Vitek2Compact和MicroScan WalkAway40SI檢測MRSA的性能評價

魏丹丹，劉洋，萬臘根

(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科，江西 南昌 330006)

金黃色葡萄球菌是醫(yī)院和社區(qū)獲得性感染的常見病原菌之一,可引起皮膚軟組織感染和身體其他部位的廣泛感染以及食物中毒[1]。隨著抗生素的廣泛應(yīng)用,自1961年英國出現(xiàn)了第一株對甲氧西林耐藥且mecA基因陽性的金黃色葡萄球菌 (MRSA)以來[2],MRSA的感染率迅速猛增,MRSA對所有β-內(nèi)酰胺類抗生素的固有耐藥性及其多重耐藥性已嚴(yán)重影響了臨床抗感染的治療[3],因而對MRSA準(zhǔn)確鑒定以指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理使用抗生素顯得尤為重要。本研究旨在通過對Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI兩臺全自動微生物鑒定儀對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的檢出性能進(jìn)行評價，以期更好地指導(dǎo)臨床合理使用抗生素。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 收集2011年11月至2012年11月南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床各種標(biāo)本分離的124株非重復(fù)的金黃色葡萄球菌作為實驗菌株，其中痰液43株，分泌物33株，血液24株，膿液9株，尿液6株，其他9株。

1.2 主要儀器和試劑 法國梅里埃生物公司的Vitek 2 Compact全自動微生物鑒定儀、西門子公司的MicroScan WalkAway 40 SI全自動微生物鑒定儀、德國Eppendorf公司的MyGenie96/384型PCR儀、美國BIO.RAD公司的DYY-6D型電泳儀、北京六一公司的凝膠成像儀。PCR試劑和DNA Marker I購于TaKaRa大連寶生物公司，相關(guān)擴(kuò)增引物參照文獻(xiàn)設(shè)計，由上海生工生物技術(shù)有限公司合成。

1.3 MRSA的表型鑒定方法 將臨床分離株金黃色葡萄球菌隨機(jī)分兩組分別采用Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI兩臺全自動微生物鑒定儀對細(xì)菌進(jìn)行鑒定，其中Vitek 2 Compact采用頭孢西丁肉湯稀釋法，MicroScan WalkAway 40 SI采用苯唑西林肉湯稀釋法，質(zhì)控菌株為ATCC25923和ATCC29213，均為本實驗室保存菌株。

1.4 mecA及mecC基因檢測 溶菌酶煮沸法提取金黃色葡萄球菌基因組DNA，采用PCR法根據(jù)引物進(jìn)行擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳后，紫外線投射凝膠成像系統(tǒng)拍攝觀察結(jié)果。

1.5 細(xì)菌鑒定儀的性能評價 以PCR檢測mecA及mecC基因確定為MRSA作為標(biāo)準(zhǔn),采用四格表法統(tǒng)計 Vitek 2 Compact和 MicroScan WalkAway 40 SI兩臺全自動微生物鑒定儀檢測MRSA的靈敏度、特異度和符合率。然后用數(shù)據(jù)分析軟件IBM SPSS Statistics 20對 PCR 法、Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI兩臺全自動微生物鑒定儀對MRSA的檢出率進(jìn)行卡方檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MRSA的表型鑒定檢出結(jié)果 39株金黃色葡萄球菌經(jīng)Vitek 2 Compact鑒定,有22株對頭孢西丁耐藥,17株對頭孢西丁敏感,檢出率56.41%；85株金黃色葡萄球菌經(jīng)MicroScan WalkAway 40 SI鑒定,有44株對苯唑西林耐藥,41株對苯唑西林敏感,檢出率51.76%。

2.2 mecA及mecC基因檢測結(jié)果 用PCR方法進(jìn)行mecA及mecC基因檢測,結(jié)果顯示:124株菌株均未檢出mecC基因陽性菌株，經(jīng)Vitek 2 Compact鑒定的39株金黃色葡萄球菌中有22株菌呈mecA基因陽性,檢出率為56.41%；經(jīng)MicroScan WalkAway 40 SI鑒定的85株金黃色葡萄球菌中有44株mecA基因陽性，檢出率為51.76%。

2.3 Vitek 2 Compact的性能 PCR法和Vitek 2 Compact檢測MRSA的結(jié)果見表1。

表1 Vitek 2 COMPACT檢測MRSA的靈敏度、特異度和符合率

以PCR方法檢測耐藥基因mecA及mecC確定MRSA為標(biāo)準(zhǔn)，則Vitek 2 Compact檢測MRSA的敏感性為95.45%,特異性為94.12%,符合率為94.87%。

2.4 MicroScan WalkAway 40 SI的性能 PCR法和MicroScan WalkAway 40 SI檢測MRSA的結(jié)果見表2。

表2 MicroScan WalkAway 40 SI檢測MRSA的靈敏度、特異度和符合率

以PCR方法檢測耐藥基因mecA及mecC確定MRSA為標(biāo)準(zhǔn),則MicroScan WalkAway 40 SI檢測MRSA的敏感性為93.18%,特異性為92.68%,符合率為92.94%。

2.5 兩臺鑒定儀性能的比較 用IBM SPSSStatistics 20軟件對兩臺鑒定儀性能進(jìn)行卡方檢驗,χ2=0.46,P>0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討論

MRSA的耐藥機(jī)制主要是產(chǎn)生了一種新的由mecA基因編碼的與β-內(nèi)酰胺類抗生素親和力低的PBP2a[4]，國外不斷研究報道檢出除mecA基因以外的新的基因型mecC[5],國內(nèi)還沒有相關(guān)的報道。PCR檢測MRSA不受藥敏試驗條件的影響,特異性高,被公認(rèn)為是診斷MRSA的金標(biāo)準(zhǔn)[6]。本試驗通過PCR方法檢測耐藥基因mecA及mecC基因以確定MRSA,得出Vitek 2 Compact檢測MRSA的靈敏度為95.45%,特異性為94.12%,符合率為94.87%；MicroScan WalkAway 40 SI檢測MRSA的敏感性為93.18%,特異性為92.68%,符合率為92.94%。上述結(jié)果表明Vitek 2 Compact檢測MRSA的敏感性、特異性和符合率均好于MicroScan WalkAway 40 SI。但雖然Vitek 2 Compact檢測MRSA準(zhǔn)確性高(符合率達(dá)94.87%)，還是會有漏檢 (敏感性95.45%)和出現(xiàn)誤診 (特異性94.12%)的情況，在臨床實驗過程中應(yīng)引起關(guān)注，減少漏診、誤診；MicroScan WalkAway 40 SI檢測MRSA雖然在敏感性、特異性和符合率上較Vitek 2 Compact低，但統(tǒng)計學(xué)上無差異，也可用于臨床的檢測，在臨床實驗過程中應(yīng)關(guān)注誤診和漏診的發(fā)生。

Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI分別出現(xiàn)了1株和3株對頭孢西丁和苯唑西林耐藥而mecA基因陰性的菌株，分析原因可能與菌株產(chǎn)生高水平的β-內(nèi)酰胺酶或存在PBP2a以外的低親和力PBP有關(guān)，還需進(jìn)一步證實。另外，還分別發(fā)現(xiàn)1株和3株mecA基因陽性,但對頭孢西丁和苯唑西林敏感的臨床菌株,可能與mecA基因本身的表達(dá)受到抑制或其輔助基因失活有關(guān)，其機(jī)制還需要作進(jìn)一步研究。表型與基因型不一致的現(xiàn)象,可能還受環(huán)境因素的影響,如生長溫度、培養(yǎng)時間、pH值、滲透壓、二價金屬離子等[7]，造成MRSA耐藥程度的差異,從而影響MRSA的檢測結(jié)果。

總之，PCR方法雖然是檢測MRSA方法的金標(biāo)準(zhǔn)，但是由于其對實驗室設(shè)備和設(shè)施要求高、費(fèi)用比較昂貴以及操作復(fù)雜,不易在臨床實驗室中常規(guī)開展。Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI全自動微生物鑒定儀檢測MRSA具有較高的敏感性、特異性及符合率，且操作簡單和快速,目前還是適合臨床實驗室檢測MRSA的常用方法。

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[7]Lee JH.Methicillin (Oxacillin)-resistant Staphylococcus aureus strains isolated from major food animals and their potential transmission to humans[J].Appl Environ Microbiol,2003,69(11):89-94.