柴胡注射液中揮發性化學成分GC-MS分析

袁其堂，仲 英，麥 曦*，程奇珍，易路遙，馮麗華

(1.南昌大學藥學院，江西南昌 330006;2.江西省藥品審評中心，江西南昌 330046;3.江西省食品藥品檢驗所，江西南昌 330000)

傘形科柴胡屬植物柴胡Bupleurum chinense DC.，其根作為中醫藥方中的常用中藥在中國已沿用了近千年。始載于《神農本草經》。具有疏散退熱、疏肝、升陽的功能，中醫主要用其治療胸肋脹痛、子宮脫垂、脫肛、流感及感冒所引起的發熱等病癥［1］。《中國藥典》2010年版收載的正品柴胡藥材來源為柴胡Bupleurum chinense DC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifolium chinense Willd.的干燥根，按性狀不同，分別習稱“北柴胡”及“南柴胡”［2］。現代藥理學研究［3-5］表明柴胡揮發油具有解熱、鎮靜、鎮痛、抗炎、抗肝損傷、抗腫瘤［6］、降低血壓、減緩心律和免疫增強［7］等作用，在臨床廣泛應用于外感發熱。

柴胡注射液是柴胡干燥根經水蒸氣蒸餾制成的含有揮發油的滅菌水溶液，有較好的退熱、解表效果，用于治療感冒、流行性感冒及瘧疾等的發熱，療效確切。但隨著柴胡注射液的廣泛使用它的不良反應也逐漸被人們所重視。目前國內已報道過的不良反應有過敏性皮膚反應、過敏性休克、暈厥、眩暈、腎衰竭、皰性表皮松解型藥疹、急性肺水腫、過敏性哮喘［8］。劉群［9］曾嘗試采用GC-MS聯用技術對臨床所用的柴胡注射液進行揮發油成分的分析，結果只檢出呋喃甲醛和5-甲基呋喃甲醛兩個成分，張麗等［10］通過GC-MS將藥典法、硫酸氯化鈉提取法、石油醚萃取法提取的柴胡原藥材揮發油成分與柴胡注射液的有效成分檢測對比研究，在柴胡注射液檢測中也得到了與劉群一致的結果。近年來對柴胡注射液等中藥注射劑引發的不良反應的報道，不僅對中藥注射液行業造成了巨大的沖擊，同時也波及到了整個中醫藥領域，使人們對中藥注射劑的使用產生了疑慮［9］。

本實驗通過對來自3家醫藥企業的3個不同批次的柴胡注射液采用頂空氣相色譜-質譜-數據庫 (GC-MS-DS)聯用技術分析其揮發性化學成分，結合質譜數據庫NIST11及對照品比較法對分離的化合物進行鑒定，選擇匹配度較高的的檢索物質，并通過總離子流色譜圖的面積歸一化法計算出各揮發性化學成分在每批柴胡注射液中的相對含有量，為建立柴胡注射液中揮發性成分特征指紋圖譜，控制注射液質量及減少不良反應的發生提供重要的科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent7697A型Headspace sampler，Agilent 7890A5975C-GCMSD，HP-5MS(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm)彈性石英毛細管柱，1701E02系列工作站。

1.2 材料 樣品1(開開援生制藥股份有限公司，批號1211061);樣品2(河南潤弘制藥股份有限公司，批號1209221);樣品3(河南省康華藥業股份有限公司，批號12091901)。3批柴胡注射液均為市售藥品。對照品正戊醛(分析純，純度98%)、正己醛 (色譜純，純度≥99.0%)、正庚醛 (色譜純，純度≥98.0%)、正辛醛 (分析純，純度99%)、壬醛 (分析純，純度96%)均購于上海阿拉丁試劑公司。0.9%氯化鈉注射液 (回音必基團 (江西)東亞制藥有限公司)，吐溫－80(分析純，上海大眾藥業有限公司)。

2 方法

2.1 對照品的制備 分別取正戊醛、正己醛、正庚醛、正辛醛、壬醛對照品適量，精密稱定，制成每1 mL含25 mg的溶液，再用含0.3%吐溫－80與0.9%氯化鈉的溶液稀釋至每1 mL含25 μg的溶液。將上述制備的5種溶液分別精密量取2 mL，置20 mL頂空瓶中，軋蓋密封瓶口，制備成混合對照品溶液。

2.2 樣品的制備 分別從3批樣品中精密量取10 mL柴胡注射液依次置入3個20 mL頂空進樣瓶中，按序標記，軋蓋密封瓶口，即得。

2.3 GC-MS分析 柱溫:起始溫度40℃，保持5 min，以5℃/min速率升至50℃，保持0 min，以20℃/min速率升至250℃，保持6 min。載氣氦氣，進樣口溫度250℃。進樣方式:分流進樣，分流比5∶1。柱體積流量1 mL/min。頂空進樣，頂空瓶平衡溫度90℃，平衡時間20 min，進樣閥溫度100℃，傳輸線溫度110℃，頂空瓶充壓時間0.2 min，定量環填充時間 0.2 min，定量環平衡時間0.5 min，進樣時間1 min。溶劑延遲3 min。掃描范圍30～500 amu。

3 結果

采用頂空氣相色譜－質譜聯用儀結合質譜數據庫NIST11分析出對照品溶液在tR=3.341，tR=6.101，tR=8.964，tR=10.510，tR=11.618處出現5個對照峰;3個廠家及批次的柴胡注射液分析出匹配度較高 (大于85%)的揮發性化學成分共計28種 (其色譜-質譜總離子流圖見圖1)，28種揮發性化學成分的鑒定及在每個批次中的相對量結果見表1。在這3個不同廠家的柴胡注射液中揮發性化學成分含量較高的有戊醛、己醛、呋喃甲醛、庚醛、正己醇、正辛醛、反-2-辛烯醛、壬醛、反-2-壬烯醛、桉葉油醇、十一烷、芳樟醇、4-萜烯醇、左旋乙酸冰片酯等。其中戊醛、己醛、庚醛、正辛醛、壬醛、反式-2-辛烯醛、反式-2-壬烯醛、2-異丙基-5-甲基茴香醚是共有成分。

圖1 對照品及樣品的GC-MS總離子流色譜圖

表1 3個不同廠家的柴胡注射液樣品揮發性化學成分結果鑒定

續表1

4 討論

結果表明，3家企業的3批柴胡注射液其揮發性成分中共檢出28種化合物。其中戊醛、己醛、庚醛、正辛醛、壬醛、反式-2-辛烯醛、反式-2-壬烯醛、2-異丙基-5-甲基茴香醚，這8種化合物是3批柴胡注射液樣品中揮發性物質的共有化學成分。已有文獻報道，正己醛、正庚醛、α-蒎烯、桉葉油醇等成分為柴胡揮發油解熱、抗炎、抗菌的藥效物質基礎［11-15］。亦有文獻報道，呋喃甲醛是柴胡在酸鹽條件下柴胡纖維的水解產物，5-甲基呋喃醛初步認定是柴胡皂苷中糖部分的水解產物，含有這些已降解的成分的揮發油制成的注射液是有害物質［16］，這些都是引起柴胡注射液不良反應的首要化學成分。另外，引起不良反應的首要化學成分呋喃甲醛的產生也可能與市售藥品目前的有效期長短有很大關系，亦可能與不同廠家所用不同地區的柴胡原料及提取工藝有關，其來源還有待進一步研究。

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