自身抗體導致獻血者Rh血型鑒定困難1例

麻靜敏，車 進，李天君，張燕華，李美霖（北京市通州區中心血站 101100）

D抗原抗體與輸血的關系僅次于ABO血型［1］，對獻血者必須檢測D抗原。本站在對1例獻血者進行Rh血型鑒定時，發現應用3個廠家試劑與待檢紅細胞反應凝集強度均相同，且直抗陽性，懷疑結果為假陽性。對Rh血型和ABO血型進行進一步鑒定后，結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 獻血者，女，33歲，漢族，身體健康，無輸血史，近期無免疫史，于2013年來本站獻血400mL，ABO血型初篩為O型，RhD（－）。

1.2 試劑與儀器 抗－A、抗－B、ABO反定紅細胞、抗篩細胞、抗－H、抗－A1、2－Me應用液均由上海血液生物醫藥有限責任公司提供，批號分別為：20120506 －2、20132302 、20125628 、20120830 、20120523 、20120925 。IgG 抗－D（A 廠家：上海血液生物醫藥有限責任公司，批號20120731）；IgM＋IgG抗－D（B廠家：英國 Millipore公司，批號BMG1102A）；IgM＋IgG抗－D（C廠家：美國D.B.L公司，批號 NDMG06304）。Coombs Anti－IgG卡、Liss／coombs卡、ID－Diluent2均由瑞士 DiaMed公司提供，批號分別為50540.70.13、50531.71.26、05761.23.10。KA－2200細胞洗滌離心機（日本KUBOTA），光學顯微鏡（日本Olympus公司），微柱凝膠卡式離心機、卡式孵育機（瑞士DiaMed公司），恒溫水浴箱（北京市醫療設備廠）。

1.3 Rh血型鑒定 采用鹽水試管法和微柱凝膠法對Rh血型進行鑒定。鹽水試管法：在3支試管中分別加入3種廠家的抗－D血清各100μL，再分別加入50μL獻血者5%鹽水紅細胞懸液，1 000 g×離心15s，取出肉眼判定結果。微柱凝膠法：取Coombs Anti－IgG卡1張，按 A、B、C廠家標記前3孔，將前3孔中分別加入獻血者1%Liss紅細胞懸液50μL，再分別加入A、B、C廠家抗－D血清各25μL，將卡置于37℃孵育15min后離心10min，取出肉眼判定結果。

1.4 ABO血型鑒定 采用鹽水試管法對ABO血型進行鑒定。正定型：在2支試管中分別加入抗－A、抗－B標準血清各100μL，再分別加入50μL獻血者5%鹽水紅細胞懸液；反定型：在3支試管中先分別加入獻血者血清各100μL，再分別加入AC、BC、OC試劑紅細胞各50μL，1 000 ×g離心15s，取出肉眼判定結果。

1.5 自身對照試驗 采用鹽水試管法，在1支試管中先加入獻血者血清100μL，再加入獻血者5%鹽水紅細胞懸液50μL，1 000 ×g離心15s，取出肉眼判定結果。

1.6 直接抗球蛋白試驗 采用微柱凝膠法，取Coombs Anti－IgG卡標記1孔，加入獻血者1%Liss紅細胞懸液50μL，離心10min。

1.7 抗體篩查試驗 采用微柱凝膠法，取Liss／coombs卡1張，于1～3孔中分別加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號抗篩細胞50μL，再分別加入獻血者血清25μL，將卡置于37℃孵育15min后離心10 min。

1.8 2－Me處理獻血者紅細胞 用鹽水將獻血者紅細胞稀釋為50%，在此紅細胞中加等量0.1mol／L 2－Me應用液，置37℃恒溫水浴箱中孵育30min后用生理鹽水洗滌紅細胞3次，再用生理鹽水將紅細胞稀釋至5%，再一次進行ABO血型、Rh血型鑒定、直接抗球蛋白試驗和抗體篩查試驗［2］。

2 結 果

2.1 Rh血型鑒定結果 在對此例RhD陰性獻血者進行RhD陰性確認試驗時發現，鹽水試管法3個廠家試劑結果均為1＋w，微柱凝膠卡試劑結果均為0，且凝集強度相似。見表1。

表1 獻血者Rh血型鑒定結果

2.2 ABO血型鑒定 ABO血型鑒定，除反定型Ac、Bc外其他反應的凝集強度均相同。見表2。

表2 獻血者ABO血型鑒定結果

2.3 直接抗球蛋白試驗結果 Coombs Anti－IgG卡反應結果為（＋）；經2－Me處理紅細胞后結果為陰性。抗體篩查試驗結果也為陰性。

3 討 論

臨床上Rh血型系統的重要性僅次于ABO血型系統，可引起溶血性輸血反應和新生兒溶血病［3］，為進一步提高輸血的安全性、有效性，本站對初篩RhD抗原陰性者進行RhD陰性確認實驗。采用3種不同生產廠家抗－D血清分別應用鹽水試管法和微柱凝膠法進行確認試驗，未出現凝集者為RhD陰性，出現凝集者判定為弱D型［4］。本站在對此例RhD陰性獻血者進行RhD陰性確認試驗時發現，鹽水試管法和微柱凝膠卡的3個廠家試劑結果均為陽性且凝集強度相似，直接抗球蛋白試驗結果也相似，故進行ABO血型鑒定，除反定型Ac、Bc外其他反應的凝集強度均相同。由于血清中游離的自身抗體，會干血型鑒定、抗體篩選及交叉配血［5］，正定型會出現假陽性結果，反定型也會凝集［6］。此例獻血者抗體篩查為陰性，自身對照試驗為陽性，而正常離體的血液自身對照試驗為陰性，直接抗球蛋白試驗結果與RhD陰性確認結果陽性程度相似。可能發生假陽性反應的因素包括工作疏忽用錯了試劑、人血清試劑中存在其他特異性抗體、試劑可能被細菌或其他外界物質污染、患者血清中自身凝集素和不正常蛋白質與未經洗滌紅細胞等［7］。排除其他因素，初步認定為自身抗體所引起的Rh血型假陽性。

使用2－Me應用液處理獻血者紅細胞后，對Rh血型及ABO血型進行重新鑒定。對直接抗球蛋白試驗也進行了重新鑒定，結果為陰性。因為巰基試劑可以消除紅細胞的自發凝集，為血型檢測提供不凝集的標本［2］，故確定本例是由于自身抗體所導致的假陽性。本室曾檢出自身抗體陽性而導致臨床配血不合的獻血者數例，此例為本室首次發現RhD陰性獻血者因自身抗體導致的假陽性，故此類現象必須引起檢驗工作者的重視，以免誤判而致血型鑒定錯誤。因此在Rh陰性確認試驗中有必要使用多種不同廠家抗－D試劑和不同方法同時進行檢測，以排除試驗過程中可能出現的假陽性結果，明確獻血者Rh血型，保證臨床用血的安全。

［1］李勇，馬學嚴.實用血液免疫學血型理論和實驗技術［M］.北京：科學出版社，2006：176－206.

［2］童軍，劉慶海，楊文沖.實用血液免疫學血型理論和實驗技術［M］.北京：科學出版社，2006：586－701.

［3］蔡雪仰.2例自身抗－e合并非特異性自身抗體引起的溶血性貧血［J］.檢驗醫學與臨床，2013，10（2）：213－214.

［4］孫業富，夏愛萍，范恩勇.揚州市RhD陰性無償獻血者抗原分布及不規則抗體調查［J］.臨床輸血與檢驗，2011，13（1）：57－58.

［5］龐桂芝，張趁利，婁白敏.ABO及Rh血型鑒定困難與直接抗球蛋白試驗陽性的關系探討［J］.中國輸血雜志，2010，23（5）：388－389.

［6］陶翠華，張真路.325例ABO正反定型不一致原因分析及處理措施［J］.中國輸血雜志，2012，25（5）：484－485.

［7］胡永紅，李勇，朱建春.實用血液免疫學血型理論和實驗技術［M］.北京：科學出版社，2006：341－409.