大蒜硝黃膏中芒硝體外經(jīng)皮滲透實(shí)驗(yàn)研究

馬曉莉，曹松云，仇金龍，賈鏡鴻

(河北大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，河北保定 071000)

腸梗阻是外科常見(jiàn)的急腹癥之一，其臨床表現(xiàn)為腹痛、腹脹、嘔吐和肛門(mén)停止排泄、排氣，中醫(yī)謂之“結(jié)癥”。腸梗阻不但可引起腸管本身解剖與功能上的改變，并可導(dǎo)致全身性生理上的紊亂，臨床病象復(fù)雜多變。中醫(yī)治療腸梗阻的方法包括內(nèi)治法、外治法、針灸治療等。穴位貼敷法是常用的中醫(yī)外治法之一，目前臨床多用于哮喘等慢性病的治療，應(yīng)用于急癥的較少。將穴位貼敷療法應(yīng)用于腸梗阻治療，可以早期介入，大大縮短療程，降低并發(fā)癥的發(fā)生，降低治療費(fèi)用。但是穴位貼敷療法存在基礎(chǔ)研究較少、制劑不規(guī)范、缺少質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和療效評(píng)價(jià)方法等問(wèn)題，因此對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步整理和挖掘，吸收國(guó)外先進(jìn)的透皮治療技術(shù)，選擇新材料和新方法，制備高效中藥透皮給藥系統(tǒng)具有重要的意義［1］。大蒜硝黃膏為《中醫(yī)天灸療法》中的成方［2］，由生大黃、芒硝、大蒜、陳醋適量，調(diào)成糊膏，貼敷于神闕穴治療腸梗阻。方中大黃瀉下熱結(jié)，蕩滌腸胃為君藥，芒硝軟堅(jiān)潤(rùn)燥，通導(dǎo)大便為臣藥，米醋辛散芳香，可增強(qiáng)藥物滲透力，助達(dá)病所［3］。大黃功效成分體外透皮滲透特性已在另一篇文章中報(bào)道。芒硝的主要成分為硫酸鈉(Na2SO2－4·10H2O)，其瀉下作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)與硫酸鈉密切相關(guān)，內(nèi)服后其硫酸根離子不被腸黏膜吸收，存留腸內(nèi)形成高滲溶液，使腸內(nèi)水分增加，引起機(jī)械刺激和化學(xué)刺激，促進(jìn)腸蠕動(dòng)，發(fā)生瀉下作用［4-5］。芒硝體外透皮滲透特性未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，本研究通過(guò)體外透皮實(shí)驗(yàn)，以芒硝中的功效成分SO2－4為指標(biāo)，考察大蒜硝黃膏穴位貼敷的透皮吸收性能，同時(shí)考察不同賦形劑 (醋、姜汁、植物油)和不同配伍對(duì)芒硝SO2－4成分透皮釋放行為的影響，為劑型改造和臨床制定更合理的用藥方案提供參考。

1 材料

1.1 儀器與設(shè)備 TU-1900雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司);TT-6透皮吸收試驗(yàn)儀 (天津市正通科技有限公司);島津AUW系列十萬(wàn)分之一電子天平 (島津國(guó)際貿(mào)易有限公司);TDL-5-A型低速臺(tái)式離心機(jī) (上海安亭科學(xué)儀器廠);KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);螺旋測(cè)微器 (哈爾濱量具刃具廠)。

1.2 主要材料與試劑 大黃、芒硝購(gòu)于安國(guó)市昌達(dá)中藥材飲片有限公司，經(jīng)我院崔桂華老師鑒定，符合《中國(guó)藥典》2010年版標(biāo)準(zhǔn);陳醋 (河北保定槐茂有限公司);植物油、大蒜、姜 (保定市百樂(lè)超市);0.9%氯化鈉 (上海市華中藥業(yè)有限公司，批號(hào)11012507);其余試劑均為分析純;水為高純水。皮膚來(lái)源:昆明種小鼠，雄性，中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物許可證號(hào):SCXK-(軍)2007-004。

2 方法

2.1 芒硝中SO42－測(cè)定方法［6］分別取0.1009 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)硫酸鈉溶液0、1、2、3、4、5、6 mL于10 mL的比色管中，同時(shí)分別加入3 mL生理鹽水，加入0.0100 mol/L氯化鋇溶液0.50 mL，搖勻，放置5 min后，加入0.0100 mol/L K2CrO4溶液0.50 mL，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。移入10 mL干燥離心管中，用離心機(jī)離心3 min，3500 r/min。吸取5.00 mL上清液于10 mL比色管中，加入pH 3.4的HAc-NaAc緩沖溶液1.50 mL，0.015%聯(lián)鄰甲苯胺溶液3.0 mL，用水稀釋至刻度，搖勻。15 min后以0 mL試劑為空白參比，于620 nm處測(cè)量吸光度。以硫酸鈉的質(zhì)量為橫坐標(biāo)X，以吸光度為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為:Y=0.9141X+0.0058，r為0.999。線性范圍為0～0.6054 mg。

2.2 離體鼠皮的制備［7］取質(zhì)量20 g左右的小鼠，用8%硫化鈉 (Na2S)溶液脫去腹部、側(cè)腹部及背部被毛，脫頸椎處死，分別剪下腹部、側(cè)腹部及背部皮膚，除去脂肪及皮下組織，用生理鹽水沖洗干凈，用濾紙吸干表面水分后，用螺旋測(cè)微器測(cè)量皮厚度，置于生理鹽水中，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 實(shí)驗(yàn)分組及大蒜硝黃膏的制備 前期藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明［8-9］，大蒜硝黃膏穴位貼敷有明顯的促排便、促進(jìn)腸蠕動(dòng)和胃排空作用，并能使腸套疊小鼠的腸管還納率和還納程度明顯提高，而非穴位組的作用弱，對(duì)大鼠不完全性腸梗阻模型有治療作用，表明大蒜硝黃膏神闕穴給藥可同時(shí)發(fā)揮藥物和穴位的雙重作用。為了驗(yàn)證上述結(jié)論的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)為了考察不同黏合賦形劑 (醋、姜汁、植物油)和不同配伍對(duì)芒硝透皮釋放行為的影響，設(shè)計(jì)了不同部位皮膚實(shí)驗(yàn)組、不同賦形劑實(shí)驗(yàn)組和不同配伍實(shí)驗(yàn)組三組實(shí)驗(yàn)，見(jiàn)表1。測(cè)量小鼠皮膚，結(jié)果顯示腹部皮膚最薄，背部最厚。

表1 不同實(shí)驗(yàn)組膏的組成、制備方法及所用鼠皮種類(lèi)和厚度

2.4 體外透皮吸收實(shí)驗(yàn) 體外透皮吸收試驗(yàn)儀恒溫槽中加入適量水，設(shè)定恒溫槽中水溫為 (37±0.1)℃。向Franz擴(kuò)散池的接收池內(nèi)加入11.5 mL接收液 (生理鹽水)及磁轉(zhuǎn)子，設(shè)定接收池的攪拌速度為400 r/min，進(jìn)行預(yù)熱。將按“2.3”項(xiàng)制備好的小鼠皮膚用夾子固定于擴(kuò)散池的供藥池與接收池之間，角質(zhì)層面向上，真皮層面向下，排盡氣泡。取1.5 g藥膏置于皮膚上，使之與皮膚密切接觸，接觸面積與接收池相當(dāng)，將Franz擴(kuò)散池置于透皮吸收儀中，內(nèi)徑為1.53 cm，透皮面積為1.83 cm2。分別于5、10、20、40、60、90、120 min從接收池取樣3 mL，同時(shí)向接收池中補(bǔ)充等量的新鮮接收液。將所取3 mL樣品置于10 mL比色管中，同時(shí)另取一個(gè)10 mL比色管，加入3 mL的生理鹽水為空白對(duì)照，加入0.0100 mol/L氯化鋇溶液0.50 mL，按“2.1”項(xiàng)中所述方法操作，測(cè)定其吸光度，計(jì)算樣品中的質(zhì)量濃度，再計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)累積透過(guò)量Q(mg/cm2)。

其中，Cn為第n個(gè)取樣點(diǎn)的藥物質(zhì)量濃度 (mg/mL)，Ci為第i(i≤n－1)個(gè)取樣點(diǎn)的藥物質(zhì)量濃度 (mg/mL)，V為接收液體積，V0為取樣體積，A為透皮面積。

3 結(jié)果

3.1 由數(shù)學(xué)模型擬合結(jié)果的r2可知，將各實(shí)驗(yàn)組的累積透過(guò)量Q對(duì)t1/2進(jìn)行線性回歸，顯示Q與t1/2線性關(guān)系較好，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)中芒硝體外滲透藥動(dòng)學(xué)符合Higuchi方程。

3.2 不同部位皮膚對(duì)大蒜硝黃膏中芒硝體外透皮特性的影響不同部位皮膚大蒜硝黃膏經(jīng)皮滲透曲線見(jiàn)圖1，滲透藥動(dòng)學(xué)Higuchi方程和滲透參數(shù)見(jiàn)表2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:小鼠腹部、側(cè)腹部、背部皮膚厚度依次增厚;的體外累積透過(guò)量隨著時(shí)間延長(zhǎng)而增加;不同部位皮膚的累積透過(guò)量、透皮速率以腹部最高，側(cè)腹部次之，背部最差，說(shuō)明腹部皮膚透過(guò)性最好，是最優(yōu)的貼敷部位，此結(jié)果與前期藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符［8-9］。

圖1 不同部位皮膚大蒜硝黃膏中經(jīng)皮滲透曲線 (n=3)

3.3 不同賦形劑對(duì)芒硝體外透皮特性的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，賦形劑醋、姜汁、植物油對(duì)大蒜硝黃膏中芒硝成分經(jīng)皮滲透的影響各不相同。以醋為賦形劑，芒硝透皮效果最好，其次為姜汁，植物油最差。醋為賦形劑芒硝中成分2 h累積透過(guò)量及透皮速率均高于姜汁和植物油。不同賦形劑大蒜硝黃膏中經(jīng)皮滲透曲線見(jiàn)圖2，滲透藥動(dòng)學(xué)Higuchi方程和滲透參數(shù)見(jiàn)表3。

表2 不同部位皮膚體外滲透藥動(dòng)學(xué)方程和透皮速率J

表2 不同部位皮膚體外滲透藥動(dòng)學(xué)方程和透皮速率J

皮膚部位 回歸方程(Q-t1/2) r2 J/(mg·cm－2·min－1)腹部皮膚 Q=0.128t1/2－0.0360.988 0.128側(cè)腹部皮膚 Q=0.087t1/2－0.057 0.973 0.087背部皮膚 Q=0.058t1/2－0.0390.974 0.058

圖2 不同賦形劑大蒜硝黃膏中經(jīng)皮滲透曲線(n=3)

表3 不同賦形劑藥膏體外滲透藥動(dòng)學(xué)方程和透皮速率J

3.4 不同配伍對(duì)大蒜硝黃膏中芒硝體外透皮特性的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同配伍對(duì)芒硝成分經(jīng)皮滲透的影響是不同的，全方的2 h積累透過(guò)量和透皮速率最高，去掉大黃或大蒜后芒硝的Q值和J值均減少，但這兩組相差較小，將大蒜大黃同時(shí)都去掉后，Q值和J值最小。表明大黃、大蒜與芒硝配伍，可促進(jìn)芒硝的透皮滲透。不同配伍大蒜硝黃膏芒硝成分的經(jīng)皮滲透曲線見(jiàn)圖3，滲透藥動(dòng)學(xué)Higuchi方程和滲透參數(shù)見(jiàn)表4。

圖3 不同配伍大蒜硝黃膏中經(jīng)皮滲透曲線(n=3)

4 結(jié)論與討論

表4 不同配伍藥膏體外滲透藥動(dòng)學(xué)方程和透皮速率J

4.2 體外透皮實(shí)驗(yàn)中，為了增加中藥有效成分的溶解度，常在接收液 (生理鹽水)中加入不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇。通過(guò)預(yù)試發(fā)現(xiàn)，接收液中加入乙醇，對(duì)吸光度有影響，而芒硝的水溶性好，故本實(shí)驗(yàn)采用生理鹽水為接收液。

4.3 穴位貼敷藥物常用賦形劑主要有:植物油、藥汁、醋、姜汁、水等，功效各不相同。常根據(jù)治療目的不同，選用不同的賦形劑。大蒜硝黃膏中選用醋為賦形劑，醋具有走竄通經(jīng)、活血化瘀、散結(jié)止痛的作用，是良好的穴位貼敷基質(zhì)。目前臨床穴位貼敷應(yīng)用的貼劑為了便于長(zhǎng)期保存，將不同賦形劑均以植物油代替，雖然保證了制劑的穩(wěn)定性，但臨床功效大大降低。本實(shí)驗(yàn)考察了醋、姜汁、植物油等賦形劑對(duì)大蒜硝黃膏透皮特性的影響。研究結(jié)果顯示:不同賦形劑醋、姜汁、植物油對(duì)芒硝經(jīng)皮滲透的影響是不同的，醋促進(jìn)芒硝透皮吸收作用最大，可見(jiàn)大蒜硝黃膏的成方具有科學(xué)性。

4.4 本課題組前期研究已經(jīng)證實(shí)，大蒜硝黃膏貼敷于神闕穴可以增強(qiáng)胃排空、腸蠕動(dòng)，促進(jìn)排便，并能使腸套疊小鼠的腸管還納率和還納程度明顯提高，對(duì)大鼠不完全性腸梗阻模型有治療作用［8-9］。芒硝外用治療腸梗阻等的臨床研究較多［10-12］，但藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究較少［13］，缺乏藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和藥代動(dòng)力學(xué)研究，難以為臨床劑型改造和制定更合理的用藥方案提供依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)大蒜硝黃膏中芒硝成分的體外透皮研究，探討了大蒜硝黃膏的透皮吸收規(guī)律，從而為大蒜硝黃膏的開(kāi)發(fā)研究和臨床推廣提供參考。

［1］李 忠，蘇淑茵，金容完，等.中藥透皮吸收研究現(xiàn)狀與展望［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，23(6):70-73.

［2］譚支紹.中醫(yī)天灸療法［M］.廣西:科學(xué)技術(shù)出版社出版，1991:146-147.

［3］金 珍.生大黃加芒硝調(diào)米醋貼敷神闕穴治療老年人便秘36例療效分析［J］.中國(guó)社區(qū)醫(yī)師，2013，15(6):243.

［4］李 敏，王 斌，唐志書(shū)，等.芒硝及其主成分抗炎鎮(zhèn)痛瀉下效應(yīng)差異研究［J］.中藥藥理與臨床，2012，28(5):55-57.

［5］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典:上冊(cè)［M］.上海:上海科技出版社，1986:837.

［6］黃典文，張頌明.間接光度法測(cè)定水中硫酸根［J］.中國(guó)環(huán)境監(jiān)測(cè)，2000，16(3):18-19.

［7］邢建國(guó)，翟科峰，王新春，等.透皮促進(jìn)劑對(duì)天山雪蓮巴布劑中3種有效成分經(jīng)皮滲透的影響［J］.中國(guó)中藥雜志，2009，34(13):1661-1664.

［8］馬曉莉，曹松云，王 淼，等.大蒜硝黃膏穴位貼敷治療腸梗阻的藥理作用研究［J］.中成藥，2012，34(3):564-566.

［9］馬曉莉，王 淼，韓 波，等.大蒜硝黃膏穴位貼敷治療大鼠不完全性腸梗阻的藥效學(xué)研究［J］.中成藥，2012，34(10):2012-2015.

［10］潘穎穎.芒硝腹壁外敷在腸梗阻治療中的應(yīng)用體會(huì)［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，15(10):1360-1361.

［11］薛志祥，葛茂軍，龔航軍.芒硝外敷輔助治療外科急腹癥的臨床觀察［J］.上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，14(2):23.

［12］張紅芬，劉 虹，瞿紫微，等.芒硝外敷聯(lián)合通腑合劑保留灌腸治療術(shù)后早期炎性腸梗阻的護(hù)理［J］.護(hù)理學(xué)雜志，2012，27(18):49-50.

［13］劉少杰，楊小紅，劉建偉.外用芒硝促進(jìn)大鼠腹部手術(shù)后胃腸運(yùn)動(dòng)的實(shí)驗(yàn)研究［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2006，27(7):958-959.