腺苷脫氨酶試劑盒(酶偶聯法)的臨床驗證

景燕祥

腺苷脫氨酶(ADA)廣泛分布于人體各組織中, 以胸腺、脾和其他淋巴組織中含量最高, 肝、肺、腎和骨胳肌等處含量較低。血液中ADA主要存在于紅細胞、粒細胞和淋巴細胞,其活性約為血清的40～70倍, T淋巴細胞比B淋巴細胞該酶活性更高。ADA較谷丙轉氨酶(ALT)、谷氨酰轉肽酶(GGT)更能反映急性肝損傷, 并有助于探測AH的殘留病變和肝臟病進展。ALT恢復正常而ADA持續升高者, 常易復發或易遷延為慢性肝炎。故ADA活性測定可作為慢性肝病的篩選指標［1］。因此, 作者ADA聯合檢測試劑盒(自動生化型), 進行臨床驗證和評價, 報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集正常人群、未經治療的肝炎患者和各類非肝炎性(慢性)疾病患者的血清各300例以上。正常人群為健康體檢人群標本, 采用當天生化檢測的血清標本, 當天采集, 當天測定完畢；各類非肝炎性(慢性)疾病患者為門診患者, 除外診斷明確的肝炎患者, 標本采用當天隨機門診抽血的生化血清標本, 當天測定完畢；肝炎患者標本, 為住院患者確認中已明確診斷肝炎, 且未經治療的患者, 留取當天分離血清樣品, -20℃冰箱保存, 約2周內測定。

1.2 方法 ADA試劑盒由上海執誠生物技術有限公司提供, 實驗在Olympus AU640自動生化分析儀上進行。自動化分析基本參數 ：Sample volume 15.0 μl；R1 volume 75 μl；R2 volume 75 μl；Wavelength pri：570 nm ； method：rate；Reaction slope (+)；Measuring point: First(20)；Last(25)；Calibration Type(2AB)；Standard：C1 100 U/ml；C2 64 U/ml.

2 結果

根據檢測試劑盒提供的結果判讀說明, ADA結果≥18 U/ml判為陽性。觀察健康體檢人群、門診患者群體和肝炎患者ADA的陽性檢出率, 檢測結果與統計分析見表1, 2。

通過觀察正常人群、未經治療的肝炎患者和各類非肝炎性(慢性)疾病患者的血清ADA量值變化和陽性率顯示：健康體檢人群組ADA檢出的特異性為98.9%, 假陽性率為0.85%；肝炎患者組ADA檢出的陽性率為74.23%, 假陰性率為25.77%；隨機門診患者組(排除診斷明確的肝炎患者, 可能存在急性炎癥和未明確診斷的肝炎患者)ADA檢出的陽性率為7.65%；對肝臟疾病的分類統計中顯示：其檢出的陽性率最高為肝硬化>酒精性肝病>肝癌>先天性肝病。

表1 體檢人群、門診患者群體和腫瘤患者TSGF的陽性檢出率(±s, %, n)

表1 體檢人群、門診患者群體和腫瘤患者TSGF的陽性檢出率(±s, %, n)

分組 例數 ADA量值(U/ml)陽性例數(ADA>18)陰性例數(ADA≤18)陽性率健康體檢人群組 353 45.40±11.02 3 350 0.85隨機門診患者組 327 51.65±10.02 25 303 7.65急性肝炎患者組 326 68.93±10.90 242 84 74.23

表2 分組統計(±s, %, U/ml)

表2 分組統計(±s, %, U/ml)

項目 例數 ADA量值 陽性例數(ADA>64)陰性例數(ADA≤64)陽性率自身免疫性肝病 48 49.90±13.83 5 48 10.4酒精性肝病 73 70.42±9.22 55 18 75.3肝硬化 52 72.11±8.82 45 7 86.5先天性肝病 29 67.72±10.66 20 9 69.0肝癌 27 69.32±10.75 20 7 74.1各種病原體感染 46 72.15±8.69 38 8 82.6其他疾病 90 63.76±12.53 53 37 58.9

3 討論

腺苷脫氨酶是一類非特異性的物質, 它并不能作為肝炎的診斷指標, 而更多的應該作為肝炎的觀測指標。ADA是反映肝損傷敏感指標, 可作為肝功能常規項目之一, 肝實質損害時, 血清ADA活力升高。血清中ADA主要來源于肝臟,因為它是肝細胞的胞漿酶, 所以任何原因造成的肝細胞損傷,其肝細胞膜的通透性就會增強, 致使血清中的ADA酶的活性升高, 故該酶可以作為反映肝實質損傷的指標［2］。

3.1 判斷急性肝損傷及殘存病變研究表明, 在急性肝炎時血清ADA活性增高, 其陽性率高于ALT和γ-谷氨酰轉肽酶(γ2GT)。而且由于ADA恢復正常較遲, 較ALT、γ2GT更能正確反映急性肝實質損害, 并有助于探測急性肝炎的殘存病變。但重癥肝炎發生酶膽分離時, 盡管ALT不高, 而ADA常明顯升高。急性肝炎后期ADA升高率高于ALT, 其恢復正常時間也較后者遲, 并與組織學恢復一致。ALT恢復正常而ADA持續升高者, 常易復發或易遷延為慢性肝炎。

3.2 協助診斷慢性肝病在反映慢性肝損傷時ADA較ALT為優［3］。許多研究中都發現, 慢性活動性肝炎(CAH)、肝硬化患者血清中ADA值顯著升高, 且較持久, 因而可判斷慢性肝病的程度［4］。另外, 慢性活動性肝炎ADA活性明顯高于慢性遷延性肝炎(CPH), 因此, 檢測ADA有助于CAH和CPH的鑒別診斷。

3.3 有助于肝纖維化的診斷ADA活性差異與肝細胞損害關系不大, 與肝纖維化程度相關。肝纖維化程度增加, ADA活性增加。

本次臨床驗證所用的試劑盒是自動生化型, 優勢力之處主要是：樣品用量省, 可以在自動生化儀上編程測定, 提高了分析精密度。

臨床癥狀和影像學檢查是肝炎診斷的重要依據, 但當肝炎缺乏特殊的癥侯群, 早期更無癥狀。各種影像學所能顯示的各不相同, 所以要實現早期診斷實際上是十分困難的。作者強調診斷應從形態推進到物質, 堅信物質先于形態的觀點,才能在診斷上有所突破 。ADA在各種肝炎早期即可升高已確實無疑。但在病程中各期的變化情況可能與疾病種類有關,尚需累積資料。

［1］熊立凡.臨床檢驗基礎.北京：人民衛生出版社, 2004:213-315.

［2］徐克誠, 孟憲鏞.臨床肝膽病學.天津：天津科技出版社,1987:282-283.

［3］李延偉, 趙洪濤, 品曉霞, 等.血清腺苷脫氨酶測定對肝臟疾病的診斷價值.實用內科雜志, 1990, 10(4):206.

［4］吳瑤, 沈云峰, 張玲, 等.腺苷脫氨酶的檢測及在肝病中的意義.江漢大學學報(自然科學版), 2003, 31(2):76-77.