脂聯(lián)素與慢性乙型肝炎病毒感染肝纖維化的相關性

丁崗強，康 誼，劉俊平，曾艷麗，侯環(huán)榮，魏君鋒，尚 佳

(河南省人民醫(yī)院感染性疾病科，河南鄭州，450003)

中國是乙型肝炎病毒感染高流行區(qū)，慢性乙型肝炎發(fā)展為肝硬化的年發(fā)生率約為2.1%［1］，而肝纖維化是其發(fā)展為肝硬化的必經(jīng)階段，抗纖維化也因此成為慢性乙型肝炎治療過程中的重要方面。脂聯(lián)素(ADN)作為脂肪細胞分泌的一種細胞因子具有廣泛的生物學作用，可參與糖尿病、動脈粥樣硬化等多種疾病的發(fā)生及進展，且近年來研究發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素具有抑制肝纖維化的作用，但目前尚缺乏脂聯(lián)素與慢性乙型肝炎病毒感染肝纖維化相關性的研究。本研究檢測慢性乙型肝炎患者血清脂聯(lián)素水平及肝活檢組織脂聯(lián)素的表達，探討脂聯(lián)素與肝纖維化的相關性，現(xiàn)將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年1月－2013年6月本院傳染科住院治療的HBeAg陽性并接受肝活檢的慢性乙型肝炎患者60例，其中男34例，女26例，年齡31～59 歲，平均(48.8 ±7.4)歲，均為初次進行抗病毒治療，符合2000年中華醫(yī)學會西安會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》診斷標準［2］。排除其他病毒感染引起的肝功能異常及肝細胞癌，均無長期大量飲酒史、未合并2型糖尿病。肝纖維化分級由同一位病理醫(yī)生評價Ishak纖維化評分及組織炎癥活動度，根據(jù)肝纖維化程度將0～2級者納入輕度肝纖維化組(n=28)，3～4級者納入重度肝纖維化組(n=17)，5～6級者納入為肝硬化組(n=15)。另選取同期本院體檢中心的20例與慢性乙型肝炎患者年齡、性別相匹配的健康體檢人員設為對照組。本研究經(jīng)本院倫理會同意，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

患者入院后次日、對照組入組日晨抽空腹靜脈血 3 mL，分離血清置于 －30℃ 待測，采用ELISA法檢測血清脂聯(lián)素水平，抗體為Majorbio Biotech公司的鼠抗人單克隆抗體，具體操作步驟嚴格按說明書進行。

肝組織脂聯(lián)素的免疫組織化學檢測采用Phoenix Biotech公司購買的鼠抗人脂聯(lián)素單克隆抗體試劑盒，具體操作步驟嚴格按說明書進行。脂聯(lián)素染色陽性標準為細胞胞質出現(xiàn)棕色顆粒。每張切片在高倍鏡下(400倍)隨機選擇5個視野，每個視野計數(shù)200個細胞(共1000個)，陽性細胞數(shù)≥10%判為陽性，陽性細胞數(shù)＜10%判為陰性。

1.3 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件，計量資料采用均數(shù)±標準差()表示，比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗，應用Spearman相關系數(shù)進行相關分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

各組血清脂聯(lián)素水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且血清脂聯(lián)素水平與肝纖維化分級存在顯著正相關(r=0.967，P ＜0.05);肝硬化組肝組織脂聯(lián)素表達率為93.33%，明顯高于輕度(14.29%)及重度纖維化組(41.18%)，重度纖維化組高于輕度纖維化組，差異均有統(tǒng)計學意義(P ＜0.05)。見表1。

表1 各組血清脂聯(lián)素及肝組織脂聯(lián)素表達率比較［n(%)］

3 討論

乙型肝炎病毒感染是一項全球性公共衛(wèi)生問題，每年大約有100萬人死于乙型肝炎病毒感染后的肝硬化、肝細胞癌、肝功能衰竭［3］。肝纖維化是慢性乙型肝炎進展為肝硬化的必經(jīng)階段，是肝臟在受到包括病毒、酒精、藥物及化學毒素、自身免疫等各種損傷時肝組織內細胞外基質(ECM)成分過度增生與異常沉積導致肝臟結構(以肝竇毛細血管化與肝小葉內以及匯管區(qū)纖維化為表現(xiàn))及功能(以肝功能下降、門靜脈高壓等為表現(xiàn))發(fā)生異常的病理變化［4］，進一步可發(fā)展為肝硬化［5］，嚴重影響患者的生命健康。目前一般認為肝星狀細胞(HSC)增殖、活化導致肝臟內ECM過度沉積是肝纖維化的核心［6］。靜止期HSC在各種致病因素的作用下被激活并增殖，導致合成和分泌ECM增加，并減少其降解，最終出現(xiàn)ECM積聚而發(fā)生肝纖維化［7］。

脂聯(lián)素是在人體血漿中高濃度存在的一類具有保護作用的脂肪細胞因子，具有調節(jié)能量代謝、提高胰島素的敏感性的作用［8］，且近年來其抗炎和抗肝纖維化作用不斷受到重視，其機制可能為通過抑制及減少機體 TGF－B1、TNF－α、PDGF及α－SMA、PCNA的表達等來使HSC靜息狀態(tài)得以維持，抑制HSC活化、增殖及遷移，并具有促進其凋亡的作用，通過抑制枯否細胞產(chǎn)生TNF－α，從而起到抑制肝纖維化的作用［9］，國外動物實驗研究［10］也證實了這一過程。近年來也有研究表明脂聯(lián)素與肝纖維化具有相關性，但不同研究結果具有一定的差異，可能與多種因素如疾病的時期、病因、性別、年齡等影響有關。Hui JM等［11］觀察了非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者與單純脂變患者及正常對照組，發(fā)現(xiàn)NASH患者血清脂聯(lián)素水平較前二組明顯降低，并且與肝臟炎癥壞死具有相關性。Liu等［12］對280位乙型肝炎患者與116例健康者進行對照研究發(fā)現(xiàn)，血清脂聯(lián)素水平在乙肝患者明顯低于肝硬化和肝細胞癌患者。本研究結果表明，血清脂聯(lián)素水平在對照組、輕度纖維化組、重度纖維化組及肝硬化組兩兩比較依次上升，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且血清脂聯(lián)素水平與肝纖維化分級存在顯著正相關性(P＜0.05);本研究也對肝組織脂聯(lián)素的表達進行了免疫組化研究，結果顯示肝硬化患者肝組織脂聯(lián)素表達率最高。既往研究［13］提示肝組織脂聯(lián)素的表達來源可能為血清脂聯(lián)素蛋白的攝取，脂聯(lián)素排泄的途徑之一可能是膽汁分泌，而肝硬化時膽管分泌功能損傷可能是脂聯(lián)素水平的升高及在肝臟中聚集的原因。

綜上所述，脂聯(lián)素與慢性乙型肝炎肝纖維化的進程密切相關，有望為肝纖維化的防治提供新的思路。

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