環氧化物酶—2與缺氧誘導因子—1α在肺癌組織中的表達及臨床意義

林招賢+陳新+吳榕龍+潘丹玲

[摘要] 目的 探討環氧化物酶—2（cyclooxygenase2，COX—2）與缺氧誘導因子-1αhypoxia-inducible factor1，HIF—1α）在肺癌組織中的表達及臨床意義。方法 隨機選取2011年5月—2013年5月在該院治療的56例肺癌患者的肺癌組織標本，進行病理學檢查，其中小細胞癌18例，腺癌9例，鱗癌29例；早期（Ib期，IIIa期）26例，晚期（IIIb期，IV期）30例。應用免疫組化法對56例肺癌組織中的COX-2、HIF-1α的表達進行檢測；用原位核酸分子雜交方法檢測 H IF～1在非小細胞肺癌癌組織中的表達；同時用CD34單克隆抗體對血管內皮細胞進行標記并計數微血管密度（MVD），對COX-2、HIF-1α與肺癌組織及其血管生成的關系進行統計學分析。 結果 ①56例肺癌組織內COX-2的陽性表達為14例（78.57%），其中在小細胞癌中陽性表達為14例（77.78%），腺癌陽性表達為8例（88.89%），鱗癌陽性表達率22例（75.86%），COX-2陽性表達率不受病理分型影響，差異無統計學意義（P>0.05）；在早期（Ib-IIIa期）肺癌組中COX-2陽性表達率為61.54%，晚期（IHb-IV期）表達率為90.00%，COX-2陽性表達率有病理分期有關，差異有統計學意義（P<0.05）。②56例肺癌組織內HIF-1α陽性表達為45例（89.49%），其中在小細胞癌中陽性表達為17例（94.44%），腺癌陽性表達為7例（77.78%），鱗癌陽性表達為25例（86.21%），HIF-1α陽性表達率不受病理分型影響，差異無統計學意義（P>0.05）；在早期（Ib-IIIa期）的肺癌組中HIF-1α陽性表達率為80.77%，晚期（IIIb-IV期）為93.33%，HIF-1α有病理分期有關，差異有統計學意義（P<0.05）。③COX-2弱陽性的MVD值為13.32±8.91，較強陽性為19.20±9.98，強陽性為23.04±5.69，在病灶部位MVD隨著COX-2表達強度增加而增加，差異有統計學意義（P<0.05）；HIF-1α弱陽性MVD值為13.78±4.59，較強陽性為21.59±8.25，強陽性為28.58±2.59，在病灶部位MVD隨著HIF-1α表達強度增加而增加，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論 COX-2、HIF-1α對于肺癌組織及其血管的生成具有重要作用，探討分析COX-2、HIF-1α在肺癌組織中的作用對于治療肺癌具有重要意義。

[關鍵詞] 環氧化物酶-2；缺氧誘導因子-1α；肺癌組織；臨床意義

[中圖分類號] R725 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）09（a）-0009-03

實體腫瘤的特征之一使缺氧，若缺氧狀態下惡性腫瘤仍能不斷浸潤、生長，說明癌組織對缺氧適應能力很強，而這種能力主要由生成血管及增加糖酵解實現[1，2]。目前對癌組織長、浸潤的研究發現，癌組織在缺氧狀態下的生長主要與COX-2、HIF-1α有關[3，4]。該研究中，隨機選取2011年5月—2013年5月在該院治療的56例肺癌患者的肺癌組織標本進行病理檢查，應用免疫組化法，對肺癌組織中的COX-2、HIF-1α的表達進行檢測，用CD34對腫瘤組織的微血管密度（microvessel density，MVD）進行檢測，探討COX-2、HIF-1α的表達及其臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集在該院治療的肺癌病人的組織標本56例，經病理實驗證實均屬肺癌組織。其中男39例，女17例；年齡47～81歲，平均（64.69±6.45）歲；小細胞癌18例，腺癌9例，鱗癌29例。根據美國聯合癌癥分類委員（AJCC）與國際抗癌聯盟（UICC）2002制訂的TNM分期標準：Ib期3例，IIb期6例，IIIa期14例，IIIb期11例，IV期21例。早期（Ib期，IIIa期）26例，晚期（IIIb期，IV期）30例。

1.2 試劑

HIF-1α兔抗人多克隆抗體（武漢博士德生物工程有限公司），濃度1：50。COX-2、CD34、超敏S-P試劑盒為即用型（福州邁新生物技術工程公司）。

1.3 方法

步驟運用免疫組化法，步驟如下。①用10%福爾馬林固定標本，石蠟包埋，將切片（4 μm）用二甲苯脫蠟，用梯度乙醇進行水化；②用3%過氧化氫溶液在室溫下浸泡20 min，并用磷酸鹽溶液（PBS）沖洗2次；③將切片放入枸櫞酸溶液100 ℃水浴加熱15 min，待自然冷卻后用磷酸鹽溶液沖洗2次；④將山羊血清密封，37 ℃恒溫孵育20 min；⑤將血清棄去，分別滴加HIF-1α兔抗人多克隆抗體稀釋液以及COX-2、CD34，4 ℃恒溫孵育一夜，并用PBS沖洗2次；⑥滴加通用型IgG生物素化，在室溫下孵育30 min，并用PBS沖洗2次；⑦滴加比例適當的辣根酶標記鏈酶卵白素（經PBS稀釋），在室溫下孵育30 min，用PBS沖洗2次；⑧顯色，用蘇木素進行復染、脫水、透明、封片，并用顯微鏡進行觀察。

1.4 判定標準

HIF-1α參照Bimer等[5]研究方法，細胞漿或細胞核內出現棕黃色顆粒即為陽性，在400倍高倍鏡下每張切片隨機選取5個視野觀察，每個視野計數細胞200個，共計數1 000個。根據染色強度及陽性細胞率半定量處理：染色強度評分標準：1分：弱染色但較陰性對照強；2分：染色較強；3分：染色強；細胞陽性率評分標準：2分：陽性率11%～50%；3分：陽性率51%～80%；4分：陽性率>81%。兩項評分結果相加，陽性率<10%者，均為陰性表達（-）；其余3分弱陽性（+）；4～5分中度陽性（++）；6～7分強陽性（+++）。COX-2判定標準如上。MVD參照Weidner[6]的報道方法，于40倍物鏡下尋找高密度血管區，在200倍高倍鏡下觀察3個視野內被CD34染為棕色的血管數目，計算平均值。endprint

1.5 統計方法

應用SPSSl7.0軟件對研究數據進行分析，計量數據采用均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料采取χ2檢驗。

2 結果

2.1 COX-2、HIF-1α在肺癌組織中的表達情況

COX-2主要在胞漿中表達，為棕黃色。56例肺癌組織中陽性表達為44例（78.57%）；其中，弱陽性為18例（40.91%）；中度表達為16例 （36.36%）；強表達10例 （22.73%）。HIF-1α主要在胞核或胞漿中表達，為棕黃色。56例肺癌組織中陽性表達為45（80.36%），其中，弱陽性為17例（37.78%），中度表達為13例（28.89%），強表達為15例（33.33%）。

2.2 COX-2、HIF-1α陽性率與病理分型的關系

56例肺癌組織中COX-2陽性為44（78.57%），其中小細胞癌陽性表達率77.78%，腺癌陽性表達率88.89%，鱗癌陽性表達率75.86%。HIF-1α陽性率為45（80.36%），其中小細胞癌陽性表達率94.44%，腺癌陽性表達率77.78%，鱗癌陽性表達率為86.21%。COX-2、HIF-1α陽性率均不受病理分型影響，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.3 COX-2、HIF-1α陽性率與病理分期的關系

COX-2在早期肺癌組中陽性表達率為61.54%（16/26），晚期表達率為90.00%（27/30）， COX-2與病理分型有關，差異有統計學意義（χ2=12.839，P<0.05）；HIF-1α在早期肺癌組中陽性表達率為80.77%（21/26），晚期為93.33%（28/30），HIF-1α與病理分型有關，差異有統計學意義（χ2==9.286，P<0.05）。見表2。

2.4 COX-2陽性率與MVD的關系

COX-2弱陽性的MVD值為（13.32±8.91），較強陽性為（19.20±9.98），（強陽性為23.04±5.69），MVD隨著COX-2表達強度增加而增加，差異有統計學意義（P<0.05），見表3。

2.5 HIF-1α陽性率與MVD的關系

HIF-1α弱陽性MVD值為（13.78±4.59），較強陽性為（21.59±8.25），強陽性為（28.58±2.59），MVD隨著HIF-1α表達強度增加而增加，差異有統計學意義（P<0.05），見表4。

3 討論

由于癌組織在缺氧環境下亦能生長、浸潤，因此隨著對癌組織研究的不斷深入，發現COX-2與HIF-1α在癌組織中異常表達，Marxsen[7]對肺癌、皮膚癌、前列腺癌、乳腺癌等進行分析，發現癌組織中HIF-1α呈過表達，特別是腫瘤壞死區域及腫瘤浸潤邊緣更加明顯，而腫瘤組織的基質細胞及鄰近正常組織中未見HIF-1α表達。Shoslow等[8]采用免疫組化法對60例腫瘤組織的石蠟切片進行檢測，包括肺癌（腺癌、鱗癌）、乳腺癌、結腸癌，發現COX-2在90%的肺癌、56%的乳腺癌、71%的結腸癌中顯示中度甚至高度表達。Tomozawa等[9]認為COX-2產生的血栓素、前列腺素是形成新血管的必要因素，它們能夠誘導VEGF生成，增使血管通透性增加，并增血流量，同時還可以抑制內皮細胞的凋亡，從而促進血管的生成。

在該研究中證實COX-2和HIF-1α與癌組織病理分期具有重要關系，COX-2在早期肺癌組中陽性表達率為61.54%，晚期表達率為90.00%；HIF-1α在早期肺癌組中陽性表達率為80.77%，晚期為93.33%。而且MVD的強度COX-2和HIF-1α的陽性狀態的增強而增強。但研究發現COX-2和HIF-1α與癌組織的病理分型關系不大。由此可見COX-2和HIF-1α對于癌組織在缺氧狀態下血管的生成具有重要作用。而且對于新的有關影響癌組織血管生成的因素的研究也在繼續，在未來的抗腫瘤研究領域將有更多有利于癌癥治療的方法出現。這就使得惡性腫瘤的治療希望越來越大。

綜上所述，對COX-2與HIF-1α的研究及其調控對于抑制腫瘤血管的生長方面擁有廣闊的前景及價值，在今后的抗腫瘤治療中勢必會成為新靶點。而COX-2與HIF-1α的相互影響及關系，也將成為治療腫瘤的有力依據。同時也替該院應該繼續加大對其他有關其組織形成的基因的研究，以便于全面的綜合的對惡性腫瘤進行治療。

[參考文獻]

[1] 連一新，施敏驊.缺氧誘導因子-1α和環氧化物酶-2在肺癌組織中的表達及其與血管生成的關系[J]. 南京醫科大學學報，2012，5（12）：15-16.

[2] 鄧述愷，聶文軍，王長安.HIF-1α和COX-2在非小細胞肺癌組織中的表達及臨床意義[J].腫瘤基礎與臨床，2010，5（13）：27-28.

[3] Diano S， Horvath TL.Mitochondrial uncoupling protein2（UCP2）in glucose and lipid metabolism[J]. Trends in Molecular Medicine ，2012，6（9）：18-20.

[4] Kim H S ，Park K G ，Koo TB，et al. The modulating effects of the over expression of uncoupling protein 2 on the formation of reactive oxygen species in vascular cells[J]. Diabetes Research and Clinical Practice ，2007，9（11）：56-57.

[5] Bimer E，Schindl M，Obermair A，et a1.Over expression of hypoxia-inducible factor lalpha is a marker for an unfavorable prognosis in early-stage invasive cervical cancer[J].Cancer Res，2000，60（17）：4693-4699.

[6] Weidner N.In tratum or almicrovessel density as a prognostic factor in cancer[J].Am J Pathol，1995，147（1）：9-19.

[7] Marxsen JH，Schmitt O，Metzen E，et a1.Vascular endothelial Growthfactorgene expressionin the human breast cancer cell line MX21 iscontrolledby 02 availabilityin vitro and in vivo[J].AnnAnat，2001（183）：243-249.

[8] Shoslow RA，Dannenberg AJ，Rush D，et al.COX-2 is expressed in human pulmonary，colonic，and Mammary tumors[J].Cancer，2000（89）：2637-2645.

[9] Tomozawa S，Tsuno NI-I，Sunaml E，et al.Cyclooxygenase-2over Expression correlates with tumor recurrence especially hematogenous metastasis of colorectal cancer[J].Br J Cancer，2000（61）：324-328.

（收稿日期：2014-06-03）endprint

1.5 統計方法

應用SPSSl7.0軟件對研究數據進行分析，計量數據采用均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料采取χ2檢驗。

2 結果

2.1 COX-2、HIF-1α在肺癌組織中的表達情況

COX-2主要在胞漿中表達，為棕黃色。56例肺癌組織中陽性表達為44例（78.57%）；其中，弱陽性為18例（40.91%）；中度表達為16例 （36.36%）；強表達10例 （22.73%）。HIF-1α主要在胞核或胞漿中表達，為棕黃色。56例肺癌組織中陽性表達為45（80.36%），其中，弱陽性為17例（37.78%），中度表達為13例（28.89%），強表達為15例（33.33%）。

2.2 COX-2、HIF-1α陽性率與病理分型的關系

56例肺癌組織中COX-2陽性為44（78.57%），其中小細胞癌陽性表達率77.78%，腺癌陽性表達率88.89%，鱗癌陽性表達率75.86%。HIF-1α陽性率為45（80.36%），其中小細胞癌陽性表達率94.44%，腺癌陽性表達率77.78%，鱗癌陽性表達率為86.21%。COX-2、HIF-1α陽性率均不受病理分型影響，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.3 COX-2、HIF-1α陽性率與病理分期的關系

COX-2在早期肺癌組中陽性表達率為61.54%（16/26），晚期表達率為90.00%（27/30）， COX-2與病理分型有關，差異有統計學意義（χ2=12.839，P<0.05）；HIF-1α在早期肺癌組中陽性表達率為80.77%（21/26），晚期為93.33%（28/30），HIF-1α與病理分型有關，差異有統計學意義（χ2==9.286，P<0.05）。見表2。

2.4 COX-2陽性率與MVD的關系

COX-2弱陽性的MVD值為（13.32±8.91），較強陽性為（19.20±9.98），（強陽性為23.04±5.69），MVD隨著COX-2表達強度增加而增加，差異有統計學意義（P<0.05），見表3。

2.5 HIF-1α陽性率與MVD的關系

HIF-1α弱陽性MVD值為（13.78±4.59），較強陽性為（21.59±8.25），強陽性為（28.58±2.59），MVD隨著HIF-1α表達強度增加而增加，差異有統計學意義（P<0.05），見表4。

3 討論

由于癌組織在缺氧環境下亦能生長、浸潤，因此隨著對癌組織研究的不斷深入，發現COX-2與HIF-1α在癌組織中異常表達，Marxsen[7]對肺癌、皮膚癌、前列腺癌、乳腺癌等進行分析，發現癌組織中HIF-1α呈過表達，特別是腫瘤壞死區域及腫瘤浸潤邊緣更加明顯，而腫瘤組織的基質細胞及鄰近正常組織中未見HIF-1α表達。Shoslow等[8]采用免疫組化法對60例腫瘤組織的石蠟切片進行檢測，包括肺癌（腺癌、鱗癌）、乳腺癌、結腸癌，發現COX-2在90%的肺癌、56%的乳腺癌、71%的結腸癌中顯示中度甚至高度表達。Tomozawa等[9]認為COX-2產生的血栓素、前列腺素是形成新血管的必要因素，它們能夠誘導VEGF生成，增使血管通透性增加，并增血流量，同時還可以抑制內皮細胞的凋亡，從而促進血管的生成。

在該研究中證實COX-2和HIF-1α與癌組織病理分期具有重要關系，COX-2在早期肺癌組中陽性表達率為61.54%，晚期表達率為90.00%；HIF-1α在早期肺癌組中陽性表達率為80.77%，晚期為93.33%。而且MVD的強度COX-2和HIF-1α的陽性狀態的增強而增強。但研究發現COX-2和HIF-1α與癌組織的病理分型關系不大。由此可見COX-2和HIF-1α對于癌組織在缺氧狀態下血管的生成具有重要作用。而且對于新的有關影響癌組織血管生成的因素的研究也在繼續，在未來的抗腫瘤研究領域將有更多有利于癌癥治療的方法出現。這就使得惡性腫瘤的治療希望越來越大。

綜上所述，對COX-2與HIF-1α的研究及其調控對于抑制腫瘤血管的生長方面擁有廣闊的前景及價值，在今后的抗腫瘤治療中勢必會成為新靶點。而COX-2與HIF-1α的相互影響及關系，也將成為治療腫瘤的有力依據。同時也替該院應該繼續加大對其他有關其組織形成的基因的研究，以便于全面的綜合的對惡性腫瘤進行治療。

[參考文獻]

[1] 連一新，施敏驊.缺氧誘導因子-1α和環氧化物酶-2在肺癌組織中的表達及其與血管生成的關系[J]. 南京醫科大學學報，2012，5（12）：15-16.

[2] 鄧述愷，聶文軍，王長安.HIF-1α和COX-2在非小細胞肺癌組織中的表達及臨床意義[J].腫瘤基礎與臨床，2010，5（13）：27-28.

[3] Diano S， Horvath TL.Mitochondrial uncoupling protein2（UCP2）in glucose and lipid metabolism[J]. Trends in Molecular Medicine ，2012，6（9）：18-20.

[4] Kim H S ，Park K G ，Koo TB，et al. The modulating effects of the over expression of uncoupling protein 2 on the formation of reactive oxygen species in vascular cells[J]. Diabetes Research and Clinical Practice ，2007，9（11）：56-57.

[5] Bimer E，Schindl M，Obermair A，et a1.Over expression of hypoxia-inducible factor lalpha is a marker for an unfavorable prognosis in early-stage invasive cervical cancer[J].Cancer Res，2000，60（17）：4693-4699.

[6] Weidner N.In tratum or almicrovessel density as a prognostic factor in cancer[J].Am J Pathol，1995，147（1）：9-19.

[7] Marxsen JH，Schmitt O，Metzen E，et a1.Vascular endothelial Growthfactorgene expressionin the human breast cancer cell line MX21 iscontrolledby 02 availabilityin vitro and in vivo[J].AnnAnat，2001（183）：243-249.

[8] Shoslow RA，Dannenberg AJ，Rush D，et al.COX-2 is expressed in human pulmonary，colonic，and Mammary tumors[J].Cancer，2000（89）：2637-2645.

[9] Tomozawa S，Tsuno NI-I，Sunaml E，et al.Cyclooxygenase-2over Expression correlates with tumor recurrence especially hematogenous metastasis of colorectal cancer[J].Br J Cancer，2000（61）：324-328.

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1.5 統計方法

應用SPSSl7.0軟件對研究數據進行分析，計量數據采用均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料采取χ2檢驗。

2 結果

2.1 COX-2、HIF-1α在肺癌組織中的表達情況

COX-2主要在胞漿中表達，為棕黃色。56例肺癌組織中陽性表達為44例（78.57%）；其中，弱陽性為18例（40.91%）；中度表達為16例 （36.36%）；強表達10例 （22.73%）。HIF-1α主要在胞核或胞漿中表達，為棕黃色。56例肺癌組織中陽性表達為45（80.36%），其中，弱陽性為17例（37.78%），中度表達為13例（28.89%），強表達為15例（33.33%）。

2.2 COX-2、HIF-1α陽性率與病理分型的關系

56例肺癌組織中COX-2陽性為44（78.57%），其中小細胞癌陽性表達率77.78%，腺癌陽性表達率88.89%，鱗癌陽性表達率75.86%。HIF-1α陽性率為45（80.36%），其中小細胞癌陽性表達率94.44%，腺癌陽性表達率77.78%，鱗癌陽性表達率為86.21%。COX-2、HIF-1α陽性率均不受病理分型影響，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.3 COX-2、HIF-1α陽性率與病理分期的關系

COX-2在早期肺癌組中陽性表達率為61.54%（16/26），晚期表達率為90.00%（27/30）， COX-2與病理分型有關，差異有統計學意義（χ2=12.839，P<0.05）；HIF-1α在早期肺癌組中陽性表達率為80.77%（21/26），晚期為93.33%（28/30），HIF-1α與病理分型有關，差異有統計學意義（χ2==9.286，P<0.05）。見表2。

2.4 COX-2陽性率與MVD的關系

COX-2弱陽性的MVD值為（13.32±8.91），較強陽性為（19.20±9.98），（強陽性為23.04±5.69），MVD隨著COX-2表達強度增加而增加，差異有統計學意義（P<0.05），見表3。

2.5 HIF-1α陽性率與MVD的關系

HIF-1α弱陽性MVD值為（13.78±4.59），較強陽性為（21.59±8.25），強陽性為（28.58±2.59），MVD隨著HIF-1α表達強度增加而增加，差異有統計學意義（P<0.05），見表4。

3 討論

由于癌組織在缺氧環境下亦能生長、浸潤，因此隨著對癌組織研究的不斷深入，發現COX-2與HIF-1α在癌組織中異常表達，Marxsen[7]對肺癌、皮膚癌、前列腺癌、乳腺癌等進行分析，發現癌組織中HIF-1α呈過表達，特別是腫瘤壞死區域及腫瘤浸潤邊緣更加明顯，而腫瘤組織的基質細胞及鄰近正常組織中未見HIF-1α表達。Shoslow等[8]采用免疫組化法對60例腫瘤組織的石蠟切片進行檢測，包括肺癌（腺癌、鱗癌）、乳腺癌、結腸癌，發現COX-2在90%的肺癌、56%的乳腺癌、71%的結腸癌中顯示中度甚至高度表達。Tomozawa等[9]認為COX-2產生的血栓素、前列腺素是形成新血管的必要因素，它們能夠誘導VEGF生成，增使血管通透性增加，并增血流量，同時還可以抑制內皮細胞的凋亡，從而促進血管的生成。

在該研究中證實COX-2和HIF-1α與癌組織病理分期具有重要關系，COX-2在早期肺癌組中陽性表達率為61.54%，晚期表達率為90.00%；HIF-1α在早期肺癌組中陽性表達率為80.77%，晚期為93.33%。而且MVD的強度COX-2和HIF-1α的陽性狀態的增強而增強。但研究發現COX-2和HIF-1α與癌組織的病理分型關系不大。由此可見COX-2和HIF-1α對于癌組織在缺氧狀態下血管的生成具有重要作用。而且對于新的有關影響癌組織血管生成的因素的研究也在繼續，在未來的抗腫瘤研究領域將有更多有利于癌癥治療的方法出現。這就使得惡性腫瘤的治療希望越來越大。

綜上所述，對COX-2與HIF-1α的研究及其調控對于抑制腫瘤血管的生長方面擁有廣闊的前景及價值，在今后的抗腫瘤治療中勢必會成為新靶點。而COX-2與HIF-1α的相互影響及關系，也將成為治療腫瘤的有力依據。同時也替該院應該繼續加大對其他有關其組織形成的基因的研究，以便于全面的綜合的對惡性腫瘤進行治療。

[參考文獻]

[1] 連一新，施敏驊.缺氧誘導因子-1α和環氧化物酶-2在肺癌組織中的表達及其與血管生成的關系[J]. 南京醫科大學學報，2012，5（12）：15-16.

[2] 鄧述愷，聶文軍，王長安.HIF-1α和COX-2在非小細胞肺癌組織中的表達及臨床意義[J].腫瘤基礎與臨床，2010，5（13）：27-28.

[3] Diano S， Horvath TL.Mitochondrial uncoupling protein2（UCP2）in glucose and lipid metabolism[J]. Trends in Molecular Medicine ，2012，6（9）：18-20.

[4] Kim H S ，Park K G ，Koo TB，et al. The modulating effects of the over expression of uncoupling protein 2 on the formation of reactive oxygen species in vascular cells[J]. Diabetes Research and Clinical Practice ，2007，9（11）：56-57.

[5] Bimer E，Schindl M，Obermair A，et a1.Over expression of hypoxia-inducible factor lalpha is a marker for an unfavorable prognosis in early-stage invasive cervical cancer[J].Cancer Res，2000，60（17）：4693-4699.

[6] Weidner N.In tratum or almicrovessel density as a prognostic factor in cancer[J].Am J Pathol，1995，147（1）：9-19.

[7] Marxsen JH，Schmitt O，Metzen E，et a1.Vascular endothelial Growthfactorgene expressionin the human breast cancer cell line MX21 iscontrolledby 02 availabilityin vitro and in vivo[J].AnnAnat，2001（183）：243-249.

[8] Shoslow RA，Dannenberg AJ，Rush D，et al.COX-2 is expressed in human pulmonary，colonic，and Mammary tumors[J].Cancer，2000（89）：2637-2645.

[9] Tomozawa S，Tsuno NI-I，Sunaml E，et al.Cyclooxygenase-2over Expression correlates with tumor recurrence especially hematogenous metastasis of colorectal cancer[J].Br J Cancer，2000（61）：324-328.

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