PHLPP在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

謝優優等

[摘要] 目的 探討PHLPP 在非小細胞肺癌（NSCLC）中的表達及臨床意義。方法 采用免疫組織化學染色的方法檢測82例NSCLC組織中PHLPP蛋白的表達情況，并結合臨床及病理因素進行相關性分析。 結果 PHLPP主要在細胞膜上表達，在NSCLC中63%陰性表達、11%為+、10%為++、16%為+++，PHLPP的表達與NSCLC的分化程度存在顯著相關性（P=0.024），與年齡、性別、吸煙狀況、病理類型及分期沒有顯著相關性。結論 PHLPP蛋白在人NSCLC組織中表達率為37%，與NSCLC的分化程度有相關性。

[關鍵詞] 非小細胞肺癌；PHLPP；免疫組織化學

[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）27-0021-03

[Abstract] Objective To investigate the expression of PHLPP in non-small cell lung cancer （NSCLC） and its correlations of clinicopathological characteristics. Methods All of 82 tissue specimens with NSCLC were examined with immunohistochemical staining， and the results of IHC were analyzed with the clinicopathologic characteristics. Results PHLPP mainly expressed on the cell membrane. The rate of PHLPP expression was negative in 63%， poor in 11%， moderate in 10% and strong in 16%， respectively. The expression of PHLPP was significantly correlated with differentiation， but not with age， smoking states， pathological type and stage. Conclusion The positive expression rate of PHLPP is 37% in human NSCLC tissue specimens and was correlated with histological differentiation .

[Key words] Non-small cell lung cancer（NSCLC）；PHLPP；Immunohistochemistry（IHC）

肺癌是世界范圍內最為常見的惡性腫瘤之一[1]，其發生、發展的分子機制目前尚未完全明了，癌基因的激活及抑制基因的缺失和（或）突變是導致肺癌發生的主要原因。PHLPP（PH domain leucine-rich repeat protein phosphatase，PHLPP）是Gao等[2]發現的一種新型抑癌基因，可特異性地使細胞中pAkt的疏水基團去磷酸化，從而降低活化Akt的水平，促進細胞凋亡和抑制細胞增殖，發揮抑制腫瘤發生發展的作用。之前有研究已經在H157細胞（一種非小細胞肺癌細胞）中發現PHLPP的過度表達導致AKT活性降低，使得細胞凋亡增加，而PHLPP的敲除使得細胞凋亡減少[2]。但是，目前尚未有研究證實其在體內的表達情況及其作用機制，本研究初步通過免疫組織化學染色的方法檢測PHLPP在NSCLC中的表達情況，并分析其與臨床、病理學因素的關系。

1 對象與方法

1.1研究對象

取自我院2008年6月～2010年12月人體組織庫和病理科經手術切除病理證實的NSCLC石蠟包埋標本82例。其中男68例，女14例；中位年齡59歲（35～80歲）。根據2002年AJCC肺癌分期標準第6版[3]，Ⅰ期26例，Ⅱ期20例，Ⅲ36例。全部病例術前均未行任何化療或放療。見表1。

2 結果

2.1 PHLPP在NSCLC中表達

PHLPP主要以細胞膜表達為主，陽性染色呈棕黃色或黃褐色（封三圖1b）。在NSCLC中，僅26%的病例為高表達，74%的病例呈現低表達或不表達，分布情況見封三圖1a。

2.2 PHLPP蛋白表達與NSCLC臨床病理因素的相關性分析

PHLPP蛋白表達與分化程度有相關性（P=0.024），與年齡、性別、吸煙狀態、組織學類型及分期均無相關性（P>0.05）。見表2。

3討論

肺癌是全球癌癥死亡率最高的惡性腫瘤[1]，在國內其發病率和死亡率在城市惡性腫瘤中居首位，非小細胞肺癌占全部肺癌患者的80%，臨床Ⅰ/Ⅱ期患者手術治療的5年生存率約為40%，而遺憾的是可手術的患者僅占全部肺癌病例的20%～30%，約30%～40%的病例在確診時已經是局部晚期，40%病例確診時已有遠處轉移，且治療肺癌的療效往往也不理想，總的非小細胞肺癌的5年生存率很低。因此探索肺癌的發生、發展的分子機制對提高肺癌的防治水平和改善預后有極為重要的意義。癌基因的激活及抑制基因的缺失或（和）突變是導致肺癌發生的主要原因。PI3K/Akt信號通路作為細胞內重要信號轉導通路之一，通過影響下游多種效應分子的活化狀態，在細胞內發揮著抑制凋亡、促進增殖的關鍵作用。多種研究表明pAkt過度活化，與其發生、發展、治療療效及耐放化療存在密切的關系[6，7]。PHLPP是Gao等[2]在2005年首先發現的一種新型抑癌基因，通過使Akt的疏水基團在Ser473位點去磷酸化，使磷酸化的Akt降解或滅活，抑制了PI3K/Akt信號轉導系統，從而發揮抑癌作用。endprint

PHLPP在人體各組織器官及細胞中均有廣泛表達，近年來多項研究表明其在腫瘤中的表達明顯下降[8-10]。國外J Liu等[5]發現在人大腸癌組織中PHLPP1和PHLPP2表達下降或缺失了78%和86%。同樣，PHLPP在前列腺癌的發生發展中存在密切關系，多項研究發現PHLPP在前列腺癌中表達降低，Chen 等[11]報道在人前列腺癌組織中30%存在PHLPP1蛋白表達降低，45%存在PHLPP2蛋白表達降低。國內廖琪等[12]采用免疫組織化學方法檢測PHLPP在上皮性卵巢癌中的表達情況，發現在卵巢癌中的表達率為25.6%，顯著低于良性卵巢腫瘤的表達率（92.5%）。研究發現，相比乳腺癌的原發病灶，乳腺癌的轉移病灶中Ser473的表達更高，同時可檢測到轉移灶中PHLPP表達的大量缺失，據此我們可以推斷乳腺癌細胞中的PHLPP的低表達與乳腺癌的轉移有很大關系[13]。最近，Li X[14]等發現PHLPP通過對RAF1的調節在RAF/MAPK/ERK信號通路中對腫瘤起到抑制作用，從而進一步提高了PHLPP基因在腫瘤中的作用。而且，還發現在乏氧狀態下使得PHLPP表達下降，從而導致了化療藥物的耐受[15]。但是，對于PHLPP蛋白在NSCLC中的表達情況，目前國內外尚未有報道，僅Gao等[2]在H157（人非小細胞肺癌細胞系）中通過轉染PHLPP使其呈高表達，從而在流式細胞儀檢測發現細胞凋亡增加。本研究首次應用免疫組織化學染色的方法檢測NSCLC組織標本PHLPP蛋白的表達情況，發現PHLPP主要在肺癌細胞膜上表達，在NSCLC中63%為陰性表達、11%為+、10%為++、16%為+++（封三圖2）。PHLPP表達與年齡、性別、吸煙狀況、病理類型及分期無顯著相關性，但與NSCLC的分化程度存在顯著相關性（P=0.024），且其表達強度隨分化程度的增高而增高，表明PHLPP表達與NSCLC的惡性程度相關，提示PHLPP蛋白的低表達可能作為NSCLC惡性程度的診斷依據，值得進一步的研究，因此，提高NSCLC細胞內PHLPP蛋白的表達量可能為NSCLC的治療提供新策略和新靶點。

[參考文獻]

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（收稿日期：2014-05-29）endprint

PHLPP在人體各組織器官及細胞中均有廣泛表達，近年來多項研究表明其在腫瘤中的表達明顯下降[8-10]。國外J Liu等[5]發現在人大腸癌組織中PHLPP1和PHLPP2表達下降或缺失了78%和86%。同樣，PHLPP在前列腺癌的發生發展中存在密切關系，多項研究發現PHLPP在前列腺癌中表達降低，Chen 等[11]報道在人前列腺癌組織中30%存在PHLPP1蛋白表達降低，45%存在PHLPP2蛋白表達降低。國內廖琪等[12]采用免疫組織化學方法檢測PHLPP在上皮性卵巢癌中的表達情況，發現在卵巢癌中的表達率為25.6%，顯著低于良性卵巢腫瘤的表達率（92.5%）。研究發現，相比乳腺癌的原發病灶，乳腺癌的轉移病灶中Ser473的表達更高，同時可檢測到轉移灶中PHLPP表達的大量缺失，據此我們可以推斷乳腺癌細胞中的PHLPP的低表達與乳腺癌的轉移有很大關系[13]。最近，Li X[14]等發現PHLPP通過對RAF1的調節在RAF/MAPK/ERK信號通路中對腫瘤起到抑制作用，從而進一步提高了PHLPP基因在腫瘤中的作用。而且，還發現在乏氧狀態下使得PHLPP表達下降，從而導致了化療藥物的耐受[15]。但是，對于PHLPP蛋白在NSCLC中的表達情況，目前國內外尚未有報道，僅Gao等[2]在H157（人非小細胞肺癌細胞系）中通過轉染PHLPP使其呈高表達，從而在流式細胞儀檢測發現細胞凋亡增加。本研究首次應用免疫組織化學染色的方法檢測NSCLC組織標本PHLPP蛋白的表達情況，發現PHLPP主要在肺癌細胞膜上表達，在NSCLC中63%為陰性表達、11%為+、10%為++、16%為+++（封三圖2）。PHLPP表達與年齡、性別、吸煙狀況、病理類型及分期無顯著相關性，但與NSCLC的分化程度存在顯著相關性（P=0.024），且其表達強度隨分化程度的增高而增高，表明PHLPP表達與NSCLC的惡性程度相關，提示PHLPP蛋白的低表達可能作為NSCLC惡性程度的診斷依據，值得進一步的研究，因此，提高NSCLC細胞內PHLPP蛋白的表達量可能為NSCLC的治療提供新策略和新靶點。

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PHLPP在人體各組織器官及細胞中均有廣泛表達，近年來多項研究表明其在腫瘤中的表達明顯下降[8-10]。國外J Liu等[5]發現在人大腸癌組織中PHLPP1和PHLPP2表達下降或缺失了78%和86%。同樣，PHLPP在前列腺癌的發生發展中存在密切關系，多項研究發現PHLPP在前列腺癌中表達降低，Chen 等[11]報道在人前列腺癌組織中30%存在PHLPP1蛋白表達降低，45%存在PHLPP2蛋白表達降低。國內廖琪等[12]采用免疫組織化學方法檢測PHLPP在上皮性卵巢癌中的表達情況，發現在卵巢癌中的表達率為25.6%，顯著低于良性卵巢腫瘤的表達率（92.5%）。研究發現，相比乳腺癌的原發病灶，乳腺癌的轉移病灶中Ser473的表達更高，同時可檢測到轉移灶中PHLPP表達的大量缺失，據此我們可以推斷乳腺癌細胞中的PHLPP的低表達與乳腺癌的轉移有很大關系[13]。最近，Li X[14]等發現PHLPP通過對RAF1的調節在RAF/MAPK/ERK信號通路中對腫瘤起到抑制作用，從而進一步提高了PHLPP基因在腫瘤中的作用。而且，還發現在乏氧狀態下使得PHLPP表達下降，從而導致了化療藥物的耐受[15]。但是，對于PHLPP蛋白在NSCLC中的表達情況，目前國內外尚未有報道，僅Gao等[2]在H157（人非小細胞肺癌細胞系）中通過轉染PHLPP使其呈高表達，從而在流式細胞儀檢測發現細胞凋亡增加。本研究首次應用免疫組織化學染色的方法檢測NSCLC組織標本PHLPP蛋白的表達情況，發現PHLPP主要在肺癌細胞膜上表達，在NSCLC中63%為陰性表達、11%為+、10%為++、16%為+++（封三圖2）。PHLPP表達與年齡、性別、吸煙狀況、病理類型及分期無顯著相關性，但與NSCLC的分化程度存在顯著相關性（P=0.024），且其表達強度隨分化程度的增高而增高，表明PHLPP表達與NSCLC的惡性程度相關，提示PHLPP蛋白的低表達可能作為NSCLC惡性程度的診斷依據，值得進一步的研究，因此，提高NSCLC細胞內PHLPP蛋白的表達量可能為NSCLC的治療提供新策略和新靶點。

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[10] Nitsche C， Edderkaoui M， Moore RM， et al. The phosphatase PHLPP1 regulates Akt2， promotes pancreatic cancer cell death， and inhibits tumor formation[J]. Gastroenterology，2012，142（2）：377-387.

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