探討T—SPOT.TB、CA125、TB—Ab在痰菌陰性肺結核診斷中的價值

杜巖青+張立+馮爽+馮冉冉

[摘要] 目的 探討T細胞斑點試驗（T-SPOT.TB）技術、糖類抗原125（CA125）測定與血清結核抗體（TB-Ab）測定，三種方法單一或聯合檢測對痰菌陰性肺結核的診斷價值。 方法 受試者均為我院住院患者共155例，其中痰菌陰性患者64例，痰菌陽性患者55例，非結核性肺疾病患者36例，對上述三項指標進行檢測。 結果 單一指標診斷肺結核T-SPOT.TB的靈敏度為87.3%、特異度為83.3%，AUC為0.850，CA125的靈敏度為80.0%、特異度為72.2%、AUC為0.837；TB-Ab靈敏度為63.6%、特異度為80.6%、AUC為 0.790；T-SPOT.TB和TB-Ab聯合診斷的靈敏度為94.5%，特異度為79.8%，AUC為0.988，T-SPOT.TB、TB-Ab、CA125三指標聯合檢測靈敏度為96.4%，特異度為44.4%，AUC為0.966。 結論 使用單一方法診斷痰菌陰性肺結核，T-SPOT.TB最有價值；聯合檢測時，T-SPOT.TB聯合TB-Ab靈敏度較高，AUC最高，對痰菌陰性肺結核的診斷具有更大的臨床應用價值。

[關鍵詞] T-SPOT.TB；TB-Ab；CA125；診斷價值

[中圖分類號] R521 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）32-0043-03

Value exploration of T-SPOT.TB， CA125 and TB-Ab in diagnosis of sputum bacteria-negative pulmonary tuberculosis

DU Yanqing ZHANG Li FENG Shuang FENG Ranran

Department of Clinical Laboratory，Tianjin Haihe Hospital，Tianjin 300350，China

[Abstract] Objective To investigate the diagnosis value of single or joint application of T cell spot test （T-SPOT.TB） technique， carbohydrate antigen 125 （CA125） determination and serum tuberculosis antibody （TB-Ab） determination in the detection of sputum bacteria-negative pulmonary tuberculosis. Methods All the 155 subjects were inpatients of Haihe Hospital， of which 64 patients were sputum bacteria-negative， 55 patients were sputum bacteria-positive and 36 patients suffered from non-tuberculosis pulmonary diseases. The above three indicators were detected. Results Regarding to single indicator diagnosis of pulmonary tuberculosis， the sensitivity， specificity and AUC of T-SPOT.TB were 87.3%， 83.3% and 0.850， the sensitivity， specificity and AUC of CA125 were 80.0%， 72.2% and 0.837， and the sensitivity， specificity and AUC of TB-Ab were 63.6%， 80.6% and 0.790. The sensitivity， specificity and AUC of T-SPOT.TB and TB-Ab joint detection were 94.5%， 79.8% and 0.988， and the sensitivity， specificity and AUC of T-SPOT.TB， TB-Ab and CA125 joint detection were 96.4%， 44.4% and 0.966. Conclusion For single-method diagnosis of sputum bacteria-negative pulmonary tuberculosis， T-SPOT.TB has the highest value； For joint detection， T-SPOT.TB combined with TB-Ab has higher sensitivity and the highest AUC， which is of larger clinical application value in the diagnosis of sputum bacteria-negative pulmonary tuberculosis.

[Key words] T-SPOT.TB； TB-Ab； CA125； Diagnosis value

結核病作為一種傳染性疾病在全球已經成為一種公共衛生問題和社會問題。在我國，結核病的感染率高、耐藥率高、死亡率高，使結核病的預防、診斷和臨床治療顯得尤為重要。常規細菌學檢查方法存在著靈敏度低、操作復雜，需時間較長和影響因素較多，不易標準化等缺陷，使細菌學診斷發展緩慢，無法充分滿足臨床診斷的需要。尋找單一或聯合診斷結核的新技術、新方法，為臨床提供更加快速準確的鑒別和診斷。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料

全部病例來源于本院2013年1月～2014年3月的住院患者，排除資料不全的病例，共入選155例，其中男80例，女75例，年齡22～80歲，平均41.5歲。痰菌陰性組（n=55）：其中男25例，女30例，年齡22～70歲，平均39歲。3 次涂片1次培養均陰性， X 線胸片有活動肺結核征象和（或）臨床癥狀，未經抗結核藥治療或治療未超過1個月，符合2006年中華醫學會結核病學分會制定的“肺結核診斷和治療指南”中菌陰活動性肺結核診斷標準[1]。痰菌陽性組（n=64）：其中男35例，女29例，年齡25～78歲，平均43歲。符合國家標準傳染性肺結核診斷標準。非結核肺病組36例，男20例，女16例，年齡25～80歲，平均50歲。其中肺癌14例，慢性阻塞性肺疾病4例，支氣管肺炎10例，間質性肺炎5例，特發性肺間質纖維化3例，均無肺結核或肺外結核病史。

1.2 檢測方法

T-SPOT.TB根據英國牛津Immunotec公司提供的T-SPOT.TB試劑盒，按其說明書進行操作，以斑點形成細胞（spot forming cells， SFCs）計數，即我院臨床所用參考值為靶向抗原6（ESAT-6）或培養濾液蛋白10（CFP-10）任一個>24 SFCs/1×106即為陽性。TB-Ab根據英國OMEGA公司提供的結核抗體試劑說明書進行操作，結果用酶標儀讀取OD值，然后在標準滴度曲線表中查找，得出相應的標本滴度，即我院臨床所用參考值TB-Ab滴度>400 U/mL為陽性。CA125采用羅氏e601電化學發光儀及其配套的試劑和耗材進行檢測，按儀器說明書操作，cut-off值為說明書給定，即我院臨床所用參考值CA125>35 U/mL為陽性。聯合判定結果指T-SPOT.TB試驗、CA125試驗、TB-Ab試驗的中只要其中任一項檢測結果為陽性即判為聯合陽性。

1.3 統計學方法

應用SPSS12.0統計學軟件進行數據分析，對各組數據進行正態性檢驗，陽性率的比較采用配對資料的McNemar檢驗；應用Medcalc 11.4軟件繪制ROC曲線，比較曲線下面積（AUC），確定臨界值。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3種方法檢測各組陽性率的比較

菌陽組、菌陰組分別與非結核病組比較，三指標均有顯著性差異（P<0.05），說明三指標對診斷菌陰性肺結核和菌陽性肺結核均有一定價值。見表1。

表1 3種方法檢測各組陽性率的比較（%）

注：*為菌陽組與非結核病組陽性率比較之χ2值和P值，#為菌陰組與非結核病組比較之χ2值和P值

2.2 單一方法對診斷活動性肺結核的價值評價

T-SPOT.TB的靈敏度為87.3%，特異度為83.3%，約登指數為0.706，AUC為0.850；CA125的靈敏度為80.0%，特異度為72.2%，約登指數為0.522，AUC為0.837；TB-Ab靈敏度為63.6%，特異度為80.6%，約登指數為0.442，AUC為0.790，可見單一指標檢測時無論是靈敏度、特異度，還是約登指數，T-SPOT.TB均優于CA125和TB-Ab。見表2。

表2 CA125、TB-Ab及T-SPOT對診斷活動性肺結核的價值評價

2.3 3種方法聯合檢測的診斷效能評價

兩種方法聯合檢測TB-Ab+ T-SPOT.TB的組合診斷菌陰性肺結核的靈敏度最高為94.5%，3種方法聯合檢測靈敏度略有提升，但特異度顯著下降，見表3。

表3 菌陰組中3種方法聯合檢測的診斷效能評價

2.4 三種方法單一和聯合診斷的ROC曲線分析

單一指標診斷時T-SPOT.TB的ROC曲線下面積最大，聯合診斷時TB-Ab+T-SPOT.TB組合ROC曲線下面積最大，見圖1。

圖1 幾種診斷方法的ROC曲線圖比較

3討論

T-SPOT.TB通過檢測外周血中結核分枝桿菌感染后分泌特異性細胞因子γ-IFN的T細胞數量來診斷是否存在結核感染，及判斷近期體內的抗原暴露情況[2-4]。痰菌陽性組和痰菌陰性組T-SPOT.TB 陽性檢出率為87.3%和83.3%差別不大，分析原因為痰菌陰性的結果很大程度上受限于痰標本質量、檢測手段和檢測水平，由于二者在臨床上都表現為活動性結核病，都體現了體內結核菌的活動，有可能兩組患者外周血特異抗原的效應T細胞數量及應答水平相接近，導致兩組患者IFN-γ的分泌量也相接近，菌陽肺結核可以通過痰菌得以確診，菌陰肺結核的診斷常常較為困難，本研究顯示痰菌陰性組中T-SPOT.TB的敏感度和特異度分別為87.3%和83.3%，和曾誼等[5]報道（敏感度和特異度分別是89.1%和80.6%）相近，也與李紅等[6]的報道（敏感度和特異度分別是85.8%和80.8%）相近。在3種檢查方法中敏感度和特異度均最高。因此，單一指標而言，T-SPOT.TB對菌陰肺結核的診斷較有意義。非結核肺疾病中肺癌、矽肺、哮喘、支氣管擴張與慢性阻塞性肺病等都是易并發肺結核的疾病[7]。本組未經更詳細查痰及其他檢查來排除并發肺結核的可能性。故是否并存肺結核導致本組中檢測出現較高的陽性率， 還需進一步探討，結果顯示，菌陰肺結核患者各抗原刺激后的血漿IFN-γ分泌量顯著高于肺部其他疾病患者。盡管病例數量較少，但仍提示全血γ干擾素釋放實驗可用于肺結核與肺部其他疾病的鑒別診斷。

CA125為體腔上皮細胞表達的一種分子量為200-1000KD的糖類蛋白，其在惡性腫瘤尤其是卵巢腫瘤的診斷已被廣泛應用，近年來也有CA125與肺結核、結核性胸膜炎等的相關報道。正常情況下CA125由上皮細胞合成并儲存在細胞內，由于細胞之間的連接和基膜的阻擋作用，并不能進入血液循環，因而在正常人血清中含量甚微。在腫瘤或炎癥等病理因素的刺激下，CA125 分泌增加，細胞間的連接和基膜平衡被破壞，進入血液循環，血清中CA125含量將顯著上升[8]。在對菌陰性肺結核的診斷中，本研究顯示敏感度為80%，與左楊松[9]的報道（敏感度88.57%）相近，特異度為72.2%，低于左楊松的報道（特異度94.4%），原因可能是左楊松的研究中疾病對照組排除了肺癌，而CA125對肺結核與肺癌的鑒別診斷意義不大[8]，這可能也是本研究非結核肺病組中CA125陽性率較高的原因。Fortun等[10]的研究顯示CA125在輔助診斷菌陰性肺結核中有一定的價值，與本研究結論一致。endprint

血清TB-Ab是由機體感染結核桿菌后針對結核菌素混合抗原所產生的一組免疫球蛋白，是檢測機體抗結核免疫反應體液免疫的一種方法，本研究結果顯示，血清TB-Ab在痰菌陽性組中的檢出率較高，在痰菌陰性組中較低，僅有63.6%，在菌陰肺結核的診斷評價中，有著很好的特異性（80.6%），但是敏感性較低。血TB-Ab檢測快速，方法簡便，但也會因為其他分枝桿菌感染及卡介苗接種等影響而出現假陽性。機體免疫力低下，未產生足量的結核抗體，或者體內結核抗體與抗原結合，無游離的抗體存在，都會產生假陰性。

臨床上為了提高診斷效率，通常采用兩個或兩個以上的診斷試驗。本研究顯示，就菌陰肺結核而言，T-SPOT.TB聯合TB-Ab敏感度顯著增加，達94.5%，特異性較單項指標未見明顯降低，AUC為0.988，再聯合CA125后未能進一步提高AUC指數，提示在聯合檢測診斷菌陰肺結核中，T-SPOT.TB聯合TB-Ab是檢測菌陰性肺結核的較好選擇，因此T-SPOT.TB聯合TB-Ab對菌陰性肺結核的診斷意義更大。

[參考文獻]

[1] 2010年全國結核病流行病學抽樣調查報告[J]. 中國防癆雜志，2012，V34（8）：485-508.

[2] Codecasa L，Mantegani P，Galli L，et al. An in-house RD1-based enzyme-linked immunospot-gamm a interferon assay instead of the tuberculin skin test for diagnosis of latent mycobacterium tuberculosis infection[J]. J Clin Microbiol，2006，44（1）：1944-1950.

[3] Lee LN，Chou CH，Wang JY，et al. Enzyme-linked immunospot assay for interferon-gamma in the diagnosis of tuberculous pleurisy[J]. Clin Microbiol Infect，2009，15（6）：173-179.

[4] Losi M，Bossink A，Codecasa L， et al. European Tuberculosis Network TBNET. Use of a T-cell interferon-gamma release assay for the diagnosis of tuberculous pleurisy[J]. Eur Respir，2007，30（6）：1173-1179.

[5] 曾誼，馮梟，宋梅梅，等. 酶聯免疫斑點試驗在菌陰肺結核診斷中的價值[J]. 中國防癆雜志，2012，34（2）：100-102.

[6] 李紅，唐神結，史祥，等. 全血γ-干擾素釋放試驗對涂陰肺結核診斷價值的研究[J]. 中華臨床醫師雜志（電子版），2012，6（16）：324-326.

[7] 彭衛生，王英年. 新編結核病學[M]. 第2版. 北京：中國醫藥科技出版社，2006：342-361.

[8] 韓丹，陳志飛，邱鳴. CA125在肺結核、結核性胸膜炎與肺癌鑒別診斷中的價值[J]. 臨床肺科雜志，2008，13（3）： 1160-1161.

[9] 左楊松. 血清CA125在菌陰肺結核和其他肺部感染中的表達和臨床意義[J]. 河北醫藥，2011，33（24）：3762-3763.

[10] Fortun J，Martin-Davila P，Mendez R，et al. CA-125：A useful marker to distinguish pulmonary tuberculosis from other pulmonary infections[J]. Open Respir Med J，2009， 20（3）：123-127.

（收稿日期：2014-07-24）endprint

血清TB-Ab是由機體感染結核桿菌后針對結核菌素混合抗原所產生的一組免疫球蛋白，是檢測機體抗結核免疫反應體液免疫的一種方法，本研究結果顯示，血清TB-Ab在痰菌陽性組中的檢出率較高，在痰菌陰性組中較低，僅有63.6%，在菌陰肺結核的診斷評價中，有著很好的特異性（80.6%），但是敏感性較低。血TB-Ab檢測快速，方法簡便，但也會因為其他分枝桿菌感染及卡介苗接種等影響而出現假陽性。機體免疫力低下，未產生足量的結核抗體，或者體內結核抗體與抗原結合，無游離的抗體存在，都會產生假陰性。

臨床上為了提高診斷效率，通常采用兩個或兩個以上的診斷試驗。本研究顯示，就菌陰肺結核而言，T-SPOT.TB聯合TB-Ab敏感度顯著增加，達94.5%，特異性較單項指標未見明顯降低，AUC為0.988，再聯合CA125后未能進一步提高AUC指數，提示在聯合檢測診斷菌陰肺結核中，T-SPOT.TB聯合TB-Ab是檢測菌陰性肺結核的較好選擇，因此T-SPOT.TB聯合TB-Ab對菌陰性肺結核的診斷意義更大。

[參考文獻]

[1] 2010年全國結核病流行病學抽樣調查報告[J]. 中國防癆雜志，2012，V34（8）：485-508.

[2] Codecasa L，Mantegani P，Galli L，et al. An in-house RD1-based enzyme-linked immunospot-gamm a interferon assay instead of the tuberculin skin test for diagnosis of latent mycobacterium tuberculosis infection[J]. J Clin Microbiol，2006，44（1）：1944-1950.

[3] Lee LN，Chou CH，Wang JY，et al. Enzyme-linked immunospot assay for interferon-gamma in the diagnosis of tuberculous pleurisy[J]. Clin Microbiol Infect，2009，15（6）：173-179.

[4] Losi M，Bossink A，Codecasa L， et al. European Tuberculosis Network TBNET. Use of a T-cell interferon-gamma release assay for the diagnosis of tuberculous pleurisy[J]. Eur Respir，2007，30（6）：1173-1179.

[5] 曾誼，馮梟，宋梅梅，等. 酶聯免疫斑點試驗在菌陰肺結核診斷中的價值[J]. 中國防癆雜志，2012，34（2）：100-102.

[6] 李紅，唐神結，史祥，等. 全血γ-干擾素釋放試驗對涂陰肺結核診斷價值的研究[J]. 中華臨床醫師雜志（電子版），2012，6（16）：324-326.

[7] 彭衛生，王英年. 新編結核病學[M]. 第2版. 北京：中國醫藥科技出版社，2006：342-361.

[8] 韓丹，陳志飛，邱鳴. CA125在肺結核、結核性胸膜炎與肺癌鑒別診斷中的價值[J]. 臨床肺科雜志，2008，13（3）： 1160-1161.

[9] 左楊松. 血清CA125在菌陰肺結核和其他肺部感染中的表達和臨床意義[J]. 河北醫藥，2011，33（24）：3762-3763.

[10] Fortun J，Martin-Davila P，Mendez R，et al. CA-125：A useful marker to distinguish pulmonary tuberculosis from other pulmonary infections[J]. Open Respir Med J，2009， 20（3）：123-127.

（收稿日期：2014-07-24）endprint

血清TB-Ab是由機體感染結核桿菌后針對結核菌素混合抗原所產生的一組免疫球蛋白，是檢測機體抗結核免疫反應體液免疫的一種方法，本研究結果顯示，血清TB-Ab在痰菌陽性組中的檢出率較高，在痰菌陰性組中較低，僅有63.6%，在菌陰肺結核的診斷評價中，有著很好的特異性（80.6%），但是敏感性較低。血TB-Ab檢測快速，方法簡便，但也會因為其他分枝桿菌感染及卡介苗接種等影響而出現假陽性。機體免疫力低下，未產生足量的結核抗體，或者體內結核抗體與抗原結合，無游離的抗體存在，都會產生假陰性。

臨床上為了提高診斷效率，通常采用兩個或兩個以上的診斷試驗。本研究顯示，就菌陰肺結核而言，T-SPOT.TB聯合TB-Ab敏感度顯著增加，達94.5%，特異性較單項指標未見明顯降低，AUC為0.988，再聯合CA125后未能進一步提高AUC指數，提示在聯合檢測診斷菌陰肺結核中，T-SPOT.TB聯合TB-Ab是檢測菌陰性肺結核的較好選擇，因此T-SPOT.TB聯合TB-Ab對菌陰性肺結核的診斷意義更大。

[參考文獻]

[1] 2010年全國結核病流行病學抽樣調查報告[J]. 中國防癆雜志，2012，V34（8）：485-508.

[2] Codecasa L，Mantegani P，Galli L，et al. An in-house RD1-based enzyme-linked immunospot-gamm a interferon assay instead of the tuberculin skin test for diagnosis of latent mycobacterium tuberculosis infection[J]. J Clin Microbiol，2006，44（1）：1944-1950.

[3] Lee LN，Chou CH，Wang JY，et al. Enzyme-linked immunospot assay for interferon-gamma in the diagnosis of tuberculous pleurisy[J]. Clin Microbiol Infect，2009，15（6）：173-179.

[4] Losi M，Bossink A，Codecasa L， et al. European Tuberculosis Network TBNET. Use of a T-cell interferon-gamma release assay for the diagnosis of tuberculous pleurisy[J]. Eur Respir，2007，30（6）：1173-1179.

[5] 曾誼，馮梟，宋梅梅，等. 酶聯免疫斑點試驗在菌陰肺結核診斷中的價值[J]. 中國防癆雜志，2012，34（2）：100-102.

[6] 李紅，唐神結，史祥，等. 全血γ-干擾素釋放試驗對涂陰肺結核診斷價值的研究[J]. 中華臨床醫師雜志（電子版），2012，6（16）：324-326.

[7] 彭衛生，王英年. 新編結核病學[M]. 第2版. 北京：中國醫藥科技出版社，2006：342-361.

[8] 韓丹，陳志飛，邱鳴. CA125在肺結核、結核性胸膜炎與肺癌鑒別診斷中的價值[J]. 臨床肺科雜志，2008，13（3）： 1160-1161.

[9] 左楊松. 血清CA125在菌陰肺結核和其他肺部感染中的表達和臨床意義[J]. 河北醫藥，2011，33（24）：3762-3763.

[10] Fortun J，Martin-Davila P，Mendez R，et al. CA-125：A useful marker to distinguish pulmonary tuberculosis from other pulmonary infections[J]. Open Respir Med J，2009， 20（3）：123-127.

（收稿日期：2014-07-24）endprint