牛大力水提物抗炎鎮痛作用的實驗研究

劉丹丹，魏志雄

(東莞市食品藥品檢驗所，廣東 東莞 523109)

牛大力水提物抗炎鎮痛作用的實驗研究

劉丹丹*，魏志雄

(東莞市食品藥品檢驗所，廣東 東莞 523109)

目的研究牛大力水提物的抗炎鎮痛作用。方法通過二甲苯誘發小鼠耳腫脹實驗、腹腔注射醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高實驗和大鼠棉球肉芽實驗觀察牛大力水提物的抗炎作用；采用醋酸扭體法和熱板刺激法觀察牛大力水提物的鎮痛作用。結果牛大力水提物能減輕二甲苯所致小鼠耳廓的腫脹度，抑制醋酸所致腹腔毛細血管通透性的增高，對大鼠棉球肉芽腫有明顯的抑制作用，并能減少醋酸所致小鼠的扭體次數和提高小鼠對熱刺激的痛閾值。結論牛大力水提物對急、慢性炎癥均有抑制作用，對熱和化學刺激引起的疼痛反應有明顯的鎮痛作用。

牛大力；水提取物；抗炎作用；鎮痛作用

牛大力為我國南方地區習用的中藥材，豆科崖豆藤屬植物美麗崖豆藤MillettiaspeciosaChamp.的干燥根，又叫山蓮藕、大力薯，性味甘、平，歸肺、腎經，具有補虛潤肺、強筋活絡的功效，在兩廣地區常作為煲湯原料藥，是一種食藥兩用的嶺南特色藥物。臨床證明其對多種慢性疾病有治療作用，如腰

肌酸痛、跌打損傷、風濕性關節炎、肺結核、慢性支氣管炎、慢性肝炎等均有一定療效[1-2]。目前尚未見有關牛大力水提物抗炎鎮痛作用的系統報道，為此本實驗在前期研究的基礎上[3-5]，通過建立動物炎癥和疼痛模型，對牛大力水提取物開展了抗炎鎮痛作用的藥效學實驗研究。

1 材料與儀器

1.1 動物

SPF級KM小鼠，體重18～22 g，實驗動物質量合格許可證號：SCXK(粵)2008-0002(44007200003653)；SD大鼠，體重120～150 g，實驗動物質量合格許可證號：SCXK(粵)2008-0002(44007200003654)，均由廣東省醫學實驗動物中心提供。動物正常飼養3 d后供試。

1.2 受試藥物

牛大力(廣州致信中藥飲片有限公司，批號：100701)。牛大力水提物制備：采用水煎法自制，取適量牛大力干燥藥材，用8倍體積的蒸餾水浸泡1 h，加熱煮沸2 h，趁熱濾取藥液；殘渣再加6倍量蒸餾水，煮沸1 h，合并兩次濾液，濃縮至1 g生藥·mL-1備用，使用時用新鮮蒸餾水稀釋至所需給藥濃度。

吲哚美辛腸溶片(廣東華南藥業有限公司，批號：121101)；36%乙酸(廣州化學試劑廠，批號：20110801-2)；二甲苯(廣州化學試劑廠，批號：20040704-2)。

1.3 儀器

UV2550型紫外可見分光光度計(日本Shimadzu公司)，YLS-6B智能熱板儀(山東省醫學科學院設備站)，BP211D型電子分析天平(德國Sartorius公司)。

2 方法

2.1 牛大力水提物抗炎作用實驗

2.1.1 對小鼠耳廓腫脹的影響[6]取KM小鼠60只，雌雄各半，隨機分為5個組：空白組，陽性對照組，牛大力水提物高(20 g·kg-1·d-1)、中(10 g·kg-1·d-1)、低(5 g·kg-1·d-1)劑量給藥組。陽性藥按吲哚美辛腸溶片溶液0.01 g·kg-1·d-1灌胃，空白組給予等容積蒸餾水，連續4 d。于末次給藥后1 h，將二甲苯20 μL滴于各小鼠右耳兩面致炎，左耳不涂作為對照。致炎20 min后小鼠頸部脫臼處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓耳片，精密稱重，以左、右耳片重量之差作為腫脹度，比較各組間差異。

2.1.2 對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響[7]分組和給藥方法同2.1.1。于末次給藥后1 h，各鼠尾靜脈注射1%伊文思藍0.9%氯化鈉溶液10 g·kg-1體重，立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL/只，20 min后小鼠脫頸椎處死，剪開腹腔，用5 mL 0.9%氯化鈉溶液沖洗腹腔數次，收集洗液，1 000 r·min-1離心5 min，取上清液用紫外分光光度計于590 nm處測吸光度(A)，比較各組間差異。

2.1.3 對大鼠棉球肉芽腫的影響[6]取SD大鼠60只，雌雄各半，體重為180～220 g，隨機分成5組：空白組，吲哚美辛陽性對照組(0.005 g·kg-1·d-1)，牛大力水提物高(10 g·kg-1·d-1)、中(5 g·kg-1·d-1)、低(2.5 g·kg-1·d-1)劑量給藥組。在乙醚淺麻醉下，腹部去毛消毒，將滅菌棉球[每個棉球重(25±0.5) mg，高壓滅菌，每個各加入氨芐青霉素1 mg·(0.1 mL)-1，50 ℃烘干]植入大鼠皮下，然后縫合。術后次日開始給藥，空白對照組給等量的飲用水，連續10 d。第11天脫頸椎處死大鼠，打開原切口，將棉球連同周圍結締組織一起取出，剔除脂肪組織，放在烘箱里60 ℃烘干12 h后稱重，將稱得的重量減去棉球重量即得棉球肉芽腫重量，比較各組差異。

2.2 牛大力水提物鎮痛作用實驗

2.2.1 對醋酸所致小鼠疼痛的影響[8]分組和給藥方法同2.1.1。于末次給藥后1 h，每組每只小鼠腹腔注射0.6%的醋酸溶液0.2 mL，記錄注射醋酸后15 min內小鼠的扭體次數，比較各組間差異。

2.2.2 對熱刺激所致小鼠疼痛的影響[8]取KM雌性小鼠，將其置于恒溫(55±0.5)℃的熱板測痛儀上，用秒表記錄小鼠出現舔后足的時間(s)作為給藥前痛閾值，選取60只痛閾值5～30 s的合格小鼠，分組和給藥方法同2.1.1，連續給藥3 d，于末次給藥后1 h再測定各小鼠的痛閾值，觀察時間為60 s。

2.3 統計學方法

3 結果

3.1 對小鼠耳廓腫脹的影響

牛大力水提物各給藥組均能減輕二甲苯致炎小鼠的耳腫脹度，高劑量組效果明顯，與空白組相比差異具有統計學意義(P<0.05)，提示牛大力水提物對急性炎性腫脹具有抑制作用。見表1。

表1 牛大力水提取物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；下同

3.2 對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響

牛大力水提物高、中劑量組可明顯減少醋酸所致的小鼠腹內炎性物質的滲出，抑制毛細血管通透性的增高，與空白組相比差異有統計學意義(P<0.01或0.05)，提示牛大力水提物對炎性過程中毛細血管通透性增高具有一定的抑制作用。見表2。

表2 牛大力水提物對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性的影響

3.3 對大鼠棉球肉芽腫的影響

牛大力水提物高、中、低劑量組均可明顯減輕大鼠棉球肉芽的凈重，與模型組比較均有統計學意義(P<0.05或0.01)，低劑量組效果最好，其肉芽抑制率與陽性對照組相當，提示牛大力水提物具有抑制大鼠肉芽腫增重的抗炎消腫作用。見表3。

表3 牛大力水提物對大鼠棉球肉芽腫抑制的影響

3.4 對醋酸所致小鼠疼痛的影響

牛大力水提物高、中、低劑量組均可減少醋酸所致小鼠15 min內的扭體次數，其中高、中劑量組效果明顯，與空白組相比差異有統計學意義(P<0.01)，提示牛大力有較強的鎮痛作用。見表4。

表4 牛大力水提物對醋酸所致小鼠疼痛的影響

3.5 對熱刺激所致小鼠疼痛的影響

牛大力水提物高、中劑量組可明顯提高小鼠痛閾值，延長小鼠痛閾時間，與空白組相比差異有統計學意義(P<0.05)，提示牛大力有較強的鎮痛作用。見表5。

表5 牛大力水提物對熱刺激所致小鼠疼痛的影響

4 討論

炎癥是許多疾病的基本病理過程，其基本病理變化為局部微血管反應和血液成分的滲出，局部臨床特征是紅腫熱痛和功能障礙。炎癥發生發展過程一般分為3期，早期以毛細血管擴張、通透性亢進為主，中期為血小板吸附及白細胞游走，晚期為肉芽組織增生[7]。本實驗主要從炎癥的早期和晚期入手研究牛大力水提取物的抗炎作用。實驗結果表明牛大力水提取物可減輕二甲苯引起的小鼠耳腫脹，在以血管通透性為主要改變的急性炎癥模型中，能明顯抑制醋酸所致小鼠急性腹膜炎的毛細血管通透性，說明牛大力水提物對炎癥反應早期的急性滲出性腫脹有明顯抑制作用，能有效對抗急性炎癥。在以肉芽組織增生為指標的慢性炎癥模型實驗中，牛大力水提物能夠顯著抑制異物所致大鼠炎癥的肉芽增生，但沒有表現出明顯的量效關系，說明牛大力水提物對異物所致大鼠炎癥肉芽增生的抑制作用具有最佳作用劑量，并非劑量越大越好。

本實驗研究鎮痛的動物模型采用了醋酸致痛小鼠扭體實驗及熱板實驗。扭體實驗是常用來篩選非甾體類抗炎藥鎮痛作用的一種敏感而簡便的方法，與外周神經鎮痛有很大的關系，常用一些化學刺激物如強酸等給入動物體內造成疼痛模型。熱板實驗是常用于篩選中樞鎮痛藥的一種動物模型，中樞鎮痛藥可相對延長熱板刺激的反應時間，而外周鎮痛藥則不能，主要通過對動物施加一定的傷害性刺激如熱、電等引起疼痛反應。牛大力水提物在這兩個模型中均表現出較好的鎮痛作用，能夠顯著減少醋酸致痛小鼠的扭體次數，明顯提高熱刺激致痛小鼠的痛閾值，表明牛大力水提取物對物理和化學因素引起的疼痛均有明顯的對抗作用，具有一定的外周鎮痛及中樞鎮痛作用，可緩解臨床炎癥反應引起的疼痛。

綜上所述，牛大力水提取物具有抗炎鎮痛作用，為臨床用于炎癥反應提供了實驗依據，但關于其藥理作用機制可能是多方面的，尚有待于進一步探討。

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ExperimentalStudiesontheAnti-inflammatoryandAnalgesicEffectsoftheWaterExtractfromMillettiaeSpeciosaeRadix

LIUDandan*，WEIZhixiong

(Dongguan Institutes For Food And Drug Control，Dongguan 523109，Guangdong)

Objective：To study the anti-inflammatory and analgesic effects ofMillettiaeSpeciosaeradix water extract.MethodsAnti-inflammatory effects were determined by xylene induced ear acute inflammatory edema，capillary permeability of peritoneal and granuloma induced with cotton ball in mice.Analgesic effects were observed by acid causing body distortion test and action to pain caused by heat in mice.ResultsThe water extract ofM.Speciosaeradix resisted the swelling of pinna of mice caused by xylene and capillary permeability of peritoneal in mice，with depressant effect on the tampon granuloma obviously.In addition，it could decreased the times of stretching and raised the pain threshold.ConclusionThe water extract fromM.Speciosaeradix manifested obvious anti-inflammatory effects on acute and chronic inflammatory reactions.The pain reactions induced by heat and chemical stimulus were significantly relieved by the water extract ofM.Speciosaeradix.

MillettiaeSpeciosaeradix；Water extract；Anti-inflammatory effect；Analgesic effect

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劉丹丹，主管中藥師，研究方向：藥品檢驗；Tel：(0769)22017096，E-mail：269517874@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.07.005

2014-03-31)