水蛭提取物對HL60細胞增殖與細胞周期的影響

★ 肖移生 侯吉華 李青 汪建民＊ (江西中醫藥大學基礎醫學院 江西 南昌330004)

中藥水蛭性咸、苦、平，歸肝、膀胱經，有破血瘀、散結聚、通經脈、利水道等功效，用于治癥瘕、痞塊、血瘀閉經、跌打損傷等，其藥理作用為抗凝、溶栓、抗血小板及降血脂等［1］;臨床上水蛭也可單方或組方運用于腫瘤治療中［2］。本課題組前期研究發現水蛭提取物對HL60細胞生長有抑制作用［3］，為進一步探討，本課題組進行了水蛭提取物對HL60細胞增殖與細胞周期影響的實驗。

1 材料與方法

1.1 細胞株及培養方法 HL60細胞購自中國醫學科學院基礎醫學研究所基礎醫學細胞中心，由江西中醫藥大學基礎醫學院實驗中心保存，將HL60細胞培養于含有10%新生小牛血清的RPMI1640完全培養基中(37℃，5%CO2飽和濕度培養)，培養至細胞處于對數生長期用于后續實驗。

1.2 主要試劑 RPMI1640培養基及新生小牛血清為美國GIBCO公司產品;全反式維甲酸(All transretinoic acid，ATRA)、四甲基偶氮唑鹽(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)、佛波酯(TPA)、碘化丙啶(PI)、RNase A均為美國Sigma公司產品;鼠抗人Cyclin E、CDK2抗體均為美國Santa Cruz公司產品;HRP標記的羊抗鼠IgG二抗、GAPDH內參抗體均為北京中杉金橋公司產品。其余未說明的試劑均為國產分析純級試劑。

1.3 藥物 水蛭原藥材購于江西中醫藥大學附屬醫院中藥房，并經我校中藥資源學科組鄧可眾副教授鑒定且符合國家中藥臨床應用標準。水蛭用超微粉碎機粉碎，提取物以液氮快速凍融法制備［4］:取水蛭超微粉1.5g置15mL離心管內，加10mL無菌雙蒸水制成混懸液，再將離心管置液氮內5min，取出，立即放入37℃水浴中迅速融解，重復3次，再3000r/min離心10min。……