APRIL和XIAP在結(jié)腸癌、結(jié)腸腺瘤及正常結(jié)腸黏膜中的表達及意義

袁德漢+康舉齡+蘇艷桃+溫志雄+唐華中

[摘要] 目的 探討增殖誘導配體（APRIL）和X連鎖凋亡抑制蛋白（XIAP）在結(jié)腸癌、結(jié)腸腺瘤及正常結(jié)腸黏膜組織中的表達及其臨床意義。 方法 應用免疫組織化學EnVision法檢測結(jié)腸癌組織標本60例、結(jié)腸腺瘤30例及正常結(jié)腸黏膜組織30例中APRIL和XIAP的表達。 結(jié)果 結(jié)腸癌、結(jié)腸腺瘤及正常結(jié)腸黏膜組織中APRIL和XIAP的陽性表達率均呈逐漸降低趨勢，3組間APRIL和XIAP的陽性表達率比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。結(jié)腸癌組織中APRIL的陽性表達與組織分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及浸潤程度密切相關(guān)（P<0.01）；XIAP的陽性表達與Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及浸潤程度密切相關(guān)（P<0.01）。 結(jié)論 APRIL和XIAP的表達增高不僅可能在正常黏膜-腺瘤-癌的病理形成過程中起一定作用，更與結(jié)腸癌浸潤、轉(zhuǎn)移等惡性生物學行為有密切關(guān)系。

[關(guān)鍵詞] 結(jié)腸癌；結(jié)腸腺瘤；免疫組織化學；增殖誘導配體；X連鎖凋亡抑制蛋白

[中圖分類號] R735.3+5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）09（a）-0012-03

Expression and clinical significance of APRIL and XIAP in colon carcinoma，colon adenoma and normal colon mucosa

YUAN De-han1 KANG Ju-ling2 SU Yan-tao3 WEN Zhi-xiong1 TANG Hua-zhong1

1.Department of General Surgery，Shijie Hospital of Dongguan City in Guangdong Province，Dongguan 523290，China；2.Department of Pathology，the First Affiliated Hospital of Jinan University，Guangzhou 510000，China；3.Department of Nursing，Shijie Hospital of Dongguan City in Guangdong Province，Dongguan 523290，China

[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significance of a proliferation-inducing ligand （APRIL） and X-linked inhibitor of apoptosis protein （XIAP） in colon carcinoma，colon adenoma and normal colon mucosa. Methods The expression of APRIL and XIAP was detected by immunohistochemical EnVisionTM plus non-hiotin technique in 60 cases of colon carcinoma and 30 cases of colon adenoma，30 cases of normal colon mucosa. Results The positive expression rates of APRIL and XIAP in colon carcinoma，colon adenoma and normal colorectal mucosa decreased gradually.There was significant difference among the three groups （P<0.01）.The expression of XIAP were closely related to Dukes clinical stage，lymph node metascasis and the degree of infiltration （P<0.01）.The expression of APRIL were closely related to differentiation degree，lymph node metascasis and the degree of infiltration （P<0.01）. Conclusion The high expression of APRIL and XIAP may play important roles in the carcinogenesis of colon carcinoma and it is involved in the metastasis and infiltration.

[Key words] Colon carcinoma；Colon adenoma；Immunohistochemistry；A proliferation-inducing ligand；X-linked inhibitor of apoptosis protein

目前研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)大多數(shù)結(jié)腸癌的發(fā)生都經(jīng)過了正常黏膜-腺瘤-癌的過程，但其發(fā)生機制至今尚不清楚。近年來一些研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的自主增殖和凋亡失調(diào)是結(jié)腸癌的“腺瘤-癌演續(xù)學說”中的重要機制[1]。增殖誘導配體（a proliferation-inducing ligand，APRIL）屬于腫瘤壞死因子超家族新成員，它在消化系腫瘤中的高表達已經(jīng)引起學者們的廣泛關(guān)注。X連鎖凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）是凋亡抑制蛋白（inhibitors of apoptosis，IAPs）家族中最重要的caspase抑制物[2]。在體外實驗中發(fā)現(xiàn)，APRIL表達具有抗凋亡能力，推測可能與APRIL上調(diào)X相聯(lián)系的XIAP，使caspase-3活性降低有關(guān)[3]。本研究采用免疫組織化學法檢測結(jié)腸癌、結(jié)腸腺瘤及正常結(jié)腸黏膜組織中APRIL和XIAP的表達，旨在進一步闡明正常黏膜-腺瘤-癌的病理機制及兩者在此過程中所起的作用。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集2009年8月16日～2010年2月15日東莞市石碣醫(yī)院和暨南大學附屬第一醫(yī)院手術(shù)切除結(jié)腸癌標本60例、結(jié)腸腺瘤30例及正常結(jié)腸黏膜組織30例，均行10%甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，均經(jīng)病理學證實。

1.2 方法

采用免疫組織化學EnVision法檢測結(jié)腸癌、結(jié)腸腺瘤及正常結(jié)腸黏膜組織中APRIL和XIAP的表達，兔抗人多克隆抗體APRIL和XIAP、EnVision試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。操作程序嚴格按照試劑盒說明書進行。染色結(jié)果判斷：APRIL和XIAP表達于癌細胞胞質(zhì)，呈黃色或棕黃色顆粒狀。判斷標準：①陽性細胞著色程度：胞質(zhì)和（或）胞膜基本不著色記0分，染色棕黃記1分，染色棕色記2分，染色棕褐色記3分；②計算陽性細胞的百分數(shù)：無陽性表達計0分；≤25%記1分；26%～50%記2分；51%～75%記3分；≥76%記4分。將著色程度和陽性細胞百分率的評分相加，0分為（-），1～2分為（+），3～4分為（++），5～6分為（+++），（-）和（+）為陰性表達，（++）和（+++）為陽性表達。

1.3 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料采用卡方檢驗，相關(guān)性分析采用直線相關(guān)法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 APRIL和XIAP在結(jié)腸癌、結(jié)腸腺瘤及正常結(jié)腸黏膜組織中表達的比較

結(jié)腸癌、結(jié)腸腺瘤及正常結(jié)腸黏膜組織中APRIL和XIAP的陽性表達率均呈逐漸降低趨勢，3組間APRIL和XIAP的陽性表達率比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）（表1）。

表1 APRIL和XIAP在結(jié)腸癌、結(jié)腸腺瘤及正常結(jié)腸黏膜組織中

表達的比較（n）

2.2 結(jié)腸癌中APRIL和XIAP的表達與臨床病理指標的關(guān)系

結(jié)腸癌組織中APRIL的陽性表達與組織分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及浸潤程度密切相關(guān)（P<0.01），與年齡、性別、腫瘤大小、Dukes分期無關(guān)（P>0.05）。結(jié)腸癌組織中XIAP的陽性表達與Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及浸潤程度密切相關(guān)（P<0.01），與年齡、性別、腫瘤大小、組織分級無關(guān)（P>0.05）（表2）。

表2 結(jié)腸癌中APRIL和XIAP的表達與臨床病理指標的關(guān)系

2.3 結(jié)腸癌中APRIL和XIAP表達的相關(guān)性

結(jié)腸癌組織中XIAP、APRIL的表達呈正相關(guān)性（r=0.519，P<0.05）（表3）。

表3 結(jié)腸癌組織中XIAP、APRIL表達的相關(guān)性（n）

3 討論

細胞增殖與凋亡是腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的一對矛盾，兩者間的動態(tài)平衡狀況與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移等生物學行為密切相關(guān)。結(jié)直腸黏膜上皮細胞增殖和凋亡在正常生理狀況下處于相對平衡而不斷的更新狀態(tài)，以保證其結(jié)構(gòu)和功能的完整性。一旦這種平衡被打破，組織結(jié)構(gòu)即受到破壞或腫瘤形成[4-5]。

APRIL亦稱為TALL-2、TRDL-1和TNFSF-l3a，是1998年由Hahne等首先發(fā)現(xiàn)并克隆成功的腫瘤壞死因子，其在多種腫瘤細胞和組織，特別是消化道腫瘤中高表達，提示APRIL過表達在多種腫瘤細胞的增殖、存活及腫瘤形成過程中有重要作用[6-7]。過往研究發(fā)現(xiàn)，中、重度異型增生胃腸組織以及原位癌、浸潤癌組織中的APRIL表達顯著高于正常胃腸黏膜，且APRIL在癌組織中的表達顯著高于中、重度異型增生胃腸組織，提示APRIL可能在胃癌、結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用，有可能成為其早期診斷和抗癌治療的靶分子。雖然多種消化系腫瘤中APRIL表達都增高，但具體作用機制目前還不十分清楚。

隨著結(jié)直腸癌分子水平研究的深入，發(fā)現(xiàn)細胞凋亡受多種基因、蛋白表達水平的調(diào)控，而且這些調(diào)控之間形成了復雜密切的網(wǎng)絡聯(lián)系，有的甚至起到“開關(guān)”樣的作用。XIAP能夠?qū)垢鞣N凋亡誘導因素，抵抗細胞凋亡，被認為是凋亡抑制蛋白家族的成員中作用最強的一種。它在胰腺癌、乳腺癌、大腸癌、鼻咽癌等細胞系中均呈高表達，且對腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預后有多方面的影響[8-10]。因此，針對XIAP可能成為防治惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展?jié)撛诘姆肿影悬c。但是XIAP在結(jié)腸癌中的表達狀況及其與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和預后的關(guān)系仍存在爭議，有待進一步研究。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌、結(jié)腸腺瘤及正常結(jié)腸黏膜組織中APRIL和XIAP的陽性表達率均呈逐漸降低趨勢，3組間APRIL和XIAP的陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），說明APRIL和XIAP的高表達在結(jié)腸癌的發(fā)生過程中起重要作用，結(jié)腸腺瘤階段就已經(jīng)存在兩者表達增高的現(xiàn)象，而在結(jié)腸癌組織中表達更顯著，提示兩者可能在結(jié)腸癌病變演進過程中呈累積和漸進的趨勢，可能通過打破細胞增殖與凋亡的平衡狀況，促進細胞發(fā)生惡性增殖。

本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌組織中APRIL的陽性表達與組織分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及浸潤程度密切相關(guān)（P<0.01），即組織分級高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤漿膜/漿膜外者的APRIL的陽性表達明顯高于組織分級低、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度未穿透漿膜者。結(jié)腸癌組織中XIAP的陽性表達與Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及浸潤程度密切相關(guān)（P<0.01），即有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤漿膜/漿膜外、Dukes C+D期者的XIAP的陽性表達明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度未穿透漿膜、Dukes A+B期者。表明APRIL和XIAP的表達增高不僅可能是結(jié)腸癌的形成過程中的重要機制，更與結(jié)腸癌浸潤、轉(zhuǎn)移等惡性生物學行為存在一定關(guān)系，隨著結(jié)腸癌惡性演進，兩者有相應的表達變化。提示兩者可能成為結(jié)腸癌靶向治療的新分子靶點，并具有一定預測結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移和預后的臨床參考價值，對延緩腫瘤復發(fā)、改善患者的生存率有重要意義[11-13]。

在體外實驗中發(fā)現(xiàn)，APRIL表達具有抗凋亡能力，推測可能與APRIL上調(diào)X相聯(lián)系的XIAP，使caspase-3活性降低有關(guān)。本研究也分析了結(jié)腸癌組織中APRIL和XIAP表達的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌組織中XIAP、APRIL的表達呈正相關(guān)（r=0.519，P<0.05），提示兩者在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中具有相互協(xié)同的作用，但兩者相互之間的作用機制仍有待進一步深入研究。

[參考文獻]

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[11] 彭萬仁，付衛(wèi)爭，孫國平，等.丹皮酚對人肝癌BEL-7402細胞凋亡和COX-2、Survivin、XIAP、c-IAP1表達的影響[J].中國藥理學通報，2010，5（6）：41-45.

[12] 劉靜，蔣常文.X連鎖凋亡抑制蛋白XIAP腫瘤相關(guān)性研究現(xiàn)狀[J].醫(yī)學綜述，2009，7（19）：80-82.

[13] 關(guān)婧，孫愛民，王莉慧，等.慢病毒介導RNAi抑制大腸癌細胞APRIL表達對化療敏感性的影響[J].南方醫(yī)科大學學報，2011，12（9）：138-142.

（收稿日期：2014-06-16 本文編輯：郭靜娟）

在體外實驗中發(fā)現(xiàn)，APRIL表達具有抗凋亡能力，推測可能與APRIL上調(diào)X相聯(lián)系的XIAP，使caspase-3活性降低有關(guān)。本研究也分析了結(jié)腸癌組織中APRIL和XIAP表達的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌組織中XIAP、APRIL的表達呈正相關(guān)（r=0.519，P<0.05），提示兩者在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中具有相互協(xié)同的作用，但兩者相互之間的作用機制仍有待進一步深入研究。

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[12] 劉靜，蔣常文.X連鎖凋亡抑制蛋白XIAP腫瘤相關(guān)性研究現(xiàn)狀[J].醫(yī)學綜述，2009，7（19）：80-82.

[13] 關(guān)婧，孫愛民，王莉慧，等.慢病毒介導RNAi抑制大腸癌細胞APRIL表達對化療敏感性的影響[J].南方醫(yī)科大學學報，2011，12（9）：138-142.

（收稿日期：2014-06-16 本文編輯：郭靜娟）

在體外實驗中發(fā)現(xiàn)，APRIL表達具有抗凋亡能力，推測可能與APRIL上調(diào)X相聯(lián)系的XIAP，使caspase-3活性降低有關(guān)。本研究也分析了結(jié)腸癌組織中APRIL和XIAP表達的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌組織中XIAP、APRIL的表達呈正相關(guān)（r=0.519，P<0.05），提示兩者在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中具有相互協(xié)同的作用，但兩者相互之間的作用機制仍有待進一步深入研究。

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[12] 劉靜，蔣常文.X連鎖凋亡抑制蛋白XIAP腫瘤相關(guān)性研究現(xiàn)狀[J].醫(yī)學綜述，2009，7（19）：80-82.

[13] 關(guān)婧，孫愛民，王莉慧，等.慢病毒介導RNAi抑制大腸癌細胞APRIL表達對化療敏感性的影響[J].南方醫(yī)科大學學報，2011，12（9）：138-142.

（收稿日期：2014-06-16 本文編輯：郭靜娟）