高效液相色譜法測定六味地黃膠囊中熊果酸含量

孫桂梅，鐘秀華，馬 杰

(修正藥業集團股份有限公司，吉林 通化 134000)

六味地黃膠囊由熟地黃、酒萸肉、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉6味藥材組方，具有滋陰補腎的功效，用于治腎陰虧損、頭暈耳鳴、腰膝酸軟、骨蒸潮熱、盜汗遺精、消渴等癥，收載于2010年版《中國藥典(一部)》[1]，原標準中采用雙波長薄層掃描法檢測熊果酸的含量，操作較復雜，不及高效液相色譜(HPLC)法重現性和準確度好。為了更有效地控制該制劑的質量，筆者采用HPLC法測定六味地黃膠囊中熊果酸的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

EX1600型自動進樣高效液相色譜儀;FA2004B型電子天平。熊果酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110742-200517，供含量測定用);六味地黃膠囊(修正藥業集團有限公司);乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為純凈水。

2 方法與結果

2．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Phenomenex C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:乙腈 - 甲醇 -0．5%醋酸銨溶液(67 ∶12 ∶21);流速:1．0 mL/min;柱溫:30℃;檢測波長:210 nm;進樣量:20 μL。在此條件下，理論板數按熊果酸峰計算應不低于5 000，熊果酸與雜質峰的分離度大于1．5，峰形良好，陰性對照品無干擾，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

取熊果酸對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1 mL含熊果酸0．12 mg的溶液，即得對照品溶液。取裝量差異項下的本品內容物適量，研細，混勻，取細粉約1．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25 mL，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定質量，加乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按處方比例及工藝制備不含酒萸肉陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:分別精密量取 0，1，2，3，4，5 mL 熊果酸對照品溶液(0．260 2 g/L)，置5 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，分別定量注入液相色譜儀20 μL，記錄峰面積，以進樣量(X)為橫坐標、峰面積為縱坐標(Y)繪制標準曲線，得回歸方程Y=269．27 X+18．872，r=0．999 9(n=6)。結果表明，熊果酸進樣量在1．041～5．204 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:取同一對照品溶液，連續進樣6次，依法測定。結果峰面積的 RSD為0．81%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，放置 1，2，4，6，8 h后進樣，測定峰面積。結果的 RSD為0．69%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內穩定。

重復性試驗:取同一批樣品(批號為121201)，依法制備供試品溶液并進樣測定6次。結果的 RSD為0．64%(n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:分別精密稱取已知含量(熊果酸含量0．642 7 mg/0．3 g)的六味地黃膠囊樣品細粉6份，每份約0．75 g，平均分成3組，分別精密加入熊果酸對照品溶液，按樣品處理方法處理，進樣測定，記錄峰面積，并計算回收率。結果見表1。

2．4 樣品含量測定[2]

依法測定3批樣品的熊果酸含量。結果批號為 121103，121104，121201的3批樣品中熊果酸含量分別為每粒 0．75，0．72，0．64 mg。

3 討論

比較了2種不同的流動相條件，結果用甲醇-0．4%磷酸溶液(15∶85)作流動相時，熊果酸與齊墩果酸的出峰時間比較靠前，且基線不易平衡。采用乙腈-甲醇-0．5%醋酸銨溶液(67∶12∶21)為流動相，前分離度在 1．5以上，后分離度在 3．0以上，理論板數在17 000以上，因此選用乙腈-甲醇-0．5%醋酸銨溶液(67∶12∶21)作為熊果酸含量測定的流動相。

表1 熊果酸加樣回收試驗結果(n=6)

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫藥科技出版社，2010:190，600，附錄 130-131．

[2]金德莊，張 聰．不同產地山茱萸中熊果酸與齊墩果酸含量的研究[J]．中國藥業，2010，19(14):35．