Skp2/p27在老年女性子宮內膜癌中的表達

徐 躍 崔艷雙 范艷艷 (深圳市南山區婦幼保健院，廣東 深圳 518000)

子宮內膜癌(EC)可能與月經失調、絕經、外源性雌激素補充或糖尿病有關〔1，2〕。子宮內膜癌與其他惡性腫瘤一樣，生物學特征在于細胞周期調節紊亂，影響細胞周期調節的因素都可影響腫瘤發生發展。從影響細胞周期的蛋白著手尋找與子宮內膜癌發生和發展敏感及特異的標志物，有助于在基因診斷或治療方面提供依據。S期激酶相關蛋白2(Skp2)/p27在眾多惡性腫瘤中作為調節細胞周期的通路已得到驗證〔3〕，但在子宮內膜癌中的作用較少報道。

1 對象與方法

1.1 對象 收集2010年1月至2014年4月在我院和吉林大學第一醫院婦科接受手術并經術后病理檢查確診為子宮內膜癌的老年女性患者的子宮內膜癌標本65例作為子宮內膜癌組，年齡(65.3±5.2)歲。選擇同期進行因良性病變切除的子宮標本43例作為對照，年齡(67.1±7.5)歲?；颊呔橥?。

1.2 排除標準 合并子宮內膜異位癥、腺肌病者;其他婦科惡性腫瘤者;妊娠或哺乳期;術前半年內接受激素治療、放療或化療。

1.3 檢測 采用S-P法檢測子宮內膜組織中Skp2和P27蛋白表達、放大200倍鏡下觀察5個視野，每個視野計數100個細胞，計陽性細胞數，將檢測結果分為四個等級:著色強度無、弱、中和強分別記分:0～3分，陽性細胞比例計分:0分:＜20%、1分:20% ～50%、2分:50% ～75%，3分:＞75%。綜合染色強度與陽性細胞數量兩者相加分為3級:0～2分:“～”、3～4分:“+”、＞5分:“++”。

1.4 統計學處理 采用SPSS15.0軟件，計數資料組間比較采用χ2檢驗或方差分析，采用Spearman等級相關分析。

2 結果

2.1 兩組Skp2和p27蛋白表達比較 Skp2主要表達于細胞核中，細胞核染成棕黃色為陽性細胞;p27主要表達于細胞核，細胞質少量表達，呈棕黃色顆粒狀。對照組Skp2和p27蛋白陽性例分別為8例〔+5例(11.6%)，?3例(7.0%)〕和38例〔+15例(34.92%)，?23例(53.5%)〕，子宮內膜癌組 Skp2和p27蛋白陽性例分別為54例〔?2例(18.54%)，?42例(64.64%)〕與18例〔+13例(20.0%)，?5例(7.7%)〕。與對照組比，子宮內膜癌組Skp2蛋白的表達較高(P＜0.01)，p27蛋白表達較低(P＜0.01)，見圖1。

2.2 不同組織學分級和臨床分期子宮內膜癌患者組織Skp2和p27蛋白表達 不同組織學分級、不同臨床分期患者組織中Skp2和p27蛋白表達差異有統計意義(P＜0.05)，見表1。

圖1 兩組Skp2和p27蛋白表達比較(×200)

表1 不同組織學分級和臨床分期子宮內膜癌患者組織Skp2和p27蛋白表達〔n(%)〕

2.3 子宮內膜癌組織中Skp2和p27蛋白表達的相關性Spearman等級相關分析顯示Skp2和p27的表達呈負相關(r=－0.38，P ＜0.05)。

3 討論

Skp2屬于人F-box蛋白家族，通過在細胞周期調控因子的泛素依賴性蛋白水解途徑的特異性識別底物參與細胞周期的調控。研究顯示子宮內膜癌Skp2陽性率是正常分泌期宮內膜的50倍，即便是增殖期仍低于子宮內膜癌的表達，子宮內膜腺癌的Skp2隨著組織學級別G1、G2和G3的增高、淋巴結轉移、淋巴管浸潤等表達陽性率逐漸增高〔4〕。Skp2在細胞周期的調控中發揮重要作用〔5〕。真核細胞通過泛素蛋白酶降解途徑降解泛素化的蛋白質調控細胞周期，泛素連接酶復合物作為泛素連接酶，參與細胞周期調控因子的泛素依賴性蛋白水解，Skp2在泛素連接酶復合物對蛋白底物起著特異識別作用，p27、p53及p21均通過Skp2依賴性泛素蛋白酶體途徑降解，Skp2的表達水平與組織的惡性程度密切相關。研究顯示有絲分裂原不存在但生長抑制因子存在時，Skp2可縮短初期肝細胞G～S期過渡時間，體內肝細胞中轉染Skp2可促進大量肝細胞的復制和肝組織增生，提示Skp2參與G～S期過渡調控，具有致癌作用;Skp2參與細胞DNA的合成，具有調控細胞進入S期的作用，敲除Skp2基因的小鼠的細胞核明顯增大，細胞內出現多中心體，表現為增長減慢甚至凋亡;Skp2參與轉錄調控，Skp2在參與c-myc的泛素化作用和蛋白酶體降解時，也作為c-myc的聯合轉錄因子顯示協同轉錄作用，另外，阻斷Skp2與轉錄因子E2F-1的相互作用可使轉錄因子E2F-1的泛素化降低。本課題結果顯示Skp2在正常子宮內膜呈低表達，但在子宮內膜癌組織呈現高表達，活性增強，與文獻結果一致〔6，7〕，Skp2 過表達促進子宮內膜癌細胞的增殖，利于腫瘤浸潤性生長。

p27蛋白是細胞周期蛋白激酶抑制因子，可抑制CDK2/cyclinE和CDK2/cyclinD復合物活性負性調節細胞周期，阻止細胞由G1期轉至S期而停止增殖，在細胞的分化發育中起著重要作用。p27表達異常與腫瘤的發生發展有關，如p27表達的增加能明顯提高HT29結腸癌細胞系對誘導分化的敏感性，通過腺病毒載體構建高表達的p27，可以導致裸鼠食道癌的存活素水平下降，誘導食道癌細胞的凋亡，查耳酮通過上調p27的表達水平誘導人乳腺癌細胞凋亡〔8，9〕。本課題顯示子宮內膜癌組織的p27蛋白表達降低或缺失，與文獻結果一致〔10〕。p27參與控制細胞周期進程，通過抑制 CyclinE-CDK2與 CyclinDCDK4激酶復合物活性，與細胞凋亡發生有著密切關系，其中CyclinE-CDK2是促使細胞通過G/S限制點的關鍵酶，抑制機制:(1)通過C端Thr磷酸化位點抑制CDK2-Thr160的磷酸化，抑制CyclinE-CDK2前活性狀態復合物激活;(2)抑制Cyclin-CDKs組蛋白H激酶活性;(3)抑制Cyclin-CDKs對融合蛋白Rb的磷酸化，使細胞周期停止于G～S期;(4)可部分參與細胞停止分裂和啟動細胞分化〔11，12〕。

Skp2與p27存在相互制約，互為增減的關系。在鼠細胞核中cyclinD1與Cdk4表達引起的新生心肌細胞的增殖，Skp2可在細胞周期中降解p27，當剔除鼠心肌細胞的p27，心肌的增殖加速〔13〕。Skp2與p27在許多惡性腫瘤如上皮性腺癌、非小細胞肺癌等存在負相關關系。上皮性腺癌Skp2 mRNA表達水平都增高，同時發現伴隨Skp2的表達增加，p27水平下降，Skp2過度表達與預后較差顯著相關。本課題中老年女性子宮內膜癌的Skp2與p27表達呈顯著的負相關關系，與文獻結果一致〔14〕。Skp2有致癌基因的作用，p27蛋白有抑癌基因作用，p27蛋白是Skp2泛素化降解的主要底物，Skp2作用于p27的羧基端，誘導p27與Skpl-Cull-Rbxl-Skp2泛素連接酶復合體結合，被26S蛋白酶體降解，引起cyclinE/CDK活化及Rb蛋白磷酸化，釋放轉錄因子E2F，促進細胞通過G1-S期轉換，加快細胞周期行，使細胞增殖失控，因此Skp2蛋白的高表達是p27蛋白水平減少的原因之一〔15，16〕。Skp2-p27可能形成了致癌通路，臨床已在一些惡性腫瘤的治療采用抑制或敲除Skp2基因可以上調p27蛋白表達，達到抑制惡性腫瘤的發生發展，提示也是基因治療的新靶點，那么子宮內膜癌未來的治療方向也將朝向基因靶點。

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