基質金屬蛋白酶-9在子宮內膜癌組織中的表達水平及臨床意義

盧建軍，伊莉萍，托 婭，喬慧珍

(內蒙古醫科大學附屬醫院，1.婦產科;2.檢驗科，內蒙古 呼和浩特，010050)

子宮內膜癌又稱為子宮體癌，是婦科常見的惡性腫瘤，其發病率僅次于子宮頸癌，并有逐年上升的趨勢。研究［1－2］表明，肥胖、糖尿病、高血壓等是子宮內膜癌發病的高危因素，激素調節、基因突變、黏附分子、細胞凋亡等多種因素的相互作用參與了其發生、發展過程。淋巴轉移和直接浸潤為子宮內膜癌的主要轉移途徑，惡性腫瘤的淋巴轉移首先發生腫瘤組織周邊和局部，腫瘤組織分泌的組織因子能促進局部淋巴管增生，降解細胞外基質，促進腫瘤細胞浸潤、擴散和轉移。基質金屬蛋白酶家族(MMPs)具有降解細胞外基質及基底膜的功能，多項研究［3－4］證實，子宮內膜癌組織中存在MMPs的異常改變。其中，基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)在血管、基底膜部位降解膠原蛋白、纖維連接蛋白的功能已被公認。本研究觀察了MMP-9在30例子宮內膜癌患者癌組織中的表達水平及其與子宮內膜癌病理特征的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集本院2009年2月—2012年3月住院患者的子宮內膜癌組織石蠟標本30例為研究對象，設為實驗組1。組織學分型:子宮內膜樣腺癌18例，漿液性腺癌7例，腺鱗癌4例，透明細胞癌1例。病理學分級:G1級14例，G2級12例，G3級4例。淋巴結轉移情況:有淋巴結轉移5例，無淋巴結轉移25例。病理分期:Ⅰ期22例，Ⅱ期4例，Ⅲ期4例。同時收集40例同期住院患者的不典型增生內膜組織石蠟標本設為實驗組2，及40例正常子宮內膜組織石蠟標本設為對照組。所有標本均經病理檢查確診，且所有患者均獲得。3組年齡無顯著差異，具有可比性(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色方法:采用免疫組織化學染色方法對3組標本進行染色。所有石蠟標本均行3μm連續石蠟切片，每切5張取1張。將切片以二甲苯脫蠟、酒精梯度(100%、90%、80%、70%)脫水后進行抗原修復，即浸入pH6.0、濃度0.01 mol/L的枸櫞酸鹽緩沖液(PBS)中，微波煮沸2 min;之后浸入3%的過氧化氫中滅活標本的內源性過氧化物酶，經山羊血清封閉，加入濃度為1∶100的MMP-9抗原標記物一抗Sc6840，4℃保溫箱孵育12 h，PBS漂洗10 min×3次;漂洗后加入生物素標記的兔抗羊二抗，室溫下孵育15 min;隨后實用鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶孵育10 min，二氨基聯苯胺(DAB)顯色，蘇木素復染;隨后經1%的鹽酸二乙醇分化20 s;脫水、二甲苯透明，中性樹膠封片，待封片自然風干后光學顯微鏡下觀察細胞染色情況。

1.2.2 陽性染色統計:由病理學醫師進行免疫組化染色陽性細胞統計。首先，對陽性染色細胞數量進行評分:陽性染色細胞數量＜10%為0分;陽性染色細胞數量占10% ～25%為1分;陽性染色細胞數量占26% ～50%為2分;陽性染色細胞數量占50% ～75%為3分;陽性染色細胞數量＞75%為4分。其次，對陽性染色細胞的著色程度進行評分:淺黃色為1分;橘黃色為2分;棕褐色為3分。統計每張切片的數量評分和著色程度評分之和，取每組切片統計評分的平均數，0～5分為低表達，≥6分為高表達。

1.3 觀察指標

比較各組MMP-9表達情況;分析子宮內膜癌組織MMP-9表達與臨床病理參數關系;采用Cox比例風險模型分析子宮內膜癌預后生存因素。

2 結果

2.1 各組MMP-9表達情況

顯微鏡下觀察MMP-9陽性染色細胞在3組切片中均有不同程度表達。MMP-9陽性染色部位位于細胞質中，呈棕黃色顆粒，散在的片狀分布為主，多位于血管腔旁。實驗組1、組2和對照組的低表達分別為17例(56.7%)、32例(80.0%)和35例(87.5%)，實驗組1顯著低于實驗組2和對照組(P＜0.05);實驗組1、組2和對照組的高表達分別為13例(43.3%)、8例(20.0%)和5例(12.5%)，實驗組1的高表達率顯著高于實驗組2和對照組(P＜0.05)。

2.2 MMP-9表達水平與子宮內膜癌病理特征的關系

經統計檢驗，子宮內膜癌組織中MMP-9蛋白的表達水平與患者年齡、病理分期無相關性，與病理分級及淋巴結轉移情況有關。病理分級G3的組織標本MMP-9蛋白的高表達率明顯高于G1、G2，低表達率明顯低于G1、G2，差異有統計學意義(P＜0.05)。有淋巴結轉移的子宮內膜癌患者，其癌組織標本中，MMP-9蛋白高表達率明顯高于無淋巴結轉移的患者，低表達率明顯低于無淋巴結轉移的患者，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 子宮內膜癌組織MMP-9表達與臨床病理參數關系［n(%)］

2.3 子宮內膜癌預后影響因素分析

采用Cox比例風險模型分析子宮內膜癌預后生存因素，發現MMP-9的表達水平并非子宮內膜癌獨立的預后影響因素，有淋巴結轉移的患者死亡風險比(HR)是無淋巴結轉移患者的10.547倍，病理分級 G3患者的 HR是 G1、G2患者的2.287倍，病理分級及淋巴結轉移情況與子宮內膜癌生存情況密切相關(P＜0.05)。

3 討論

子宮體癌的97% 來源于子宮內膜腺體，其發生、發展是多因素參與的復雜過程，是目前臨床研究的熱點。據統計［5］子宮體癌在婦科腫瘤中的治愈率最高，但仍存在轉移和復發的高風險，成為婦女治療失敗和死亡的主要原因之一。因此，有關子宮內膜癌的相關生物學標志物的研究，具有重要臨床治療意義。MMPs是膜相關鋅離子依賴型蛋白內切酶超家族，具有裂解細胞外基質蛋白的作用［6－8］。MMPs與其抑制因子的相互作用，是腫瘤細胞轉移、侵襲的關鍵因素。而基底膜的完整與否，是評估腫瘤細胞是否發生轉移的重要參考指標。MMP-9是MMPs中分子量最大的酶，人體巨噬細胞、毛細血管內皮細胞、中性粒細胞、腫瘤細胞等均可以分泌MMP-9。MMP-9可以降解膠原，并在細胞與細胞外基質的黏附中發揮重要作用。有研究［9］表明，腫瘤侵襲轉移的潛能會隨著腫瘤細胞產生MMP-9的能力的增大而增大，可見二者間具有密切的正相關關系，即MMP-9不僅參與了細胞外基質的降解過程，還參與了腫瘤細胞的黏附過程。

本研究中應用免疫組織化學染色的方法，可見MMP-9主要表達的位置在腫瘤細胞質中，陽性染色細胞分布的主要部位在子宮內膜癌巢及腫瘤細胞間質中。子宮內膜癌組織中MMP-9的陽性表達率明顯高于不典型增生內膜組織和正常子宮內膜組織中的MMP-9表達。這與其他學者的研究相一致［10－12］。作者推測，子宮內膜癌組織中的MMP-9高表達，能夠增加癌細胞對內膜的侵襲力，降解細胞外基質成分，間接促進了腫瘤細胞的遷移。

有學者［13］的研究中發現，子宮內膜癌組織中的主要金屬蛋白酶包括MMP-2和MMP-9，MMP-2、MMP-9在子宮內膜癌組織中的表達水平與肌層浸潤程度和臨床病理分級有密切關系，病理分級越高，肌層浸潤程度越深，MMP-9、MMP-2的表達水平越高。也有學者［14］的研究顯示，MMP-9蛋白在子宮內膜癌組織中的表達水平與腫瘤病理級別、臨床分期密切相關。以上研究結果均表明，子宮內膜癌的侵襲和轉移，與MMP-9蛋白表達增強密切相關，主要表現在:MMP-9高表達能增強腫瘤細胞在浸潤轉移過程中的能力，并提高其突破各種屏障的能力;癌細胞自身或誘導其他細胞，大量分泌MMP-9，破壞基底膜的完整性，最終導致癌細胞對周圍正常組織的侵襲，引起腫瘤轉移。本研究分析了MMP-9與臨床病理各因素之間的關系，研究結果表明，隨著子宮內膜病理分級的提高，子宮內膜癌組織中MMP-9的表達水平呈增加趨勢。MMP-9的表達水平在有淋巴結轉移的患者的子宮內膜癌組織中明顯高于無淋巴結轉移的患者，這與上述報道相一致。

本研究還采用Cox比例風險模型分析子宮內膜癌預后生存因素，結果顯示病理分級、淋巴結轉移狀態與子宮內膜癌生存情況密切相關。有淋巴結轉移患者死亡風險是無淋巴結轉移患者的10.547倍;病例分級G3的患者的死亡風險是病例分級G1或G2患者的2.287倍。這表明在預后評價中上述傳統的指標不應被忽視，而且臨床上應支持對病理分級高、有淋巴轉移的患者給予綜合治療，以提高其生存率。然而，MMP-9的不同表達對子宮內膜癌患者的總生存率無影響。分析原因可能是，腫瘤轉移和浸潤機制本身就是一個相對復雜的過程，不僅取決于腫瘤細胞的失控性增長，還取決于腫瘤細胞與宿主細胞及組織的微環境之間的相互作用，MMP-9對于子宮內膜癌的發生、發展以及預后有一定的影響，但其本身并不能作為一種獨立預后因素來影響子宮內膜癌預后。

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