陳皮飲片的質量控制

張科衛，陳文星，薛丹丹

(南京中醫藥大學，江蘇南京 210023)

陳皮為蕓香科植物橘Citrus reticulate Blanco及其栽培變種的干燥成熟果皮。藥材分“陳皮”與“廣陳皮”。產地加工時，采摘成熟果實，剝取果皮，曬干或低溫干燥，即為陳皮藥材。臨床上以飲片入藥，將陳皮藥材除去雜質，噴淋水，潤透，切絲，干燥。即為陳皮飲片。

陳皮飲片苦、辛、溫，歸肺、脾經。具有理氣健脾、燥濕化痰之功，臨床上主要用于腕腹脹滿、食少吐瀉、咳嗽痰多等癥［1］。

陳皮中主要含有揮發油及黃酮類成分，其中黃酮類成分是目前已知的具有廣泛的藥理作用的一類物質。研究表明，陳皮中含有的黃酮類成分具有抗氧化、清除自由基［2-3］、抗炎［4］、抗癌［5-6］、預防心血管疾病［7］、抗誘變［8］等多種生理活性。

由于陳皮中所含有的黃酮類成分在柑橘屬植物中廣泛存在，且目前市場上陳皮來源廣泛，產地和來源不同，其中所含有的黃酮類成分差異顯著。《中國藥典》2010年版中僅以橙皮苷作為指標來對陳皮飲片的質量進行控制，這對全面評價陳皮的質量顯得有點欠缺。

經市場調研，發現目前南京市場上的陳皮飲片主要是以“陳皮”為主，“廣陳皮”很少。因此，本次實驗，以南京市場上收集到的陳皮飲片為研究對象，對其中的幾種黃酮類成分進行了測定。旨在為陳皮飲片的質量控制做一些有益的探索。

1 儀器、藥品與試劑

Waters e2695型高效液相色譜儀，2998PDA檢測器，Millennium 32色譜管理系統;Sartorius BP211D型電子天平。

橙皮苷對照品 (批號 110721-201115)，購自中國食品藥品檢定研究院;蕓香柚皮苷 (批號120319)、甜橙黃酮 (批號100914)、川陳皮素(批號110902)、橘皮素 (批號120524)，均購自四川維克奇生物科技有限公司。所有對照品均經HPLC檢測為單一成分，純度達到98%以上。

陳皮飲片10批，購自南京各大藥店及中醫門診部，均經南京中醫藥大學中藥鑒定教研室王春根教授鑒定分別為蕓香科植物橘Citrus reticulate Blanco及其栽培變種的干燥成熟果皮經炮制加工而成。

乙腈為HPLC級，水為亞沸蒸餾水 (自制)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Agilent TC-C18(2)色譜柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相為乙腈 (A)-水(B)，梯度洗脫 (0～13 min，20% ～35%A;13～16 min，35% ～50%A;16～30 min，50%A;30～34 min，50% ～62%A;34～35 min，62% ～100%A;35～37 min，100% ～20%A;37～50 min，20%A)。體積流量1.0 mL/min;柱溫30℃。

2.2 測定波長的選擇 經220～375 nm掃描發現，幾種黃酮類成分的最大吸收波長不同。蕓香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黃酮、川陳皮素、橘皮素的最大吸收波長分別為 283.0、284.2、330.7、334.3、324.7 nm。于是選擇在283 nm處測定蕓香柚皮苷和橙皮苷，在331 nm處測定甜橙黃酮和川陳皮素，在324 nm處測定橘皮素。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取干燥至恒重的蕓香柚皮苷299.80 mg、橙皮苷1.9888 g、甜橙黃酮1.58 mg、川陳皮素10.08 mg、橘皮素3.98 mg置于同一100 mL的量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得對照品貯備液。

2.3.2 供試品溶液的制備 稱取陳皮飲片粉末(過四號篩)0.1 g，精密稱定，精密加入甲醇10 mL，超聲處理 (功率250 W，頻率50 kHz)30 min，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 系統適應性試驗 取供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀測試，蕓香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黃酮、川陳皮素和橘皮素的保留時間分別為9.4、10.5、22.1、24.4、27.9 min。理論塔板數以次橙皮苷計不低于5000，所有對照品所對應的色譜峰與相鄰色譜峰的分離度均不低于1.5。見圖1。

圖1 不同檢測波長下的混合對照品及樣品 (廣西產，批號130111)的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of mixed reference substances and sample(from Guangxi region，Lot 130111)of various detected wavelengths

2.5 標準曲線的制備 精密吸取上述對照品貯備液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得混合對照品溶液系列 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ)，取10 μL進樣，測定。以峰面積為縱坐標，對照品質量濃度(μg/mL)為橫坐標，進行線性回歸，得各組分的回歸方程及相關系數，見表1。可見該方法在試驗范圍內線性關系良好。

表1 各組分線性關系測定結果Tab.1 Calibration data

2.6 精密度試驗 精密吸取“2.5”項下的對照品溶液Ⅲ10 μL進樣，重復6次，以峰面積計算RSD，結果蕓香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黃酮、川陳皮素，橘皮素RSD分別為1.4%、1.8%、1.9%、1.2%和2.0%。

2.7 重復性試驗 取同一產地的陳皮飲片粉末(廣西產，批號130111，過四號篩)6份，分別制成供試品溶液，測定，計算。結果蕓香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黃酮、川陳皮素，橘皮素RSD分別為1.6%、1.3%、1.6%、1.4%和1.7%。

2.8 穩定性試驗 精密吸取新配制的供試品溶液(廣西產，批號130111)，每隔2 h取10 μL進樣測定，結果蕓香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黃酮、川陳皮素，橘皮素 RSD分別為1.6%、1.8%、1.0%、1.0%和1.7%。表明供試品溶液在12 h內保持穩定。

2.9 加樣回收率試驗 配制含蕓香柚皮苷113.80 μg/mL、橙皮苷 799.80 mg/mL、甜橙黃酮 0.64 μg/mL、 川 陳 皮 素 3.80 μg/mL、 橘 皮 素1.50 μg/mL的混合對照品溶液，作為加樣回收對照品溶液。稱取陳皮飲片粉末 (廣西產，批號130111，過四號篩)0.05 g，共6份，分別精密加入上述混合對照品溶液5.0 mL，照“2.3.2”項下供試品溶液制備方法制成加樣回收樣品液，測定，計算平均加樣回收率，結果蕓香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黃酮、川陳皮素，橘皮素平均加樣回收率分別為 99.91%、99.59%、100.22%、99.85% 和99.71%，RSD分別為 1.3%、1.2%、1.3%、1.3%和1.5%。

2.10 樣品測定 取南京市場上收購到的陳皮飲片10批，照“2.2.2”項下操作，制成供試品溶液，取10 μL進樣，以外標法計算，每個批號平行3份，每份進樣2次。結果見表2。

表2 樣品測定結果 (n=6)Tab.2 Determination of flavonoids in samples from different growing regions in China(n=6)

3 討論

3.1 陳皮飲片中的黃酮類成分比較多，從已有文獻看，有一些學者已經嘗試著對其中的幾個成分進行了測定。鄭國棟對“廣陳皮”進行研究時，以283、330 nm兩個波長對其中的橙皮苷、川陳皮素、3，5，6，7，8，3’，4’-七甲氧基黃酮、橘皮素、5-羥基-6，7，8，3’，4’-五甲氧基黃酮進行了檢測［9］;封宇飛在研究陳皮時，以300 nm為檢測波長對其中的柚皮蕓香苷、橙皮苷、川陳皮素、3，5，6，7，8，3’，4’-七甲氧基黃酮、紅橘素進行測定［10］;肖建春研究陳皮時，以283 nm為檢測波長，對其中的橙皮苷、柚皮苷、川陳皮素、橘紅素進行檢測［11］。這些實驗對陳皮的質控方法進行了有益的探索，但選擇的測定波長并不是其中某些成分的最大吸收。本實驗對目前南京市場上常見的“陳皮”飲片進行研究，有針對性地對其中具有明顯生理活性的幾個黃酮類成分進行研究，在摸清其最大吸收波長的基礎上，采用PDA檢測器逐個進行定量分析。測定結果的重復性和穩定性都比較高。

3.2 這次收集到的主要是浙江和江西的飲片，只有一個批次的飲片來自于廣西。從實驗結果看，其中所含的橙皮苷量均大于6.0%，遠遠高于《中國藥典》2010年版所規定的不低于2.5%的標準［1］，也高于以往文獻記載的“廣陳皮”中橙皮苷量［9］;蕓香柚皮苷的量也明顯高于以往文獻記載的“陳皮”中的量［10］，差不多高了一倍左右;川陳皮素的量低于“廣陳皮”［9］，但與以往文獻記載的“陳皮”中量相一致［10］;橘皮素量低于以往文獻的記載［10］。甜橙黃酮的量為本實驗首次測定，結果發現收集到的南京市場上陳皮飲片中所含的甜橙黃酮量非常低。

3.3 本實驗測定的均為陳皮中具有生理活性的黃酮類成分，且以多甲氧基黃酮為主，此次測定的5種黃酮成分中，除蕓香柚皮苷外，其余4種均為甲氧基黃酮類物質。近年來研究表明，陳皮中的多甲氧基黃酮類成分顯著抗腫瘤活性［12-13］，其中川陳皮素在體外試驗中表現出很強的抗腫瘤活性，能對抗多種腫瘤細胞的增殖［14-15］，還能有效刺激小鼠氣管黏膜下腺液體分泌速度［16］。

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