成釉細胞瘤組織中β-catenin基因的表達變化

李 樂，張興樂，王 鵬，劉 雨

(承德醫學院附屬醫院，河北承德067000)

成釉細胞瘤(AB)是常見的牙源性腫瘤，其在亞洲和南美洲人群的牙源性腫瘤中分別占48.7%及29.19%［1，2］。AB 被認為是一種良性腫瘤，但它極易侵犯周圍組織，并有較高的復發率［3］。β-連環蛋白(β-catenin)是一組細胞內糖蛋白，是細胞信號轉導分子和黏附分子，在細胞黏附、生長、增殖過程中發揮重要作用。研究［4］發現，β-catenin在AB的發生和發展中起重要作用。本研究采用RT-PCR方法對AB組織中的β-catenin mRNA進行了檢測?，F將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集2007～2012年承德醫學院附屬醫院手術切除的AB組織8例份，均經病理檢查證實，全部為濾泡型AB。10例份牙源性角化囊性瘤(KCOT)組織及6例份正常口腔黏膜組織(取自唇腭裂手術患者)。

1.2 β-catenin mRNA的檢測 采用 RT-PCR法。①總RNA的提取:用TRIzol提取各受檢組織的總RNA，干燥后加入DEPC處理水20 μL。用紫外分光光度計分別測260 nm和280 nm處的紫外吸收值，重復測定3 次，計算 A260/A280，A260/A280＞1.8時，表明所提取的RNA純度高，可用于逆轉錄，根據A260計算RNA濃度。②引物合成:根據文獻及GenBank提供的RNA序列確定引物，β-catenin的正向引物為 5'-TGGCCTGGTTTGATACTGACCT-3'，反向引物為5'-CTCTACAGGCCAATCACAATG-C-3'，擴增片段長度為382 bp。內參照β-actin的正向引物為5'-ATCATGTTT GAGACCTTCAACA-3'，反向引物為5'-CATCTCTTGCTCGAAGTCCA-3'，擴增片段長度為318 bp。③RT-PCR反應體系及條件:逆轉錄反應采用20 μL體系:Oligo dT 1 μL，細胞總RNA 0.5 μg ，2.5 mmol/L dNTP 4 μL，DEPC 處理DDW 至13 μL，混合后加熱至75℃，5 min后移至冰上使其迅速冷卻?？焖匐x心后加入5×buffer 4 pL，加熱至42℃，2 min后加入逆轉錄酶1 μL，42℃保溫50 min后，70℃、15 min滅活逆轉錄酶。PCR反應體系為25 μL(10 × buffer 2.5 μL，2.5 mmol/L dN TP 2 μL，目的序列上下游引物各1 μL，cDNA 2 μL，Taq 酶 0.5 μL)。反應條件:94 ℃、2 min，94 ℃、40 s，58 ℃、40 s，72 ℃、60 s，共35個循環;72℃延伸10 min。④ PCR產物的檢測和分析:取5 μL的PCR產物，用2%瓊脂糖凝膠電泳30～50 min，紫外燈下照相，用凝膠成像處理系統對PCR產物的特異性片段進行掃描，以β-actin密度作為參考定量標準，目的基因β-catenin mRNA的表達量以 β-catenin mRNA與 β-actin mRNA密度之比來表示。

1.3 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件。計量資料以±s表示，比較用單因素方差分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

AB組織、KCOT組織、正?？谇火つそM織中β-catenin mRNA的相對表達量分別為 1.333±0.258、1.378 ± 0.211、0.952 ± 0.300;AB 組織和KCOT組織中β-catenin mRNA的表達量與正常口腔黏膜組相比，P均＜0.05;AB組織和KCOT組織中β-catenin mRNA的表達量相比，P＞0.05。見圖1。

3 討論

圖1 AB組織、KCOT組織、正常口腔黏膜組織中β-catenin mRNA的表達

AB的局部侵襲機制尚不完全明了，細胞增殖活性的增加可能對此起了一定作用［5，6］。有研究［7］提示，AB的侵襲性可能依賴于基質金屬蛋白酶(MMPs)和其抑制因子(TIMPs)之間的平衡與調節，同時與細胞外信號調節激酶(ERK)通路有關。β-catenin是近年來發現的一組具有細胞信號轉導和黏附功能的細胞內糖蛋白，在細胞黏附、生長、增殖過程中發揮重要作用［7］。人類β-catenin基因又稱CTNNB1基因，是一個相對分子質量為92 000 D的胞質蛋白，作為一種連接黏附蛋白和肌動蛋白的細胞骨架蛋白，不僅在細胞之間的信號傳導、形態形成以及黏附等方面起重要作用，而且是Wnt信號傳導通路的下游元件，其介導的Wnt信號傳導通路的異常激活與腫瘤的發生密切相關［8］。β-catenin能調節腫瘤細胞內MMPs的表達和活性，從而提高腫瘤的侵襲和轉移能力［9］。有研究［10］提示，在 AB 的腫瘤間質和腫瘤細胞中都有β-catenin的表達。鐘鳴等［11］采用免疫組化法檢測72例AB患者瘤組織中的β-catenin，結果發現，β-catenin在AB組織的外周層及星網狀層細胞的膜、漿膜或胞質中表達，異常表達率達87.5%，而且β-catenin在19例份 AB組織中出現了核的異位表達。本研究結果顯示，β-catenin mRNA在AB組織和KCOT組織中的表達顯著高于正常口腔黏膜組織。β-catenin在細胞內積累并轉移到細胞核內，與T細胞因子(TCF)或淋巴促進因子(LEF)相結合，在其他因子的輔助下協同激活靶基因的轉錄。其靶基因COX-2、Cyclin D1、間質金屬蛋白酶-9(MMP-9)等在腫瘤發生發展過程中扮演了重要的角色［8］。

總之，與正?？谇火つそM織相比，AB組織中β-catenin mRNA表達增強，與KCOT組織中的表達量相近，其在AB組織中的異常表達可能與AB的發生發展及其生物學行為有關密切相關，可作為AB的診斷、治療和預后評估的一個指標。

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