半枝蓮總黃酮抗甲型H1N1流感病毒感染的藥效學研究

趙鐵華，鄧淑華，楊鶴松，崔曉蘭

(1.河北師范大學藥物研究所，河北石家莊 050024;2.承德醫學院中藥研究所，河北承德 067000;3.中國中醫科學院中藥研究所，北京 100700)

半枝蓮為唇形科植物半枝蓮(Scutellaria barbataD.Don)的干燥全草，具有清熱解毒、化瘀、利尿等功效［1］，黃酮類化合物是其主要有效成分［2］。本文報道了我們采用大孔樹脂吸附技術制備的半枝蓮總黃酮對甲型H1N1流感病毒感染小鼠的藥效實驗結果。

1 材料與方法

1.1 受試藥物 半枝蓮總黃酮為河北師范大學藥物研究所采用AB-8型大孔樹脂吸附方法制備，經鑒定主要由野黃芩苷、芹菜苷元、白楊素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、紅花素、異紅花素等成分組成，黃酮類成分質量分數0.513。病毒唑為湖北制藥工業研究所生產(原料藥，批號970708)。按動物體表面積比例換算等效劑量法折算受試藥物的小鼠臨床等效劑量為實驗基本劑量，病毒唑為0.07 g·kg－1，半枝蓮總黃酮為0.10 g·kg－1，并設0.5和2.0倍半枝蓮總黃酮基本劑量實驗組。受試藥物使用時以蒸餾水配制所需濃度，按小鼠體質量以0.25 ml· (10 g)－1容積灌胃給藥。

1.2 實驗動物和病毒株 KM小鼠，清潔級(二級)，合格證號:京動許字(1999)第012號，♀♂兼用，體質量(14±2)g，由北京生物制品研究所動物飼養室提供。甲型HINI流感病毒FM1株由中國預防醫學科學院病毒研究所提供，中國中醫科學院中藥研究所藥理室常規傳代，對小鼠的半數致死量(LD50)為 10－5.75。

1.3 病毒感染致小鼠肺炎的預防和治療試驗［3－4］KM小鼠按體重分層隨機分為6組，分別為半枝蓮總黃酮3個劑量組、病毒唑組、病毒及正常對照組，每組10只小鼠。除正常對照組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15倍LD50病毒液滴鼻感染，每只0.05 ml。感染前1 d開始按“1.1”方法配制藥物濃度和容積灌胃給藥，每天2次，連續5 d，對照組在同等條件下以蒸餾水灌胃。d 6稱取小鼠體重后處死，解剖摘取全肺稱重，計算肺指數值，并計算肺指數抑制率。肺指數=［肺重(g)/體重(g)］×100;肺指數抑制率 =(病毒對照組肺指數均值－試驗組肺指數均值)/病毒對照組肺指數均值。

1.4 病毒感染致小鼠死亡的保護試驗［3－4］生理鹽水稀釋0.5倍～4倍LD50的病毒液，每個稀釋度10只小鼠，每只0.05 ml滴鼻感染，觀察動物的死亡情況。經觀察確定小鼠死亡數為感染小鼠數0.9的2倍LD50病毒液為實驗時的病毒感染量。取KM小鼠按體重分層隨機分成5組，分別為半枝蓮總黃酮3個劑量組、病毒唑組及病毒感染對照組，每組20只小鼠。各給藥組按“1.1”方法配制藥物濃度和容積灌胃給藥，每天2次，連續9 d，病毒對照組在同等條件下給予蒸餾水。給藥d 2各組小鼠用乙醚輕度麻醉后，以2倍LD50病毒液滴鼻感染，每只0.05 ml。記錄感染后小鼠的死亡數，計算死亡率、死亡保護率及生命延長率。死亡率 =動物死亡數 /動物總數;死亡保護率 =(對照組死亡率－實驗組死亡率)/對照組死亡率;生命延長率 =(實驗組平均存活天數－感染組平均存活天數)/感染組平均存活天數。

2 結果

2.1 半枝蓮總黃酮對甲型H1N1流感病毒感染致小鼠肺炎的預防和治療作用 實驗結果，半枝蓮總黃酮0.2 g·kg－1劑量組的肺指數值明顯低于病毒對照組(P＜0.05);0.1 g·kg－1劑量組的肺指數值低于病毒對照組，但差異無顯著性。(見 Tab 1)。

Tab 1 Effects of total flavone of Scutellaria barbata on lung index in infected mice(±s，n=10)

Tab 1 Effects of total flavone of Scutellaria barbata on lung index in infected mice(±s，n=10)

##P ＜0.01 vs normal;*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs virus.

Group Dose/g·kg－1 Lung index(g lung weight/100 g body weight)Inhibition Normal － 0.92 ±0.06 －Virus － 1.88 ±0.41## －Ribavirin 0.07 1.04 ±0.10＊＊ 0.45 total flavone of 0.20 1.39 ±0.37* 0.26 Scutellaria barbata 0.10 1.55 ±0.36 0.18 0.05 1.86 ±0.30 0.01

2.2 半枝蓮總黃酮對甲型H1N1流感病毒感染致小鼠死亡的保護作用 實驗結果，半枝蓮總黃酮3個劑量組小鼠的死亡數均少于感染對照組，但差異無顯著性;0.2 g·kg－1和0.1 g·kg－1劑量組小鼠的存活時間明顯延長，較感染對照組差異有顯著性(P＜0.01)。見Tab 2。

Tab 2 Effect of total flavone of Scutellaria barbata on death rate and survival time of mouse infected influenza virus

3 討論

1990 年，Nagai等［5］曾報告半枝蓮提取的 4'-羥基漢黃芩素對流感病毒A/PP/8/34有明顯抑制作用。2009年，郭姍姍等［6］報道了半枝蓮總黃酮對副流感病毒(PIV-1)感染的拮抗作用［6］。除以上報道外尚未檢索到半枝蓮提取黃酮類化合物抗呼吸道感染相關病毒的研究資料。

本文實驗結果，適宜劑量下的半枝蓮總黃酮對甲型H1N1流感病毒所致的小鼠感染及其導致的死亡表現了一定的治療或(和)拮抗作用，并且其藥效表現了劑量相關特征。相關研究提示，半枝蓮總黃酮抗甲型H1N1流感病毒作用的機制，可能與半枝蓮黃酮類成分抑制病毒對宿主細胞的吸附、抑制病毒復制早期階段病毒顆粒與細胞內涵體/溶酶體的融合，以及促進吸附病毒宿主細胞膜流動性的恢復以維持細胞膜的正常功能有關［5－7］。

［1］余傳隆.半枝蓮［M］//余傳隆，黃泰康，丁志遵，等，主編.中藥辭海(第1卷).北京:中國醫藥科技出版社，1993:1825.

［1］Yu C L.Scutellariae barbata［M］//Yu C L，Huang T K，Ding Z Z，et al.Chinese Medicine Dictionary(Vol 1).Beijing:China Medical Scince Press，1993:1825.

［2］鄒箴蕾，吳啟南.半枝蓮的化學成分及藥理作用研究進展

［J］.時珍國醫國藥，2005，16(2):149－50.

［2］Zhou Z L，Wu Q N.Chemical constituents and pharamcological action resaerch progress on Scutellariae barbata［J］.Lishizhen Med Mat Med Res，2005，16(2):149 －50.

［3］劉方舟，時 瀚，時宇靜，等.魚腥草注射液體內抗流感病毒藥效學研究［J］.藥學學報，2010，45(3):399－402.

［3］Liu F Z，Shi H，Shi Y J，et al.Pharmacodynamic experiment of the antivirus effect of Houttuynia Cordata injection on influenza virus in mice［J］.Acta Pharma Sin，2010，45(3):399 －402.

［4］萬巧鳳，顧里剛，殷勝俊，等.黃芩苷對FM-1肺炎小鼠肺組織細胞凋亡FAS/FAS-L系統的影響［J］.中國藥理學通報，2011，27(11):1555－9.

［4］Wan Q F，Gu L G，Yin S J，et al.Effect of Baicalin on cell apoptosis FAS/FAS-L system of pneumonia mice lung tissue infected with FM1［J］.Chin Pharmacol Bull，2011，27(11):1555 － 9.

［5］Nagai T，Miyaichi Y，Tomimori T，et al.Inhibition of infiuenza virus sialidase and anti-influenza virus activity by plant flavonoads［J］.Chem Pharm Bull，1990，38(5):29 －32.

［6］郭姍姍，時宇靜，高英杰，等.半枝蓮總黃酮抗副流感病毒的作用機制［J］.藥學學報，2009，44(12):1348－52.

［6］Guo S S，Shi Y J，Gao Y J，et al.The cytology mechanism of anti－parainfluenza virus infection of total flavone of Scutellaria barbata［J］.Acta Pharm Sin，2009，44(12):1348 －52.

［7］何子華，付陽勁，韋蘭萍，等.黃芩苷與利巴韋林聯用體內外抗流感病毒作用［J］.中國藥理學通報，2011，27(11):1560－4.

［7］He Z H，Fu Y J，Wei L P，et al.Effect of the combination of baicalin and ribavirin on influenza A virus inflectionin vitroandin vivo［J］.Chin Pharmacol Bull，2011，27(11):1560 －4.