強力寧片質量標準研究

李俊芳，龐永清，鄭艷春，張東閣

(1.頸復康藥業集團有限公司，河北 承德 067000； 2.河北省中藥新輔料工程技術研究中心，河北 承德 067000； 3.湖南華納大藥廠有限公司，湖南 長沙 410006)

強力寧片質量標準研究

李俊芳1，2*，龐永清3，鄭艷春1，2，張東閣1，2

(1.頸復康藥業集團有限公司，河北 承德 067000； 2.河北省中藥新輔料工程技術研究中心，河北 承德 067000； 3.湖南華納大藥廠有限公司，湖南 長沙 410006)

目的建立強力寧片的質量控制標準。方法對強力寧片中的刺五加、枸杞子進行薄層色譜鑒別；采用高效液相色譜法對異嗪皮啶進行含量測定。結果薄層色譜斑點清晰，陰性對照無干擾；異嗪皮啶進樣量在0.042 88～0.257 28 μg與峰面積呈良好的線性關系(r=0.999 9，n=6)；平均加樣回收率為97.77%，RSD=1.98%。結論建立的TLC和HPLC專屬性強、準確度高、重復性好，可用于強力寧片的質量控制。

強力寧片；薄層色譜鑒別；高效液相色譜法；質量標準

強力寧片收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準·中藥成方制劑》第十冊，由刺五加和枸杞子兩味中藥組成，具有強身益智、健腦補骨的功效。臨床上用于治療體乏無力，失眠健忘，精神倦怠，過度疲勞，腰膝酸軟，脾腎陽虛，食欲不振等癥[1]。強力寧片原質量標準項下沒有鑒別項和含量測定項，為更好地控制產品質量，本實驗采用薄層色譜鑒別法對處方中刺五加和枸杞子進行鑒別，采用高效液相色譜法對片劑中異嗪皮啶進行含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津LC-10A型高效液相色譜儀(島津LC-10AT泵，SPD-M10A紫外檢測器，CLASS-LC5.03色譜工作站)；AL104型電子天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]；HH-S型水浴鍋(鞏義市英峪予華儀器廠)；SK3200H超聲清洗器(上海科導儀器有限公司)。

1.2 試藥

異嗪皮啶對照品(批號：0837-200203)、刺五加對照藥材(批號：120991-200405)、枸杞子對照藥材(批號：121072-200404)，均購自中國食品藥品檢定研究院。強力寧片(頸復康藥業集團有限公司，批號：110311，110312，110313)；薄層色譜硅膠預制板(10 cm×10 cm，山東省煙臺市化學工業研究所)；乙腈、甲醇為色譜純；水為二次蒸餾水；其他所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 刺五加[2]取本品5片，除去糖衣，研細，加甲醇25 mL，超聲處理(功率250 W，頻率30 kHz)20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，置分液漏斗中，用三氯甲烷提取2次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。照處方配比，除去刺五加，按強力寧片工藝制備刺五加陰性樣品。取刺五加陰性樣品，照供試品溶液制備方法同法制成陰性樣品溶液。另取刺五加對照藥材2 g，同法制成對照藥材溶液。再取異嗪皮啶對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述4種溶液各5 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸丁酯-甲醇-濃氨試液(10∶8∶3∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品色譜則無此斑點。見圖1。

1～3.樣品 4.刺五加對照藥材 5.異嗪皮啶對照品 6.刺五加的陰性樣品 圖1 強力寧片中刺五加TLC圖

2.1.2 枸杞子[2]取本品5片，除去糖衣，研細，加水35 mL，加熱煮沸15 min，放冷，濾過，濾液用乙酸乙酯15 mL振搖提取，提取液濃縮至干，加甲醇1 mL，作為供試品溶液。照處方配比，除去枸杞子，按強力寧片工藝制備枸杞子陰性樣品。取枸杞子陰性樣品，照供試品溶液制備方法同法制成陰性樣品溶液。另取枸杞子對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸丁酯-甲醇-濃氨試液(10∶8∶3∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性樣品色譜則無此斑點。見圖2。

1～3.樣品 4.枸杞子對照藥材 5.缺枸杞子的陰性樣品 圖2 強力寧片中枸杞子TLC圖

2.2 含量測定[3-8]

2.2.1 對照品溶液的制備 取異嗪皮啶對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含異嗪皮啶5 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10片，除去糖衣，精密稱定，研成細粉，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入0.25 moL·L-1硫酸溶液25 mL超聲處理45 min，轉移至分液漏斗中，再用5 mL 水多次洗滌容器，倒入分液漏斗中，用三氯甲烷提取4次(25，25，15，15 mL)，合并三氯甲烷液，65 ℃以下水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液用0.45 μm的微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3 陰性供試品溶液的制備 照處方配比，除去刺五加，按強力寧片工藝制備缺刺五加的陰性樣品，再按2.2.2供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.2.4 色譜條件與系統適用性 Inertsil ODS-3色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-甲醇-水-甲酸(5∶25∶70∶0.1)為流動相，流速1.0 mL·min-1，檢測波長：344 nm。見圖3。

1.異嗪皮啶 A.異嗪皮啶對照品 B.強力寧片 C.缺刺五加的陰性對照品 圖3 強力寧片及其對照品HPLC圖

2.2.5 線性關系考察 精密稱取異嗪皮啶對照品0.026 8 g，置500 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。分別精密量取對照品貯備液2，4，6，8，10，12 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取20 μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積，以異嗪皮啶進樣量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=2 769 493.7X-846.7(r=0.999 9)，表明異嗪皮啶0.042 88～0.257 28 μg與峰面積呈良好的線性關系。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取同一異嗪皮啶對照品溶液，精密吸取20 μL，連續進樣6次，測定異嗪皮啶峰面積的RSD=0.63%，表面儀器精密度良好。

2.2.7 穩定性試驗 取同一供試品溶液(批號：110101)，分別在0，1，2，4，6，8，12，24 h精密吸取20 μL進樣測定，結果峰面積的RSD=0.85%，表明制備的供試品溶液在24 h內基本穩定。

2.2.8 重復性試驗 取同一批號強力寧片樣品(批號：110101)6份，按2.2.2項下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，結果異嗪皮啶含量的平均值為46.82 μg·g-1，RSD=1.52%，表明試驗方法重復性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗 取強力寧片樣品(批號：110101)粉末6份，每份約0.25 g，精密稱定，分別精密加入0.011 8 mg·mL-1的異嗪皮啶對照品溶液1 mL，照2.2.2項下方法制備供試品溶液，進樣20 μL，測定，計算回收率，結果見表1。

表1 強力寧片中異嗪皮啶加樣回收率試驗(n=6)

注：異嗪皮啶對照品加入量均為11.80 μg

2.2.10 樣品含量測定 取110311，110312，110313 3批樣品，按2.2.2項下的方法制備供試品溶液，依法進樣測定，結果3批樣品中異嗪皮啶的質量分數分別為19.36，20.52，22.44 μg·g-1，平均質量分數為20.77 μg·g-1。

3 討論

本實驗選用乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)、甲醇-水-甲酸(30∶70∶0.5)、乙腈-甲醇-水-甲酸(5∶25∶70∶0.1)等不同的流動相進行試驗，經比較以乙腈-甲醇-水-甲酸(5∶25∶70∶0.1)為流動相得到的色譜圖效果最佳。通過紫外掃描，異嗪皮啶在344 nm處有最大吸收，故選擇344 nm為檢測波長。

異嗪皮啶即7-羥基-6，8-二甲氧基香豆素，其本身具有一定的升華性。因此，本實驗在對樣品處理過程中，溫度盡可能低，將誤差減少至最小。

筆者在做薄層層析實驗時，曾以三氯甲烷-甲醇(19∶1)、三氯甲烷-乙酸丁酯-甲醇-濃氨試液(10∶8∶3∶0.2)作為鑒別刺五加的展開劑；以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸(3∶2∶1)、三氯甲烷-乙酸丁酯-甲醇-濃氨試液(10∶8∶3∶0.2)作為鑒別枸杞子[9]的展開劑；結果以三氯甲烷-乙酸丁酯-甲醇-濃氨試液(10∶8∶3∶0.2)為展開劑鑒別這兩種中藥最為理想。

實驗研究建立的TLC和HPLC專屬性強、準確度高、重復性好，可用于強力寧片的質量控制。

[1] 衛生部.中華人民共和國衛生部藥品標準·中藥成方制劑[S].第十冊.1995：188.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：192-193.

[3] 江敏，張強.HPLC法測定刺五加膠囊中異嗪皮啶的含量[J].黑龍江醫藥，2005，18(2)：9.

[4] 郭美華，史文秀，王金華，等.高效液相色譜法測定安神益心液中異嗪皮啶的含量[J].中國醫院藥學雜志，2011，31(2)：171.

[5] 曾建偉，林培玲，謝勇，等.HPLC法同時測定草珊瑚中富馬酸、異嗪皮啶和迷迭香酸的含量[J].藥物分析雜志，2011，31(7)：1417.

[6] 林小燕.反相HPLC法測復方片仔癀含片中腫節風的異嗪皮啶含量[J].中國實驗方劑學雜志，2002，8(3)：7.

[7] 王憲明，周玨，曲凡.反相高效液相色譜法測定刺五加藥材中異嗪皮啶含量[J].成都中醫藥大學學報，2007，30(3)：59.

[8] 鄭偉然.HPLC法測定中藥材刺五加中異嗪皮啶的含量[J].現代中藥研究與實踐，2003，17(1)：29.

[9] 孟楣，高家榮，魏良兵.薄層色譜法鑒別枸杞子的實驗研究[J].中國藥事，2007，21(11)：912.

QualityStandardofQiangLiningTablets

LIJunfang1，2，PANGYongqing3，ZHENGYanchun1，2，ZHANGDongge1，2

(1.JingfukangPharmaceuticalGroupCo.，Ltd.，Chengde067000，China； 2.NewExcipientsofTraditionalChineseMedicineEngineeringResearchCenterofHebeiProvince，Chengde067000，China； 3.HunanWarnerLargePharmaceuticalCompanies，Changsha410006，China)

Objective：To established the method for quality control of Qiang Lining tablets.MethodsAcanthopanacis Senticosi Radix et Rhizoma seu Caulis and Lycii Fructus in Qiang Lining tablets were identified by TLC.The content of isofraxidin in Qiang Lining tablets was determined by HPLC.ResultsThe spots on the TLC plate were clear and the negative control sample didn’t disturb.A good linearity was obtained for isofraxidin in the range of 0.042 88～0.257 28 μg(r=0.999 9，n=6)；the average recovery was 97.77%，RSD 1.98%.ConclusionThe method are specific，accurate and reproducible，and can be used for quality control of the Qiang Lining tablets.

Qiang Lining Tablets；TLC；HPLC；Quality standard

*

李俊芳，工程師，研究方向：中藥新藥制劑及質量，Tel：(0314)2292392，E-mail：ljf19791221@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.07.013

2013-12-30)