，2011，24（7）：1941－1943.

［5］朱瑩，王婧.微柱凝膠技術(shù)檢測521例O型血孕婦IgG A（B）抗體效價［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（1）：33－34.

［6］Squires A.Hemolytic disease of the newborn caused by anti－wright（anti－Wr）：case report and review of the literature［J］.J Neona Nurs，2012，31（2）：69－80.

［7］Josep FA.Intravenous immunoglobulin and necrotizing enterocolitis in newborns with hemolytic disease［J］.Pediatrics，2010，125（1）：139－144.

［8］盧磊，劉燕.微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血病檢測中的應(yīng)用［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)生，2010，13（1）：38－39.

［9］王杰偉.微柱凝膠免疫檢測技術(shù)在新生兒溶血病檢測中的應(yīng)用［J］.中國社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè)，2013，15（9）：280－281.

［10］余忠清，殷波濤，胡麗華.微柱凝集和聚凝胺法檢測不規(guī)則抗體的對比分析與研究［J］.檢驗醫(yī)學(xué)，2010，25（3）：179－181.

［11］盧煥興，黃悅蘭，溫俊杰.某院新生兒溶血病血清學(xué)檢測結(jié)果分析［J］.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（11）：1325－1326.

［12］王權(quán).微柱凝膠免疫檢測技術(shù)在臨床交叉配血中的應(yīng)用［J］.中國誤診學(xué)雜志，2010，10（10）：2358.