血栓心脈寧對大鼠血管性癡呆的治療作用

方圣博 謝湘林 劉 蕾 杜 冰 劉宏雁 (吉林大學藥學院藥理教研室，吉林 長春 130021)

血栓心脈寧是由丹參、川芎、毛冬青、水蛭、槐花、麝香、冰片、牛黃、人參莖葉皂苷、蟾酥等多種中藥材制成的純中藥制劑，具有芳香開竅、活血散瘀的作用，臨床上主要用于治療腦梗死、冠心病、心絞痛等疾病。臨床觀察顯示，血栓心脈寧通過減緩能量代謝、提高腦組織耐缺氧能力、促進建立腦血管側支循環、改善腦部微循環，防治局部及全腦缺血所致的腦組織損傷，減少壞死面積，恢復缺血所致病變的神經功能〔1，2〕。血栓心脈寧對血管性癡呆(VD)是否有治療作用，國內文獻未見報道。本實驗擬探討血栓心脈寧是否對VD大鼠有治療作用，為擴大其臨床應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 動物 清潔級Wistar大鼠，雌雄各半，220～250 g，合格證號SCXK-(吉)2007-0003，由吉林大學實驗動物中心提供。

1.2 實驗藥品及儀器 血栓心脈寧(吉林華康藥業股份有限公司提供，批號:110901);Morris水迷宮裝置:成都泰盟科技有限公司。

1.3 實驗方法 采用永久性結扎雙側頸總動脈法制作VD模型，將術后14 d大鼠按體重分為假手術組、模型組及血栓心脈寧組(1.1、2.2 g/kg)。連續灌胃給藥8 w后進行水迷宮實驗，實驗期間繼續給藥。水迷宮實驗連續7 d，前6 d在1、2、3、4象限4個不同的入水點，測定大鼠到達平臺的潛伏期、游程、朝向角及平均速度;第7天撤掉平臺，測定大鼠在2 min內經過平臺的次數、經過有效區的次數、平臺停留時間、平臺停留距離、有效區停留時間、有效區停留距離、平臺停留時間占總時間的百分比、平臺停留距離占總路程的百分比、有效區停留時間占總時間的百分比和有效區停留距離占總路程的百分比。水迷宮實驗后，快速取鼠腦，甲醛固定，做病理切片，觀察大腦皮層、海馬的病理變化。

1.4 統計學分析 采用SPSS13.7統計學軟件包對數據進行t檢驗。

2 結果

2.1 Morris水迷宮實驗 與模型組比較，血栓心脈寧小劑量組(1.1 g/kg)大鼠第2、5 天到達平臺的潛伏期縮短(P＜0.01，P＜0.05)、到達平臺的游程縮短(P＜0.05)，第1 ～6 天到達平臺的朝向角和游泳速度均無顯著變化。血栓心脈寧大劑量組(2.2 g/kg)大鼠第2～6天到達平臺的潛伏期縮短(P＜0.05)，第1～6天到達平臺的游程明顯縮短(P＜0.05)，第1～6天到達平臺的游泳速度無顯著變化，第3天到達平臺的朝向角變小(P＜0.05)。血栓心脈寧小、大劑量組大鼠第7天在2 min內經過平臺的次數、經過有效區的次數、平臺停留時間、平臺停留距離、有效區停留時間、有效區停留距離、平臺停留時間占總時間的百分比、平臺停留距離占總路程的百分比、有效區停留時間占總時間的百分比和有效區停留距離占總路程的百分比均無顯著變化。見表1～表5。

2.2 病理變化 血栓心脈寧小、大劑量組海馬神經細胞數無明顯減少，細胞變性、壞死、空泡現象較模型組輕，無明顯核固縮、深染現象;血栓心脈寧小、大劑量組大腦皮層神經細胞數無明顯減少，核固縮、深染及嗜神經細胞現象較模型組減少。血栓心脈寧大劑量組效果更為明顯。見圖1。

表1 血栓心脈寧對大鼠水迷宮平臺潛伏期的影響(s，s)

表1 血栓心脈寧對大鼠水迷宮平臺潛伏期的影響(s，s)

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;下表同

組別 n 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天假手術組 11 58.24±20.701) 25.95±10.392) 19.58±13.571) 9.20±6.042) 7.73±4.442) 7.06±3.102)模型組 11 82.89±27.19 72.22±37.78 49.31±39.53 45.44±38.53 26.36±21.19 15.01±8.42小劑量組 13 68.77±28.94 34.94±23.562) 27.86±20.99 21.90±21.67 11.99±7.181) 13.00±10.73大劑量組 11 61.87±22.18 35.75±21.091) 20.28±10.851) 18.58±15.541) 12.25±5.851) 8.84±4.981)

表2 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗游程的影響(cm，s)

表2 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗游程的影響(cm，s)

組別 n 第1天6天假手術組 11 1 484.81±453.521)762.57±326.502) 499.63±336.361) 280.00±178.361) 235.00±130.931) 240.35±93.701)模型組 11 2 216.03±1001.72 1 953.00±1257.04 1 481.05±1 199.36 1 246.91±1 223.94 759.84±668.31 558.94±460.92小劑量組 13 1 597.25±665.16 928.49±557.271) 762.03±669.94 641.85±757.85 332.51±183.321) 375.28±341.78大劑量組 11 1 508.72±394.351)835.97±363.611) 518.98±298.381) 416.20±335.041) 305.21±160.461) 253.67±91.471)

表3 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗朝向角的影響(°，s)

表3 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗朝向角的影響(°，s)

組別 n 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天假手術組 11 32.33±12.49 49.60±16.05 46.21±13.40 51.30±23.44 38.17±19.49 46.35±26.61模型組 11 22.90±10.29 50.61±24.14 56.06±21.22 59.65±20.56 51.05±19.60 50.17±29.91小劑量組 13 26.38±11.35 37.40±20.58 50.91±23.29 50.57±23.04 53.24±24.15 33.81±19.06大劑量組 11 25.35±9.60 52.09±19.39 35.81±20.661) 49.00±18.781)48.07±36.61 48.79±48.68

表4 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗平均速度的影響(cm/s，s)

表4 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗平均速度的影響(cm/s，s)

組別 n 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天假手術組 11 29.90±6.66 32.94±10.48 31.69±6.83 30.10±6.13 38.17±19.49 46.35±26.61模型組 11 28.04±4.25 29.25±6.83 27.05±3.60 26.69±3.39 51.05±19.60 50.17±29.91小劑量組 13 25.50±5.50 30.87±6.40 29.44±5.12 26.71±5.15 53.24±24.15 33.81±19.06大劑量組 11 26.78±7.14 27.29±6.24 28.88±5.20 27.25±7.06 48.07±36.61 48.79±48.68

表5 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗第7天的影響(s)

表5 血栓心脈寧對大鼠水迷宮實驗第7天的影響(s)

組別 n 經過平臺次數 經過有效區次數 平臺停留距離(cm)平臺停留時間(s)有效區停留距離(cm)假手術組 11 6.63±2.761) 10.54±2.58 75.08±40.92 2.86±1.82 797.56±214.45模型組 11 3.90±2.66 9.54±3.72 52.43±38.80 2.13±1.66 653.05±298.00小劑量組 13 4.66±2.67 10.91±4.01 52.27±37.70 2.12±1.54 683.20±269.02大劑量組 11 3.54±2.42 10.00±2.89 42.83±29.79 1.85±1.29 601.49±212.44組別 n 有效區停留時間(s)平臺停留時間/總時間(100%)有效區停留時間/總時間(100%)有效區停留距離/總路程(100%)平臺停留距離/總路程(100%)假手術組 11 31.43±11.81 2.40±1.53 26.41±9.94 28.53±8.79 2.90±1.53模型組 11 25.94±13.18 1.79±1.41 21.91±11.13 24.09±11.30 2.08±1.67小劑量組 13 28.50±11.11 1.79±1.30 24.10±9.41 26.11±9.99 1.99±1.41大劑量組 11 24.78±8.85 1.56±1.09 20.97±7.42 23.54±7.93 1.68±1.30

圖1 各組大鼠腦組織病理學改變(HE，×20)

3 討論

VD最重要的癥狀之一是學習記憶功能障礙。在行為學研究方面，Morris水迷宮目前被廣泛地應用于檢查動物空間學習與記憶能力〔3～5〕。Morris水迷宮測試程序主要分為定位航行試驗和空間探索試驗兩部分〔3，6〕，其中定位航行試驗檢測動物空間學習能力，空間探索試驗主要考察大鼠對原平臺的記憶能力。有研究顯示〔6〕，大鼠通過多次訓練學會找到隱蔽平臺，所形成的記憶是一種空間參考記憶，與平臺的位置、大鼠自身所處的位置和狀態無關，是一種以異我為參照點的參考認知。本實驗結果明血栓心脈寧可改善VD大鼠空間學習能力。

完整的海馬結構對于空間學習是至關重要的。有報道〔5〕稱損害背側1/3的海馬會導致嚴重的空間記憶障礙。海馬CA1區遲發性神經元死亡后動物表現出空間學習障礙。缺血缺氧可導致海馬結構的變化，趙霞等〔7〕通過電鏡檢查指出低氧對海馬區神經細胞的結構和功能有一定的損傷作用，導致學習記憶下降。本實驗病理結果顯示，血栓心脈寧可減輕VD大鼠皮層及海馬的病理損害。

腦內膽堿系統及自由基與學習記憶功能關系密切。川芎為血栓心脈寧的主要成分，有研究〔8〕報道，阿魏酸(川芎的主要成分)通過抑制缺血性腦損傷后AChE的活性、增加SOD的活性、降低MDA含量，改善VD大鼠的學習記憶能力。丹參也是血栓心脈寧的重要組成成分之一，索國玲等〔9〕發現復方丹參注射液可明顯縮短大鼠Morris水迷宮定向航行實驗潛伏期，增加有效區停留時間，并增加腦內AChE、ChAT活性，提示丹參可能通過提高中樞膽堿能系統改善學習記憶功能。本研究證實血栓心脈寧對血管性癡呆有一定治療作用，作用機制可能與減少VD腦組織自由基損傷、提高腦膽堿能系統有關，其確切機制有待于進一步研究。

1 黃常旺，包太成，彭 梅.血栓心脈寧片治療腦梗死的療效觀察〔J〕.現代醫藥衛生，2010;26(19):2972-3.

2 侯電波，于華明，薛彥君.血栓心脈寧膠囊治療急性腦梗塞的療效觀察〔J〕.遼寧中醫雜志，1998;25(5):297.

3 王緒平，品登俊，陳 宇，等.Morris水迷宮實驗評價血管性癡呆大鼠模型的學習記憶能力〔J〕.中華中醫藥學刊，2013;31(1):99-100.

4 程 明，朱熊兆.學習記憶的行為學研究方法〔J〕.中國行為醫學科學，2005;14(1):65-6.

5 方 松.Morris水迷宮實驗中海馬相關空間學習記憶的研究進展〔J〕.國際病理科學與臨床雜志，2010;30(4):321-6.

6 胡鏡清，溫澤淮，賴世隆.Morris水迷宮檢測的記憶屬性與方法學初探〔J〕.廣州中醫藥大學學報，2000;17(2):117-9.

7 趙 霞，張先鈞，張曉巖，等.亞急性高原低氧大鼠海馬神經細胞的電鏡研究〔J〕.高原醫學雜志，2006;16(2):59-60.

8 羅 云，趙海平，張 婧，等.阿魏酸對血管性癡呆大鼠學習記憶障礙的改善作用及其機制研究〔J〕.藥學學報，2012;47(2):256-60.

9 索國玲，唐洪麗，王秀利.丹參對幼年大鼠癲癇持續狀態學習記憶及海馬ChAT、AChE活性的影響〔J〕.東南大學學報，2007;26(4):271-4.