中藥材黃藥子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

江蘇省鹽城市藥品檢驗(yàn)所（224002）支榮榮 周會(huì)芹 謝斌

江蘇省鹽城市中醫(yī)院（224001）左瑩瑩

附圖1 黃藥子塊莖橫切面

中藥材黃藥子為薯蕷科（Dioscoreaceae）植物黃獨(dú)Dioscorea bulbifera L.的干燥塊莖，是江蘇省地方中藥材，收載于《江蘇省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》1989年版，歷代本草均有記載，具有散結(jié)消癭、清熱解毒、涼血降火之功效[1]。黃藥子中薯蕷皂苷、黃藥子甲素、乙素等均具有抗腫瘤作用，尤其對(duì)治療甲狀腺腫瘤有獨(dú)特的療效[2][3]，但由于有一定的肝、腎毒性[4]，在應(yīng)用上有一定的限制。其中，薯蕷皂苷是其主要成分，目前沒(méi)有對(duì)其測(cè)定的報(bào)道。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中只有性狀、理化鑒別、水分等一般檢查項(xiàng)目，為了完善該標(biāo)準(zhǔn)，筆者對(duì)黃藥子的藥材標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究。在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增加了顯微鑒別、浸出物測(cè)定、高效液相色譜法測(cè)定薯蕷皂苷含量。

附圖2 石細(xì)胞（×400）

附圖3 針晶（×400）

附圖4 空白溶劑色譜圖

附圖5 薯蕷皂苷對(duì)照品色譜圖

附圖6 黃藥子藥材色譜圖

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent高效液相色譜儀（安捷倫）；BP211D電子天平（德國(guó)Sartorius）；BT224S電子天平（德國(guó)Sartorius）；OLYMPUS BX51顯微成像系統(tǒng)。

1.2 試藥 薯蕷皂苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111707-200501）；甲醇（江蘇漢邦科技有限公司，色譜純）；乙醇（國(guó)藥控股集團(tuán)有限公司）；水（二次重蒸餾水）等；其他試劑均為分析純。黃藥子樣品為10批次，購(gòu)自江蘇各地。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別 本品塊莖橫切片：木栓細(xì)胞數(shù)列，石細(xì)胞靠木栓層內(nèi)側(cè)，類(lèi)長(zhǎng)方形，切向延長(zhǎng)，常連續(xù)成環(huán)；基本薄壁組織中外韌型維管束較少；黏液細(xì)胞多分布于基本薄壁組織外側(cè)，內(nèi)含針晶束，樹(shù)脂細(xì)胞眾多，內(nèi)含棕黃色分泌物。見(jiàn)附圖1。其中，黏液細(xì)胞及石細(xì)胞在橫切面上不清楚，在圖中未標(biāo)出，筆者做了放大處理見(jiàn)附圖2～3。

2.2 浸出物 分別用水、稀乙醇、70%乙醇、乙醇作為浸出溶劑，并分別以冷浸法、熱浸法對(duì)浸出結(jié)果進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，以水熱浸法浸出物最高。依法測(cè)定樣品10批，最低測(cè)定值為19.7%，以最低測(cè)定值的80%設(shè)限，為15.8%，故暫規(guī)定本品水溶性浸出物不得少于15.0%。

2.3 薯蕷皂苷的含量測(cè)定

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取薯蕷皂苷對(duì)照品適量，用甲醇溶解成每1ml含97.9μg薯蕷皂苷的溶液，供線性關(guān)系考察的母液（對(duì)照品溶液-1）； 將對(duì)照品溶液-1用甲醇稀釋成每1ml含9.79μg薯蕷皂苷的溶液（對(duì)照品溶液-2），作為分析進(jìn)樣用。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品粉末（過(guò)四號(hào)篩）約0.5g，精密稱(chēng)定，置錐形瓶中，精密加入65%乙醇50ml，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率120W，頻率40kHz）30min，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 色譜條件 十八烷基鍵和硅膠柱CAPCELL C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈-水（55∶45），檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，柱溫為30℃；流速為1.0ml/ml。進(jìn)樣量均為10μl。在該色譜條件下，薯蕷皂苷元可達(dá)到基線分離，其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)附圖4～6。

附表 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

薯蕷皂苷對(duì)照品保留時(shí)間為16.847min；供試品中薯蕷皂苷保留時(shí)間為16.160min，保留時(shí)間一致，因?yàn)樗幉臒o(wú)法制備陰性對(duì)照，故未附陰性對(duì)照色譜圖。

2.3.4 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品溶液-1（97.9μg/ml）0.2ml、0.5ml、1ml、2ml、4ml分別加入到10ml的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻得對(duì)照品工作液系列。分別吸取10μl進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，對(duì)照品的質(zhì)量X（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程：Y＝4442564.114X－11252.914，R＝1.000；薯蕷皂苷在0.01958μg～0.3916μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液（9.79μg/ml），連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，RSD為0.3%＜2.0%，結(jié)果表明精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性考察 取同一供試品溶液，分別于0，6，12，24，48h進(jìn)樣10μl，按上述條件測(cè)定峰面積，RSD為0.5%（n＝5）。結(jié)果表明：供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取同一樣品，按供試品溶液制備方法平行制備6份，依次測(cè)定，計(jì)算得薯蕷皂苷的含量， RSD為0.6%。

2.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的樣品（平均含量1.9850mg/g）0.25g，六份，分別精密吸取97.9μg/ml的對(duì)照品溶液5ml （即0.4895mg），依法制得供試品溶液。分別吸取上述溶液各10μl測(cè)定回收率，結(jié)果見(jiàn)附表。

2.3.9 樣品測(cè)定及限度擬定 依法測(cè)定10批樣品，結(jié)果含薯蕷皂苷分別為0.18%，0.16%，0.24%，0.20%，0.18%，0.21%，0.19%，0.17%，0.20%，0.22%，最低0.16%，以最低測(cè)定值80%為下限，即不得少于0.12%；最高0.24%，以最高測(cè)定值120%為上限，即不得高于0.29%；故暫規(guī)定本品干燥品計(jì)算，含薯蕷皂苷（C15H10O7）應(yīng)為0.12%～0.29%。

3 討論

3.1 由于近年來(lái)中藥材及飲片質(zhì)量存在一定的問(wèn)題，甚至存在一些不法分子將藥材或飲片提取有效成分后再進(jìn)行銷(xiāo)售，延誤了患者病情，甚至造成嚴(yán)重后果，針對(duì)這種現(xiàn)狀，筆者增加了浸出物的檢查，在浸出物檢查方法選擇過(guò)程中，考慮了兩方面因素：環(huán)保經(jīng)濟(jì)的原則；主要成分的極性，因?yàn)辄S藥子中主要成分為薯蕷皂苷，易溶解于水。因此，筆者選擇以水為溶劑，實(shí)驗(yàn)表明方法簡(jiǎn)便且切實(shí)可行。

3.2 在含量測(cè)定中方法，筆者比較了55%乙醇、65%乙醇、75%乙醇三種濃度提取方法，結(jié)果表明65%乙醇含量最高，同時(shí)比較了超聲20min、30min、40min的測(cè)定結(jié)果，表明30min與40min含量測(cè)定值一致，20min略低，因此選擇超聲30min。此外，在限度的制定上，筆者考慮了近期有關(guān)報(bào)道，黃藥子中薯蕷皂苷、黃藥子甲素、乙素、丙素以及鞣質(zhì)等均能夠引起急性中毒。因此，制定了上限已確保用藥安全。