罕見B（A）與CisAB亞型家系成員血型血清學及遺傳規律分析

劉樂霞，馮麗娜，趙國宏，梁俊杰，劉建嶺，肖 瑋，張國霞，徐聞鉑（河北省滄州市中心血站質量管理科 061001）

B（A）與CisAB亞型是ABO血型中最為特殊的亞型，二者均可在A或B等位基因中出現1個或2個堿基突變，導致編碼的糖基轉移酶具有雙重功能活性，可同時發生2種特異性糖連接的酶促反應，可同時催化A及B抗原的形成［1－2］，遺傳學表現為與O型者婚配生出AB型和O型子女，給血型鑒定和配血工作帶來一定的困擾。筆者對1例B（A）亞型、1例Cis－AB亞型個體分別進行了家系調查，旨在分析中國人群中B（A）、CisAB個體及其家系成員血清學表型與分子遺傳學背景。

1 資料與方法

1．1 一般資料 家系1：先證者，男，72歲，回族，胃癌，ABO正反定型不符，資料報道見文獻［3］，調查對象為先證者及其家系成員共4代合計17例。家系2：先證者，無償獻血者，女，48歲，漢族，已婚，正定型為AB型，反定型檢出抗－A，調查對象為先證者及其家系成員共4代合計10例。

1．2 試劑 單克隆抗－A、抗－B血型定型試劑及抗－H、抗－A1、抗人球蛋白、聚凝胺、譜細胞均購自上海血液生物醫藥有限責任公司，人源性抗－A、抗－B，Ac、Bc、Oc、A2c及自身紅細胞由本實驗室制備。

1．3 方法 （1）血型血清學試驗：采用單克隆和人源性抗－A、抗－B，抗－A1及ABO試劑以試管法進行常規正反定型檢測，采用抗－H試劑檢測紅細胞（Pc）表面H抗原，以Bc作為對照細胞。吸收放散試驗、血型物質檢測均參照文獻［4］，應用篩選細胞和一組試劑譜細胞進行抗體篩選和抗體鑒定，明確有無不規則抗體的存在。（2）基因分型及序列測定：采用聚合酶鏈反應－限制性片段長度多態性檢測技術對B（A）、CisAB亞型個體進行基因分型，序列測定由上海市血液中心國家血型參比室完成，方法參照文獻［5］。

2 結 果

2．1 血型血清學檢測結果 家系1中B（A）亞型個體紅細胞與抗－A1不發生凝集，與單克隆抗及人源性抗－A發生不同程度的弱凝集，與抗－B發生較強凝集，A抗原較正常弱很多，B抗原接近正常，血清中含有較強的不規則抗－A，可以凝集A2細胞，紅細胞與抗－H反應強度不一；吸收放散試驗證明先證者B抗原比正常AB型中的B抗原吸收能力弱，放散能力強，具有亞型的特點；部分個體血型物質檢測為分泌型，只檢出H血型物質，未檢出B（A）或B、A物質。家系2中Ⅱ2、Ⅱ3個體（Cis－AB亞型）紅細胞與抗－A1不發生凝集，與單克隆及人源性抗－A發生弱凝集，與抗－B發生較強凝集，A抗原較正常弱很多，B抗原接近正常，血清中含有較強的不規則抗－A，可以凝集A2細胞，Ⅰ2、Ⅲ1、Ⅳ1個體（CisAB亞型）紅細胞與抗－A1不發生凝集，與單克隆及人源性抗－A發生強凝集，與抗－B發生弱凝集，B抗原較正常弱很多，A抗原接近正常，血清中含有較強的不規則抗－B，紅細胞與抗－H反應增強，A抗原比正常AB型中的A抗原吸收能力弱，放散能力強；部分個體血型物質檢測為分泌型，只檢出A、H血型物質。具體結果見表1～2。

表1 2個家系中B（A）、CisAB亞型個體血型血清學鑒定結果

續表1 2個家系中B（A）、CisAB亞型個體血型血清學鑒定結果

表2 2個家系中B（A）、CisAB亞型個體血清學、基因型及序列測序結果

2．2 基因分型及序列測定結果 家系1共確認10例B（A）亞型，男7例、女3例，測序結果均為B等位基因在第7外顯子發生640A→G單堿基突變，形成B（A）04血型；家系2共確認5例CisAB亞型，男1例、女4例，測序結果均為A等位基因在第7外顯子發生467C→T、803G→C突變，形成CisAB01血型。各家系血清型表型、基因型、序列檢測結果見表2，家系亞型遺傳圖見圖1～2。

圖1 家系1B（A）亞型遺傳圖

圖2 家系2CisAB亞型遺傳圖

3 討 論

CisAB亞型最早報道于1964年［6］，B（A）亞型最早報道于1985年，二者發生頻率非常低，約為1／580 000～1／17 000［7］，遺傳學表現為B型，血清學表現為AxB型，僅有少量A抗原和幾乎正常的B抗原，血清中存在抗－A，可以和A1細胞和部分A2細胞發生凝集，H物質增多或未增多。家系1中B（A）亞型個體血型血清學檢測結果基本與之相符。一般而言，Cis－AB亞型血型血清學表現為A2B3或A2BX，以A抗原為主，B抗原較弱，血清中存在較弱的抗－B，H物質增多［8］。家系2中CisAB亞型個體Ⅰ2、Ⅲ1、Ⅳ1血清學表現為A2BX，但Ⅱ2、Ⅱ3個體血清學表現為AxB型，A抗原較弱，B抗原凝集正常，血清中含有抗－A，符合B（A）亞型的血清學表現，不易與B（A）亞型鑒別，與報道不相符［8］，其中Ⅱ2、Ⅱ3個體A抗原較弱，推測是由于B基因對A基因存在抑制作用，導致血清學表現出同一家系中不同CisAB的異質性。由此可見，僅采用血型血清學檢測不能區別B（A）與CisAB亞型，且二者血型血清學表現隨個體、家系而異。部分ABO亞型，如AxB或ABx等，通常H抗原較弱，如果發現H抗原很強，則很可能是B（A）或Cis－AB亞型。

B（A）與CisAB血清學定型常由于正反定型結果不相符而需借助家系調查來確認，采用基因檢測則可以在分子水平上提供一定的支持依據。2個家系調查結果顯示，B（A）與CisAB亞型均存在一定的遺傳特征：B型和A型基因位于同一條染色體上，而不是2個單獨的等位基因，2個基因能同時遺傳給后代，孩子可以從雙親同時遺傳到A和B基因，從雙親的某一方遺傳到O或B等位基因，從而導致孩子的血型血清學表現為AB型，即A和B抗原的傳遞呈穩定的AB順式遺傳方式，不分性別遺傳，為常染色體共顯性遺傳。這種特殊的遺傳方式導致AB型與O型個體婚配可生出AB型和O型子女，B（A）與CisAB亞型的出現補充了ABO血型經典的遺傳規律，對于親子關系鑒定具有重要的意義。B（A）血型共有B（A）01～06等位基因6種，國內已報道的有 B（A）02、B（A）04、B（A）05、B（A）06等位基因，以B（A）04和B（A）02等位基因為主［9］。迄今為止，從GenBank中可查詢的CisAB亞型共有4種等位基因，分別為01～04型，其中CisAB01型為第7外顯子467C→T、803G→C突變。家系1中10例B（A）亞型個體均為B等位基因發生nt640A→G單堿基突變所形成的B（A）04型，單堿基錯義突變引起氨基酸的改變，導致214位甲硫氨酸（Met）被纈氨酸（Val）置換，這是此家系出現B（A）04亞型個體的分子遺傳學基礎。家系2中5例CisAB亞型個體為A等位基因第7外顯子467C→T、803G→C突變，符合CisAB01型特征。臨床常用的血型血清學檢測方法不能有效鑒別上述2種特殊亞型，二者的鑒別依賴于基因分型及序列測定。

B（A）與CisAB亞型個體若作為獻血者漏檢A或B抗原，若作為受血者漏檢不規則抗－A或抗－B，均將導致急性溶血性輸血反應，危及患者生命。因此，作為受血者，因血清中存在不規則抗－A、抗－B，應輸注O型洗滌紅細胞或盡量實現家屬同型互助獻血，條件允許可采用自體輸血。B（A）與CisAB亞型存在特殊性，在臨床配血、定型、親子鑒定中應引起高度的重視。

（致謝：感謝上海市血液中心國家血型參比室在分子生物學鑒定中給予技術支持和幫助！）

［1］ 鄧志輝．復合型ABO糖基轉移酶的分子生物學與酶動力學的研究［J］．中國輸血雜志，2007，20（4）：352－355．

［2］ Seto NO，Palcic MM，Compston CA，et al．Sequential interchange of four amino acids from blood group B to blood group A glycosyltransferase boosts catalytic activity and progressively modifies substrate recognition in human recombinant enzymes［J］．J Bio Chem，1997，272（22）：14133－14138．

［3］ 劉建嶺，劉樂霞，肖瑋，等．一個回族家系中發現8例B（A）亞型報告［J］．中國輸血雜志，2010，23（7）：553－554．

［4］ 葉應嫵，王毓三，申子瑜．全國臨床檢驗操作規程［M］．3版．南京：東南大學出版社，2006：246－257．

［5］ 郭忠慧，向東，朱自嚴，等．罕見的CisAB與B（A）血型的基因型研究［J］．中華醫學遺傳學雜志，2004，21（4）：321－324．

［6］ Yamamoto F，McNeill PD，Kominato Y，et al．Molecular genetic analysis of the ABO blood group system：2．cis－AB alleles［J］．Vox Sang，1993，64（2）：120－123．

［7］ Schenkel－Brunner H．ABO system．Human blood groups chemical and biochemical basis of antigen specificity［M］．2nd ed．New York，USA：Springer Wien，2000：145－147．

［8］ Daniels G．Human blood groups［M］．Oxford，England：Blackwell Scientific Publication，2002：236－256．

［9］ 田力，范文成，姚志強，等．罕見B（A）血型的分子遺傳學研究［J］．中國輸血雜志，2012，25（1）：33－35．