siRNA沉默CD55基因?qū)σ认侔〣xPC-3細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

何 政，吳 慧，萬(wàn)榮華，鄭 軍

(三峽大學(xué) 第一臨床醫(yī)學(xué)院 肝膽脾胰外科，湖北 宜昌 443002)

siRNA沉默CD55基因?qū)σ认侔〣xPC-3細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

何 政，吳 慧，萬(wàn)榮華，鄭 軍*

(三峽大學(xué) 第一臨床醫(yī)學(xué)院 肝膽脾胰外科，湖北 宜昌 443002)

目的探討小分子干擾RNA(siRNA)沉默衰亡加速因子(CD55)基因?qū)σ认侔┘?xì)胞增殖的影響。方法針對(duì)CD55基因設(shè)計(jì)3對(duì)siRNA，轉(zhuǎn)染胰腺癌BxPC-3細(xì)胞，用實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot檢測(cè)CD55 mRNA和蛋白的表達(dá)，并用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞生物學(xué)行為的改變。結(jié)果轉(zhuǎn)染BxPC-3細(xì)胞48 h后，3條siRNA中僅siRNA3能顯著抑制CD55 mRNA和蛋白的表達(dá)，細(xì)胞凋亡比率顯著增加(Plt;0.05)；細(xì)胞增殖率顯著減少(Plt;0.05)；細(xì)胞G1/G0期升高，G2期變化不明顯，S期下降(Plt;0.05)。結(jié)論使用siRNA能夠有效地沉默CD55基因的表達(dá)，并顯著影響胰腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。

胰腺癌；RNA干擾；CD55；細(xì)胞凋亡；細(xì)胞增殖；細(xì)胞周期

胰腺癌為常見(jiàn)消化道惡性腫瘤之一，手術(shù)根治率較低，且對(duì)放化療均不敏感，胰腺癌根治性手術(shù)患者的總體術(shù)后的5年生存率lt;5%，迫切需要找到新的治療策略[1- 3]。CD55基因是本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)基因芯片篩選胰腺癌、癌旁組織找到的差異基因之一，其在多種惡性腫瘤組織及大多數(shù)胰腺癌細(xì)胞系中過(guò)量表達(dá)[4- 5]。本實(shí)驗(yàn)用小分子干擾RNA(small interference RNA,siRNA)下調(diào)人胰腺癌細(xì)胞CD55基因表達(dá)后觀察其對(duì)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期及細(xì)胞增殖的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

胰腺癌BxPC-3細(xì)胞(北京腫瘤研究所)；1640培養(yǎng)基(Gibco公司)；3對(duì)siRNA設(shè)計(jì)和合成(廣州銳博生物公司)，其中陰性對(duì)照序列由廣州銳博生物公司持有，不對(duì)外公開(kāi)(表1)；Annexin V-PE/7-AAD 試劑盒(BD公司)；熒光實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒(SYBR? Premix Ex TaqTM)(TaKaRa公司)；……