非小細胞肺癌患者血清雌激素水平與肺癌組織中雌激素受體表達及其臨床病理意義

劉政宏??晏淼??張蕾??楊成喜

[摘要] 目的 探討非小細胞肺癌患者血清雌激素水平與肺癌組織中雌激素受體表達及其臨床病理意義，為非小細胞肺癌的防治提供一些參考。 方法 選擇2010年1月～2012年12月本院收治的經病理證實的肺腺癌患者36例作為觀察組，同時選擇同期在我院治療的經病理學證實的肺鱗癌患者32例作為對照一組和來我院體檢肺部健康的志愿者30例作為對照二組，然后利用免疫組織染色化學技術對所有參與實驗的人員肺部組織進行瘦素、血清雌激素（E）及雌激素受體（ER）的檢測，分別對觀察組、對照一組、對照二組患者的瘦素、血清雌激素（E）及雌激素受體（ER）進行比較，然后對觀察組男性肺腺癌患者和女性肺腺癌患者的瘦素、血清雌激素（E）及雌激素受體（ER）進行比較。 結果 觀察組與對照一組、對照二組相比，瘦素、血清雌激素（E）及雌激素受體（ER）陽性表達明顯高于其他兩組，差異具有統計學意義（P<0.05）；與男性相比較，觀察組女性患者體內的瘦素、血清雌激素（E）陽性表達變化不顯著（P>0.05），但是女性患者中ER陽性表達顯著高于男性，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論 非小細胞肺癌患者的瘦素、血清雌激素（E）、雌激素受體（ER）的陽性表達高于正常人的，說明這三種因素可能參加著非小細胞肺癌的發生，可作為診斷非小細胞肺癌的重要依據。

[關鍵詞] 非小細胞肺癌；肺腺癌；肺鱗癌；血清雌激素；雌激素受體

[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2014）18-181-04

肺癌是一種呼吸系統惡性腫瘤，發病率和死亡率的增長在所有惡性腫瘤里最快，已嚴重威脅著人類的身體健康和生命安全。近50年來，在許多國家，肺癌的發病率和死亡率都明顯增高，在中國亦如此，肺癌已成為全球癌癥的首要死因。在組織學上，肺癌主要分為小細胞癌和非小細胞癌，而非小細胞肺癌患者占所有肺癌患者總數的約80%～85%，是肺癌的主要類型。肺腺癌和肺鱗癌成為非小細胞肺癌的主要代表，因此這兩種癌癥種類又成為有關醫學專家的主要研究類型[1-3]。當前雖然對非小細胞肺癌的有關研究在不斷深入，但其病理病因機制尚不清楚，因此目前對該病的治療雖然取得一定的進展，但是治療效果和預后仍然很差，防治仍然缺乏根本有效措施，在治療方面急需尋找新的治療方法進行突破，積極探索該病的病因病理和高危因素成為突破的關鍵。近年來，有關研究者們發現雌激素（E）與肺癌尤其是非小細胞肺癌的發生、發展存在著一定的密切關系。本研究通過對2010年1月～2012年12月我院收治的非小細胞肺癌患者并對其進行瘦素、血清雌激素（E）、雌激素受體（ER）的相關分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年1月～2012年12月我院收治的肺腺癌患者36例作為觀察組，其中男11例，女25例，年齡42～73歲，平均61.6歲，均為初次治療。其中ⅢA期17例、ⅢB期14例、Ⅳ期5例。選擇同期在我院治療的肺鱗癌患者32例作為對照一組，其中，男27例，女5例，年齡45～72歲，平均59.2歲，均為初次治，其中ⅢA期12例、ⅢB期15例、Ⅳ期5例。選擇同期在我院進行健康檢測的肺部健康志愿者30例，其中男25例，女5例，年齡45～72歲，平均60.5歲。該研究得到所有志愿者同意并簽訂同意協議書。

1.2 方法

首先對所有參與研究人員進行血清雌激素（E）水平的檢測。所有參與研究人員均于檢測當天早晨空腹抽取肘靜脈血1mL，并進行2000r/min離心5min，然后吸取上層血清，采用化學發光法進行血清雌激素水平檢測，具體操作流程按照試劑盒操作說明書進行，并對檢測結果詳細記錄。

其次對所有組織樣本進行瘦素和血清雌激素受體檢測。采集到的全部組織均采用10%甲醛溶液進行固定，然后采用石蠟進行包埋處理，再將各個標本制成厚度為4μm的組織切片（共9張），電熱恒溫箱內60℃烤片4h，石蠟切片常規脫蠟和水化后，自來水沖洗。取其中一張行HE染色進行病理診斷。其余8張分兩組行免疫組織化學染色。將切片浸入0.01mmol/L、pH6.0的檸檬酸鈉鉀中高溫加熱30min進行抗原修復，緊接著用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3次，2min/次，然后除去PBS液，每張切片加入PicTure-Plus液，室溫孵育15～30min，然后PBS液沖洗3次，2min/次，每張切片加100μL新鮮配置的二氨基聯苯胺（DAB），光鏡下控制5min，接著進行蒸餾水沖洗，蘇木素復染，PBS或者自來水沖洗返藍，最后進行封片。鼠抗人雌激素受體按照1：40的比例進行稀釋，采用PBS緩沖液作為陰性對照，陽性對照采用的是已發現典型癥狀的陽性組織切片。瘦素兔抗人抗體采用1：100的比例進行稀釋，陰性對照同上，陽性對照采用的是脂肪組織切片的染色結果。

1.3 判斷標準

標本中瘦素以細胞質呈棕黃色或棕褐色為陽性細胞，試劑由博士德生物有限公司提供。計算出陽性細胞百分數（即陽性細胞百分數=陽性表達的細胞/全部細胞總數），并取其均值設為陽性表達率。按染色強度和陽性細胞百分數進行判定，細胞呈棕黃色或>50%細胞呈黃色判定為陽性結果；細胞不著色或<50%判定為陰性結果，細胞呈棕黃色、淡黃色。雌激素受體（ER）以細胞核內出現棕黃色顆粒為陽性，雌激素受體（ER）的試劑由長海長嘉生物有限公司提供。計算出陽性細胞百分數，并取其均值設為陽性表達率。按染色強度和陽性細胞百分數進行判定，細胞核內出現棕黃色顆粒>25%判定為陽性結果。

1.4 統計學原理

所有數據均采用SPSS13.0軟件進行統計學處理，具體采用x2檢驗和Fisher's確切概率法進行統計學分析，其中采用的檢驗水準為α=0.05， P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 所有研究對象瘦素、血清雌激素（E）及血清雌激素受體（ER）的表達情況

觀察組與對照一組、對照二組相比，瘦素、血清雌激素（E）及雌激素受體（ER）陽性表達明顯高于其他兩組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 性別對肺腺癌患者瘦素、血清雌激素（E）及血清雌激素受體（ER）的表達影響

女性肺腺癌中的瘦素、血清雌激素（E）陽性表達與男性的相比差異均沒有統計學意義（P>0.05）。

而女性肺腺癌中的雌激素受體（ER）陽性表達高于男性，差異有統計學意義（P<0.05）。具體情況見表2。

3 討論

近10年來，肺癌成為世界各國最常見的惡性腫瘤之一，其總死亡率位居各類惡性腫瘤之首[4-6]。有關研究發現雌激素（E）是不但有重要的生理作用調節著人體的環境，而且還在多種惡性腫瘤的發病中起到重要的作用。流行病學研究發現，在非小細胞肺癌中，女性所患的肺癌種類以肺腺癌為主，相比較男性而言，女性雖然抽煙更少、發病年齡低，但更容易患肺腺癌，預后效果更好[7-9]。Taioli等的病例配對研究資料中顯示在女性中停經較早者患肺腺癌危險度低（OR=0.3）；用雌激素替代治療（hormone replacement therapy，HRT）發生肺腺癌的危險性則高（OR=1.7）；此外，妊娠次數多、絕經晚和口服避孕藥可增加肺腺癌發生的危險性。因此可以說明肺腺癌的發病存在著性別的關系，女性相比較男性而言更容易患肺腺癌，雌激素在肺癌尤其是女性肺腺癌的發生中起到一定的作用。

瘦素（leptin）是由肥胖基因編碼的一種蛋白質產物，目前研究顯示瘦素除與代謝調節密切相關外，瘦素與人類多種腫瘤相關，已被作為腫瘤標志物應用于腫瘤的早期診斷。目前瘦素與肺癌的關系得到學者們的關注。本研究發現非小細胞肺癌患者的瘦素表達明顯高于正常人的，而在肺腺癌患者中，女性患者的瘦素表達與男性患者的無明顯差異，表明瘦素是否刺激內分泌激素的產生雌激素并與其一起在肺腺癌的發生中起協調作用，尚不確定[10-12]。

本研究通過對肺癌患者和正常人利用免疫組織化學技術進行雌激素受體（ER）檢測，發現肺癌患者相比較正常人有較高的雌激素受體（ER）表達。我們推測，雌激素（E）在癌變的發生、發展中主要是通過雌激素受體（ER）來發揮作用的，雌激素受體（ER）陽性肺癌組織的生長可能需要雌激素環境的維持。有關研究者們長期研究發現雌激素受體（ER）在某些癌變的過程中被全部保留。在肺癌中，雌激素受體（ER）信號傳到通路中，在與雌激素（E）結合后，然后通過基因途徑和非基因途徑產生生物學效應。雌激素及其受體表達與女性肺腺癌的研究取得了一定進展，但是雌激素在非小細胞肺癌發病機制中的作用尚未明確，還有很多問題需要解決，如女性肺腺癌中雌激素及其受體表達有無差異，女性肺腺癌組織中雌激素及其受體表達與肺腺癌的臨床生物學特性關系如何，其表達與療效及預后有無相關性，目前報道較少，還需要大樣本、前瞻性的規范研究。

綜上所述，非小細胞肺癌患者的雌激素及雌激素受體表達明顯高于正常人，肺腺癌患者的雌激素及雌激素受體表達又高于肺鱗癌患者的，說明雌激素及雌激素受體參與肺腺癌的發生的可能性最大，但是也不代表雌激素及雌激素受體不參與著肺鱗癌的發生。因此在非小細胞肺癌的發生中，雌激素及雌激素受體均可能參加。由于臨床實驗的病例偏少，因此雌激素及雌激素受體在非小細胞肺癌的作用還需進一步研究，但是雌激素及雌激素受體可以作為非小細胞肺癌的一種重要診斷指標，有利于臨床判斷預后。

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（收稿日期：2014-07-29）