女性HPV感染情況的調查與分析

孫旭

摘 要：目的 調查我院婦科門診18～60歲女性宮頸人乳頭瘤病毒（HPV）感染的情況，確定本地區的主要感染型別。方法 采用人乳頭瘤病毒分型基因芯片檢測系統對527例女性進行23種HPV基因型檢測，分析宮頸病變中HPV亞型感染分布特點。結果 在被調查的527例女性中HPV感染總陽性率為43.8%（231/527），單項感染占陽性感染的60%（139/231），其中，低危感染占陽性感染的35%（81/231），高危感染占陽性感染的25%（58/231），高低?；旌细腥菊缄栃愿腥镜?0%（92/231）。主要感染型別為6、11、43、16、58和56，占單項及混合感染率為：6型占35.9%；11型占18.7%；43型占18.7%；16型占16.6%；58型占15.7%；56型占10.5%。結論 本地區HPV型別感染分布以6、11、43、16和58型感染為主。

關鍵詞：人乳頭瘤病毒 宮頸癌

中圖分類號：R442 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2014）08（c）-0226-01

人乳頭瘤病毒（human papillomavrius，HPV）是一種雙鏈DNA病毒，具有球形外殼，直徑約55 nm，主要感染皮膚粘膜上皮，導致不同病變。大量流行病學研究已證實，HPV的感染與子宮頸癌的關聯最為密切，高危型HPV持續感染是發生子宮頸癌的重要原因。HPV感染檢測是篩查和預防宮頸癌的必要手段。

1 資料和方法

1.1 資料

（1）病例來源：2011年10月至2014年7月在我院婦科門診就診行HPV檢測的女性527例（年齡18～60歲）。

（2）標本采集：采用一次性宮頸脫落細胞采集器，暴露宮頸，用棉拭子擦去宮頸口過多的分泌物。將采集器置于宮頸口，單向旋轉4～5周，慢慢抽出。將采集器放入細胞保存液中，沿柄刷折痕處折斷。旋緊管蓋，做好標識，直立放置。冷凍保存。

（3）儀器與試劑：人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑盒Ⅰ和Ⅱ（亞能生物技術深圳有限公司），Hema9600PCR儀（珠海黑馬醫學儀器有限公司）。FYY-3型分子雜交儀（江蘇省興化市分析儀器廠）。

1.2 方法

（1）DNA提取：洗脫→離心（13000 rpm）→（去上清）加液→裂解→離心（13000 rpm）→保存（保留上清液即DNA，待用），注：樣本DNA，24 h內4 ℃保存，長期-20 ℃保存。

（2）PCR擴增：編號→離心（5000 rpm，2 s）→加樣（5 ul待測DNA加到PCR管內）→離心（5000 rpm，2 s）→擴增。擴增條件50℃15 min；95℃10 min；以下為，40個循環：94℃30 sec，42 ℃90sec，72 ℃30 sec；72℃5 min；4 ℃HOLD。注：PCR儀需熱蓋加熱；PCR產物可于4 ℃或-20 ℃保存備用。

（3）雜交檢測：備膜（膜條編號并依次放入15 ml離心管中）→加液（5～6 mlA液及對應編號的PCR產物加入離心管）→變性（離心管沸水浴10 min）→雜交（迅速取出離心管，放入雜交箱雜交；同時將50 mlB液管放入雜交箱預熱，要求51℃，≥1.5 h且<4 h）→洗膜（膜條放入B液管，且≤4張條/管，置于雜交箱輕輕洗滌）→孵育（放入配好孵育液中孵育30 min）→搖洗（膜條放入盛有A液的洗滌盒中，室溫浸泡搖洗2次，5 min/次）→洗膜（膜條放入C液中，室溫洗膜1次，1～2 min）→顯色（現配顯色液，避光顯色≥30 min）→判讀（清水漂洗1次，判讀結果）→保存（4 ℃保存膜條）。

2 結果

在被調查的527例女性中HPV感染總陽性率為43.8%（231/527），單項感染占陽性感染的60%（139/231），其中，低危感染占陽性感染的35%（81/231），高危感染占陽性感染的25%（58/231），高低?；旌细腥菊缄栃愿腥镜?0%（92/231）。主要感染型別為6、11、43、16、58和56，占單項及混合感染率為：6型占35.9%；11型占18.7%；43型占18.7%；16型占16.6%；58型占15.7%；56型占10.5%。

3 討論

宮頸癌是全球婦女中僅次于乳腺癌和結直腸癌的第3個常見的惡性腫瘤，在發展中國家是僅次于乳腺癌居第2位常見的惡性腫瘤，是最常見的女性生殖道惡性腫瘤。也是目前唯一一個病因明確的婦科惡性腫瘤，與高危型人乳頭瘤病毒（human papillomaviruses，HPV）的持續感染相關。臨床HPV檢測對于發現宮頸癌高?；颊咴缙诜乐斡兄匾饬x。

人乳頭瘤病毒分型基因芯片檢測系統采用PCR-反向點雜交法，一次雜交反應可以檢測多種靶序列。PCR技術特點是具有高度的靈敏性（PCR產物的生成量是以指數方式增加的）；反向點雜交技術具有高特異性、高通量，固定化探針，一次雜交即可檢測多種靶序列，可同時分型檢測23種HPV基因型，包括18種高危型：16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，83 ，MM4；5種低危型：6，11，42，43，44。

本文利用人乳頭瘤病毒分型基因芯片檢測系統對本院婦科門診的女性進行HPV感染型別篩查，從檢測結果調查中可見6、11、43、16和58型別較其它亞型檢出例明顯增高，可見本地區以6、11、43、16和58型別感染為主。

持續感染高危型HPV的女性，是宮頸癌的高發人群。子宮頸的癌前病變（CIN）到癌是一個相對較長時間的過程，即宮頸感染HPV→宮頸持續感染HPV→CIN→原位癌→早期浸潤癌→浸潤癌，研究表明要經歷10年左右時間。目前，我國生活水平和醫療保健意識不斷提，這對減少宮頸癌的發生、發展有積極的意義。HPV檢測是篩查預防宮頸癌早診早治的關鍵。

HPV感染有一定的地域性，感染亞型存在一定的地域差別。本地區在被調查的527例女性中HPV感染總陽性率為43.8%，以6、11、43、16和58型別感染為主。HPV亞型根據地域人口分布的復雜性，地域差別較大，感染趨勢有向多向性發展的方向，本次HPV感染所獲得的資料可為本地區宮頸癌防治提供參考數據。

參考文獻

[1] Zur Hansen H.Papillomavirues and cancer：from basic studies to clinical application[J].Nat Rev Cancer，2002，2（5）：342-350.

[2] 孫麗君，婁雪玲，王東紅，等.貴州省部分地區婦女宮頸人乳頭瘤病毒感染現狀調查及分析[J].中國綜合臨床，2009，25（9）：923-927.endprint