FOLFOX方案化療對結直腸癌患者免疫細胞數的影響分析

孔 炯

江蘇省常熟市第二人民醫院腫瘤內科，江蘇常熟 215500

結直腸癌是惡性腫瘤中常見的一種疾病，由于經濟的發展、人們生活水平的改善[2]，間接提高了結直腸癌的患病率。癌細胞轉移對結直腸癌患者的臨床預后具有重要影響，患者免疫功能情況對腫瘤的進展、預后也有一定影響。化療治療能夠明顯提高結直腸癌患者的生存率，提高其生活水平。但是化療治療的同時還會產生一定的不良反應，導致患者免疫功能受到一定影響。若是免疫功能出現持續性降低，將增加腫瘤的復發率及轉移率。現擇取2011年6月—2014年1月期間在該院接受治療63 例結直腸癌患者，進一步了解FOLFOX 方案化療對其免疫細胞數的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

擇取在該院接受治療63 例結直腸癌患者作為實驗組，均通過病理檢查得以確診。結合國際TNM 分期標準把結直腸癌患者予以分期：I 期者3 例，II 期者10 例，III 期者32 例，IV期者18例。包括35 例女性患者，28 例男性患者。年齡均在27~79 歲之間，平均年齡（46.87±4.21）歲。同時擇取同期體檢的63 例健康人作為對照組，其中32 例女性患者，31 例男性患者。年齡均在25~77 歲之間，平均年齡（44.87±3.96）歲。全部受檢者均沒有免疫系統疾病，沒有應用免疫抑制劑，兩組患者的臨床一般資料之間，差異無統計學意義（P>0.05），研究存在可比性。

1.2 方法

FOLFOX 方案化療：第1 天，奧沙利鉑，劑量為85 mg/m2，予以靜脈滴注；亞葉酸鈣，劑量為400 mg/m2，進行靜脈滴注；氟尿嘧啶，劑量為400 mg/m2，進行靜脈推注，氟尿嘧啶2.4 g/m2持續靜脈滴注46 h。2 周1 次，2 次為1 個療程。

1.3 檢測方法

取經肝素抗凝處理的新鮮外周血標本，劑量為100 μL，溶入單克隆抗體（抗CD16+56PE、抗CD8PE、抗CD4PE、抗CD3FITC），混合均勻，室溫避光20 min 染色。再加入1.5 mL 紅細胞裂解液，當混合均勻后室溫、避光靜置10 min，使紅細胞破壞。以250×g的標準離心5 min，然后棄上清液。每管溶入2.0 mL（濃度為0.1%）疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液[2]，混合均勻，以100×g 的標準離心5 min，棄上層清液。再加入1.0 mL PBS，混合均勻，2 h 內上機檢測。通過流式細胞儀Cell Quest 軟件（型號為FACSCan）取得數據并分析。將FSC2H/SSC2H 設定為淋巴細胞門，用IgG/FITC/IgGaPE 明確FL1、FL2 的非特異性結合水平[3]。同時，調整SSC、FSC 的電壓；FL22FL1%熒光補償、FL12FL2%熒光補償；FSC 閾值。每管得到1萬個細胞。

將對照組63 例健康者的外周血細胞數的水平作為標準，評判實驗組患者治療前、后外周血細胞的變化情況。

1.4 統計方法

選用SPSS13.0 統計學軟件對試驗數據實施系統化處理，通過均數±、平均數（±s）表示計量數據，運用χ2對試驗所得計數數據進行檢驗，運用t 對所得計量數據進行檢驗。

2 結果

經化療治療后，實驗組患者在1 周、2 周、4 周時的外周血CD4+、CD3+以及CD4+/CD8+、NK 細胞數量、CD8+細胞比值之間差異無統計學意義（P>0.05）。實驗組患者外周血CD4+、CD3+以及CD4+/CD8+、NK 細胞數量明顯低于對照組，但是CD8+細胞比值明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組患者外周血細胞數的變化情況分析表[n=63，（±s）]

表1 兩組患者外周血細胞數的變化情況分析表[n=63，（±s）]

對照組實驗組分組療前療后1 周療后2 周療后4 周時間70.3±4.2 61.8±6.4 56.7±10.2 55.8±11.1 54.8±12.8 CD3+（%）37.3±2.8 28.1±3.2 39.6±6.8 39.2±10.3 38.4±11.1 CD4+（%）25.5±1.8 26.9±3.0 29.8±9.4 29.6±10.4 28.4±8.8 CD8+（%）1.6±0.3 1.3±0.2 1.2±0.8 1.2±0.6 1.2±0.2 20.8±2.7 18.9±5.5 17.4±8.9 17.2±7.5 16.5±6.9 CD4+/CD8+（%） CD16+56+（%）

實驗組結直腸癌不同分期患者的CD4+/CD8+細胞比值、NK細胞數量、CD4+細胞、CD3+細胞與對照組相比明顯減少；CD8+細胞值明顯增加，差異有統計學意義（P<0.05）。I 期-IV 期結直腸癌患者的NK 細胞數量、CD4+/CD8+細胞比值、CD4+細胞、CD3+細胞逐漸減少，CD8+細胞比例逐漸上升，但是I 期與II 期結直腸癌患者之間；III 期與IV 期結直腸癌患者之間，差異無統計學意義（P>0.05）。III 期、IV 期結直腸癌患者NK 細胞數量、CD4+/CD8+細胞比值、CD4+細胞、CD3+細胞明顯低于I 期、II 期；CD8+細胞比例明顯高于I 期、II 期，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

機體抗腫瘤免疫機制相對復雜[4-5]，通常抗腫瘤免疫主要是細胞免疫，但體液免疫也發揮了重要作用。該次研究中，結直腸癌患者外周血內CD4+/CD8+細胞比值、CD4+、CD3+均顯著小于健康者，但是CD8+細胞比例顯著高于健康者，這與以往研究結果相一致[6]。由此表明，結直腸癌患者免疫功能低于健康者水平，其機制可能受到腫瘤發生、發展期間分泌過多的免疫抑制因子有一定關系。結直腸癌患者通過FOLFOX 方案化療前、化療后1周、2周、4 周，外周血淋巴細胞亞群、NK 細胞活性沒有明顯差異，可見該種方案在對腫瘤病灶轉移治療有效的情況下，對患者機體免疫功能沒有產生顯著影響。隨著結直腸癌患者癌細胞的發展，從I期-IV 期患者機體外周細胞免疫功能不斷減少[7]，I 期、II 期與III期、IV 期患者之間明顯差異性，說明結直腸癌患者免疫功能與病理分期存在負相關性，患者病理分期越晚，免疫功能越差。反之，患者免疫功能越差[8]，說明腫瘤病理分期越晚、臨床預后越差。所以。患者免疫功能能夠間接說明患者的預后情況。結直腸癌患者NK 細胞數量顯著性小于健康者，同時與病理分期有一定關聯，病理分期越晚，外周血NK 細胞數量越低，關鍵原因可能是因為消滅腫瘤細胞期間，耗費了大量的NK 細胞，腫瘤細胞所產生的免疫抑制因子讓NK 活性減弱，NK 細胞將在血液循環過程中再分布。該次研究充分驗證了結直腸癌患者外周血細胞免疫功能減弱，也就是機體抗腫瘤免疫功能衰弱，致使腫瘤細胞脫離了免疫監視持續生長。所以，通過流式細胞儀對患者外周血T 淋巴細胞、NK 細胞等指標進行檢測時，可用于監測結直腸癌患者的免疫狀態，說明結直腸癌患者的免疫輔助治療重點在于提高NK 細胞、CD4+、CD3+數量，增強患者免疫功能。

表2 兩組患者外周血細胞數的變化情況分析表（±s）

對照組（n=63）實驗組I 期（n=3）II 期（n=10）III 期（n=32）IV 期（n=18）分組65.21±6.26 58.26±5.56 56.26±6.33 53.16±8.16 48.66±5.36 CD3+（%）32.21±8.02 28.81±4.06 26.55±6.53 23.81±5.57 18.22±3.57 CD4+（%）20.31±4.56 26.36±5.26 28.66±6.46 30.81±5.28 35.46±6.36 CD8+（%）1.62±0.26 1.12±0.46 0.94±0.25 0.78±0.13 0.51±0.20 18.46±5.12 17.13±2.42 15.76±1.93 12.46±4.51 10.26±3.56 CD4+/CD8+（%） CD16+56+（%）

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