珠蛋白生成障礙性貧血基因型與紅細胞參數的關系研究

鄒林，黃杰，簡詠芬，陳尚花，周少雄（廣東省佛山市第二人民醫院檢驗科 528000）

珠蛋白生成障礙性貧血（地貧）是一種危害極大的單基因遺傳性疾病，其臨床最常見的類型有α地貧與β地貧2種。廣東和廣西人群中α與β地貧基因攜帶率分別高達11.07%和23.98%［1－2］。嚴重類型（包括重型和中間型）α與β地貧均為致死性或致殘性血液病，目前尚無理想的治愈方法，給家庭和社會帶來沉重負擔。夫婦雙方若同為輕型地貧（即地貧基因攜帶者），子代遺傳概率中1／4為正常胎兒，1／2為輕型地貧（同父母一樣），1／4為重型地貧患者。地貧的遺傳與性別無關，發病概率均等。因此，開展地貧篩查，指導高風險夫婦在懷孕后特定時期進行產前診斷，是防止重型地貧兒出生，達到優生優育的重要措施。本文通過回顧性分析各種地貧基因型和紅細胞參數資料，闡明兩者間的關系，為臨床通過基因型預測該病的臨床表現和進程及預后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2012年2月至2013年6月佛山市第二人民醫院經基因診斷確診的地貧基因攜帶者為研究對象，其中α地貧315例，根據其缺失α基因個數分3組，缺失1個基因者為A組，缺失2個基因者為B組，缺失3個基因者為C組。A組68例（－α3.747例，－α4.221例），B組201例，C組46例（－－SEA／－α3.7：27例，－－SEA／－α4.2：19例）。β地貧165例，其中CD41－42雜合子63例，IVS2nt654雜合子42例，－28雜合子26例，CD17雜合子21例，其他少見類型13例。αβ復合型貧26例。隨機選取100名健康體檢者作為對照組。所有研究對象年齡均在18～55歲。

1.2 檢測方法

1.2.1 采血使用基因診斷的真空采血管，用枸櫞酸鈉或乙二胺四乙酸抗凝全血提取DNA，不可用肝素抗凝全血，及時送檢或置2～8℃冰箱中并于5d內檢測，或在－20℃存放1個月以內檢測。

1.2.2 方法采用XT－5000全自動血細胞分析儀進行血常規分析。α－地貧采用跨越斷裂點的聚合酶鏈反應（PCR）技術（也稱裂口PCR，gap－PCR），檢測東南亞型缺失（－－SEA），右側缺失（－α3.7），左側缺失（－α4.2）。β－地貧采用PCR－膜反向點雜交技術（RDB）檢測17種基因位點突變，分別是CD41－42、IVS2nt654、－28、CD71－72、CD17、βE、CD31、CD27／28、IVS1－1、CD43、－32、－29、－30、CD14－15、CAP、Int、IVS1－5。

1.3 統計學處理使用SPSS17.0統計軟件進行統計分析，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK 檢驗，基因型和紅細胞參數相關性采用Pearson 相關性分析，以α＝0.05為檢驗水準，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 α地貧基因型組間紅細胞參數的比較缺失不同個數的α地貧基因攜帶者均表現為不同程度的小細胞低色素性貧血。隨著缺失基因個數的增多，紅細胞（RBC）數量呈上升趨勢A＜B＜C，血紅蛋白（Hb）與紅細胞3個平均指數［平均紅細胞血紅蛋白（MCH）、平均紅細胞容積（MCV）、平均血紅蛋白濃度（MCHC）］呈下降趨勢顯示A＞B＞C，而描述紅細胞體積異質性的紅細胞分布寬度（RDW－CV）呈上升趨勢A＜B＜C。表3顯示缺失1個α基因的A組兩個亞型：右側缺失（－α3.7），左側缺失（－α4.2）各項指標差異均無統計學意義。表2顯示缺失3個α基因的C組兩個亞型（－－SEA／－α3.7）與（－－SEA／－α4.2）各項指標差異也均無統計學意義（P＞0.05）。采用Pearson相關性分析α基因缺失個數與紅細胞參數的相關性顯示：α基因缺失個數與RBC 及RDW－CV呈正相關（r分別為0.872，0.561，P＜0.05），與Hb、MCV、MCH、MCHC呈負相關（r分別為－0.708，－0.901，－0.826，－0.735，P＜0.05）。

2.2 β地貧基因型組間紅細胞參數的比較通過對中國人群最常見的4種β地貧基因型及αβ復合型的統計學分析比較，結果見表4。顯示RBC，MCHC，RDW－CV 各組間差異無統計學意義（P＞0.05），而Hb、MCV、MCH 在各組間比較差異有統計學意義（P＜0.05）。其中－28位點突變的β地貧在Hb，MCV，MCH，MCHC 4個參數值高于其他β地貧組。RBC－CV顯示αβ復合型體積異質性最大。

表1 不同α地貧基因型組別間紅細胞參數的比較（）

表1 不同α地貧基因型組別間紅細胞參數的比較（）

表2 不同α地貧基因型A組亞型間紅細胞參數的比較（）

表2 不同α地貧基因型A組亞型間紅細胞參數的比較（）

表3 不同α地貧基因型C組亞型間紅細胞參數的比較（）

表3 不同α地貧基因型C組亞型間紅細胞參數的比較（）

表4 不同β地貧基因型組別間紅細胞參數的比較（）

表4 不同β地貧基因型組別間紅細胞參數的比較（）

續表4 不同β地貧基因型組別間紅細胞參數的比較（）

續表4 不同β地貧基因型組別間紅細胞參數的比較（）

3 討論

本研究分別對α地貧各種基因型與紅細胞參數的關系，以及中國人群最常見的4種β地貧基因型與紅細胞參數的關系進行了回顧性的分析。

α地貧的分子基礎是α2和α1基因缺失或發生點突變，使α－珠蛋白產量下降，胎兒體內過多的γ－珠蛋白形成Hb Bart′s或成人體內過多的β－珠蛋白形成Hb H，導致無效造血和紅細胞被破壞。α地貧血以α－珠蛋白基因缺失為主，臨床上分為靜止型（α地貧2，缺失1α）；標準型（α地貧1，缺失2α）；中間型（Hb H 病，缺失3α）；重型（Hb Bart′s胎兒水腫綜合征，缺失4α）。在中國主要是東南亞缺失型（－－SEA）；－－／αα（α地貧1）。α地貧則多為右側缺失型（α－3.7）；－α／αα及左側缺失型（－α－4.2）；－α／αα。α－地貧的點突變較少見，本文在收集資料的過程中暫未發現α－地貧的點突變的患者。在對α地貧各種基因型與紅細胞參數的關系研究中發現，α珠蛋白基因缺陷的個數與RBC數目呈正相關，與反映RBC 體積異質性的RDW－CV 呈正相關；與Hb、MCV、MCH、MCHC則呈現負相關。這與同類研究中張永良等［3］，陳和平等［4］研究一致。也就是說α地貧的表型取決于α基因缺陷的基因型，其表型的嚴重程度與基因缺失個數密切相關。

人類β－珠蛋白基因位于11號染色體短臂1區2帶（11p1.2），β地貧的病因主要是由于該基因的點突變，少數為基因缺失。目前世界范圍內已報道200多種β基因突變類型，中國人中已發現34種，其中以CD17、CD41－42、IVS2nt654、－28等4種為熱點突變，約占突變類型的90%［5－6］。本文對這最常見的4種突變進行了研究，結果顯示，對于中國人群最常見的4種β地貧基因突變來說，所引起的血液學表型相差不大。其中－28位點突變引起的血液學表型變化相對稍輕一些。另外發現αβ復合型地貧與單純的β地貧所引起的血液學表型變化并無大的差異。

另外從本研究可以發現，無論是α地貧、β地貧還是αβ復合型地貧，患者Hb降低，而RBC 數量升高，這有別于缺鐵性貧血等其他類型貧血的血液學特征。其他學者也觀察到了這一現象［3，7－9］，認為這種紅細胞數量增多的現象是因為促紅細胞生成素介導的反調節作用所致。在地貧患者的骨髓中，原始紅細胞提高了Ca2＋和cAMP的水平從而使細胞外信號調節激酶1／2增多［10］

綜上所述，本文通過對地貧患者不同基因型的血細胞參數變化特點進行分析，可以指導臨床對該類患者進行快速準確的診斷，并及時的評價該類患者病情。

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