復方碘化鉀滴眼液無菌檢查方法的驗證

余曉霞　邱凱鋒　廖慶權

【摘要】 目的 建立復方碘化鉀滴眼液無菌檢查方法。 方法 按《中國藥典》2010年版二部無菌檢查法中薄膜過濾法對復方碘化鉀滴眼液的無菌檢查方法進行驗證。 結果 該制劑的無菌檢查選用薄膜過濾法， 以金黃色葡萄球菌為陽性對照菌， 沖洗總量100 ml。結論 經方法學驗證， 該法可行， 結果可靠。

【關鍵詞】 復方碘化鉀滴眼液；無菌檢查；驗證

Validation of sterility test of compound potassium iodide eye drops YU Xiao-xia， QIU Kai-feng， LIAO Qing-quan. Department of Pharmacy， Sun Yat-sen Memorial Hospital of Sun Yat-sen University， Guangzhou 510120， China

【Abstract】 Objective To establish the method of sterility test of compound potassium iodide eye drops. Methods According to sterility test in the appendix of Chinese Pharmacopoeia 2010 （section 2）， the membrane filteration used in the sterility test of compound potassium iodide eye drops was validated. Results The membrane filteration was used in the sterility test of compound potassium iodide eye drops， and staphylococcus aureus was used as positive control germs and the total amount of irrigation fluid was 100 ml. Conclusion Through the technological validation， the method is applicable and the result is reliable.

【Key words】 Compound potassium iodide eye drops； Sterility test； Validation

復方碘化鉀滴眼液為中山大學孫逸仙紀念醫院配制的眼用制劑。其主要成分為碘化鉀、碘化鈉、維生素C和維生素B1等。具有補充電離子和維生素的作用， 臨床適用于早期白內障。《中國藥典》2005年版僅要求滴眼液需做微生物限度檢查[1]， 而《中國藥典》2010年版對滴眼液的要求提高到無菌檢查水平[2]。因此， 對復方碘化鉀滴眼液無菌檢查方法進行驗證， 以保證方法的可行性和結果的可靠性。

1 儀器與材料

1. 1 儀器 一次性全封閉無菌集菌過濾器（北京牛牛基因技術有限公司）、WJ-6無菌檢查儀（天津羅根科技）、303A-1生化培養箱（上海浦東榮豐科學儀器有限公司）、SPX-100B生化培養箱（上海悅豐儀器表有限公司）。

1. 2 試劑 營養瓊脂培養基（批號：140308）， 玫瑰紅鈉瓊脂培養基（批號：140228）， 營養肉湯培養基（批號：130521）， 改良馬丁培養基（批號：1401222）， 改良馬丁瓊脂培養基（批號：130910）， 硫乙醇酸鹽流體培養基（批號：1401152）， （以上均來源于北京三藥科技開發公司）。復方碘化鉀滴眼液（規格：10 ml/瓶， 批號：201312258、201312268、201312278， 中山大學孫逸仙紀念醫院）。

1. 3 菌種 大腸埃希菌（escherichia coli） [CMCC（B）44 102]， 枯草芽孢桿菌（bacillus subtilis） [CMCC（B）63 501]， 金黃色葡萄球菌（staphylococcus aureus）[CMCC（B）26 003]， 生孢梭菌（clostridum sporogens） [CMCC（B）64 941]， 白色念珠菌（candida albicans） [CMCC（F）98 001]， 黑曲霉（aspergillus niger） [CMCC（F）98 003]， 銅綠假單胞菌（pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B）10 104]（以上菌種的凍干菌均購自中國食品藥品生物檢定研究院）。

2 方法與結果

2. 1 菌液制備 取經30～35℃培養18～24 h的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的肉湯培養物， 用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至每毫升含菌數為<100 cfu的菌懸液。取經30～35℃培養18～24 h的生孢梭菌硫乙醇酸鹽液體新鮮培養物， 用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至每毫升含菌數<100 cfu的菌懸液。取經23～28℃培養24～48 h的白色念珠菌液體培養物， 用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至每毫升含菌數<100 cfu的菌懸液。取經23～28℃ 培養1周的黑曲霉斜面培養物， 加入3～5 ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的 0.9%無菌氯化鈉溶液， 將孢子洗脫。然后， 用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內， 用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每毫升含孢子數<100 cfu的孢子懸液。（以上菌液的使用均不超過5代。）

2. 2 最少檢驗數量、檢驗量的確定 試驗用樣品的裝量為10 ml， 按《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅺ H無菌檢查法表1， 最少檢驗數量應為10個；按表2， 每支供試品接入每種培養基的最少量為2 ml。

2. 3 供試品管的制備 取本品30支（批號：201312258、201312268、201312278）分2份， 15支/份， 用2套一次性三聯管全封閉無菌集菌過濾器， 先用少量0.1%無菌蛋白胨水溶液濕潤濾膜， 調節集菌儀轉速為160 r/min， 按薄膜過濾法全量過濾， 每膜用0.1%無菌蛋白胨水溶液100 ml 分2次沖洗， 在最后50 ml沖洗液中加入菌液1 ml， 過濾至干， 作為供試品管。

2. 4 對照管的制備 取過濾器， 加入50 ml 0.1%無菌蛋白胨水溶液， 加入相應的菌液1 ml， 濾干， 作為對照管。

2. 5 無菌檢查方法的驗證 分別取含大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌和生孢梭菌的供試品管， 各加入硫乙醇酸鹽流體培養基100 ml；含白色念珠菌和黑曲霉的供試品管， 各加入改良馬丁培養基100 ml， 置相應培養溫度培養。

取對照管6管， 其中4管分別加入硫乙醇酸鹽流體培養基100 ml， 再分別加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌和生孢梭菌菌液各1 ml；另2管分別加入改良馬丁培養基100 ml， 再分別加入白色念珠菌和黑曲霉菌液各1 ml， 置相應培養溫度培養。同時， 取上述菌液各1 ml， 按微生物限度檢查法平皿法（《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅺ H）計數， 每個菌株平行制備2個平皿， 生孢梭菌用硫乙醇酸鹽流體培養基作液體計數， 測定所加菌數。結果見表1。

3 小結

綜上所述， 實驗中與對照管比較， 供試品管中的試驗菌均生長良好， 說明供試品在本法的檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計， 可照此檢查方法和檢查條件進行供試品的無菌檢查。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）.北京：中國醫藥科技出版社， 2005：附錄XIJ.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.（二部）.北京：中國醫藥科技出版社， 2010：附錄XIH.

[收稿日期：2014-06-23]endprint