高效液相色譜法測定六味地黃膠囊中熊果酸含量

孫桂梅，鐘秀華，馬 杰

(修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，吉林 通化 134000)

六味地黃膠囊由熟地黃、酒萸肉、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉6味藥材組方，具有滋陰補(bǔ)腎的功效，用于治腎陰虧損、頭暈耳鳴、腰膝酸軟、骨蒸潮熱、盜汗遺精、消渴等癥，收載于2010年版《中國藥典(一部)》[1]，原標(biāo)準(zhǔn)中采用雙波長薄層掃描法檢測熊果酸的含量，操作較復(fù)雜，不及高效液相色譜(HPLC)法重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度好。為了更有效地控制該制劑的質(zhì)量，筆者采用HPLC法測定六味地黃膠囊中熊果酸的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

EX1600型自動(dòng)進(jìn)樣高效液相色譜儀;FA2004B型電子天平。熊果酸對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110742-200517，供含量測定用);六味地黃膠囊(修正藥業(yè)集團(tuán)有限公司);乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Phenomenex C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 - 甲醇 -0．5%醋酸銨溶液(67 ∶12 ∶21);流速:1．0 mL/min;柱溫:30℃;檢測波長:210 nm;進(jìn)樣量:20 μL。在此條件下，理論板數(shù)按熊果酸峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000，熊果酸與雜質(zhì)峰的分離度大于1．5，峰形良好，陰性對(duì)照品無干擾，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

取熊果酸對(duì)照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1 mL含熊果酸0．12 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物適量，研細(xì)，混勻，取細(xì)粉約1．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，加乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方比例及工藝制備不含酒萸肉陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:分別精密量取 0，1，2，3，4，5 mL 熊果酸對(duì)照品溶液(0．260 2 g/L)，置5 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，分別定量注入液相色譜儀20 μL，記錄峰面積，以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=269．27 X+18．872，r=0．999 9(n=6)。結(jié)果表明，熊果酸進(jìn)樣量在1．041～5．204 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測定。結(jié)果峰面積的 RSD為0．81%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，放置 1，2，4，6，8 h后進(jìn)樣，測定峰面積。結(jié)果的 RSD為0．69%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號(hào)為121201)，依法制備供試品溶液并進(jìn)樣測定6次。結(jié)果的 RSD為0．64%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):分別精密稱取已知含量(熊果酸含量0．642 7 mg/0．3 g)的六味地黃膠囊樣品細(xì)粉6份，每份約0．75 g，平均分成3組，分別精密加入熊果酸對(duì)照品溶液，按樣品處理方法處理，進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2．4 樣品含量測定[2]

依法測定3批樣品的熊果酸含量。結(jié)果批號(hào)為 121103，121104，121201的3批樣品中熊果酸含量分別為每粒 0．75，0．72，0．64 mg。

3 討論

比較了2種不同的流動(dòng)相條件，結(jié)果用甲醇-0．4%磷酸溶液(15∶85)作流動(dòng)相時(shí)，熊果酸與齊墩果酸的出峰時(shí)間比較靠前，且基線不易平衡。采用乙腈-甲醇-0．5%醋酸銨溶液(67∶12∶21)為流動(dòng)相，前分離度在 1．5以上，后分離度在 3．0以上，理論板數(shù)在17 000以上，因此選用乙腈-甲醇-0．5%醋酸銨溶液(67∶12∶21)作為熊果酸含量測定的流動(dòng)相。

表1 熊果酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

[1]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:190，600，附錄 130-131．

[2]金德莊，張 聰．不同產(chǎn)地山茱萸中熊果酸與齊墩果酸含量的研究[J]．中國藥業(yè)，2010，19(14):35．