HPLC法檢測乳制品中2種甜味劑和3種防腐劑

趙貞，萬鵬，李翠枝，邵建波，岳虹，李素琴

(內蒙古伊利實業集團股份有限公司，呼和浩特010010)

0 引 言

苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸是常用的食品防腐劑，由于其既能抑制多種微生物繁殖，又具良好的殺菌作用，被廣泛應用于罐頭、果醬、汽水、乳制品和肉制品中[1-6]。糖精鈉和安賽蜜為人工合成甜味劑，由于低熱量和高甜度等優點，被廣泛用于干果、糕點、飲料和雪糕等食品中。據研究報道每日攝取少量的防腐劑和甜味劑對人體沒有危害，但是過量時卻會對人體的臟器造成危害，甚至有得癌癥的隱患，特別是對老人、孕婦、小孩危害更為嚴重[7-12]。因此國內外對防腐劑和甜味劑的最大使用量有嚴格的規定，我國也出臺了相應的檢測標準[13-16]，但不能同時檢測以上5種物質，如果全部檢測耗時、費力。為了方便乳制品中防腐劑和甜味劑日常監測，本文建立了同時測定以上5種物質的檢測方法，該方法快速、操作簡單、成本低、重復性好，滿足對乳制品中多種甜味劑和防腐劑同時監測的要求。

1 實 驗

1.1 材料

甲醇（色譜純）；乙酸胺（色譜純）；乙酸鉛（優級純）；草酸鉀（優級純）；磷酸氫二鈉（優級純）；氫氧化鈉(優級純)；碳酸氫鈉(優級純)。安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸標準品。

1.2 儀器與設備

液相色譜儀（Agilent 1260）帶紫外檢測器，分析天平，振蕩器。

1.3 溶液的配制

安賽蜜標準儲備溶液：準確稱取0.1000 g安賽蜜，用水溶解并定容100 mL容量瓶中，配制成安賽蜜質量濃度為1 g/L的儲備溶液。

糖精鈉標準儲備溶液：準確稱取0.0851 g經120℃烘干4 h后的糖精鈉，加水溶解并定容100 mL容量瓶中，配制成糖精鈉含量1 g/L的儲備溶液。

苯甲酸和山梨酸標準儲備溶液：準確稱取標準物質各0.1000 g，加5 mL碳酸氫鈉溶液(20 g/L)，加熱溶解，加水定容100 mL容量瓶中，配制成苯甲酸和山梨酸質量濃度分別為1 g/L的儲備溶液。

脫氫乙酸標準儲備液：準確稱取0.1000 g脫氫乙酸標準品，用10 mL質量濃度為20g/L的氫氧化鈉溶液溶解，用水定容100 mL容量瓶中，配制成脫氫乙酸質量濃度為1 g/L的儲備溶液。

乙酸鉛溶液：稱取乙酸鉛200 g，溶解于1 000 mL水中。

草酸鉀—磷酸氫二鈉溶液：稱取草酸鉀30 g，磷酸氫二鈉70 g，溶解于1 000 mL水中。

1.4 色譜條件

測定波長：230 nm；色譜柱為Welch AQ－C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速為1.0 mL/min；進樣量：20 uL；柱溫為25℃；流動相：A為甲醇，B為乙酸胺水溶液 （濃度為0.02 mol/L），A在0～20 in質量分數由15%變為45%，20.01 min變為15%，20.01～30 min保持15%。

1.5 樣品處理

液態奶、酸奶和冷飲樣品：稱取15 g樣品于50 mL容量瓶中，加乙酸鉛和草酸鉀磷酸氫二鈉溶液各4 mL，加水定容,振蕩混勻,靜止數分鐘，用干燥濾紙過濾,再經濾膜(0.45 μm)過濾，上機。

乳飲料樣品：稱取15 g樣品于50 mL容量瓶中，加乙酸鉛和草酸鉀磷酸氫二鈉溶液各10 mL，加水定容,振蕩混勻,靜止數分鐘，用干燥濾紙過濾,再經濾膜(0.45 μm)過濾，上機。

1.6 結果計算

式中：X為試樣中被測物質的質量分數(μg/g)；C為由標準曲線得到樣品溶液中被測物質質量濃度(mg/L)；V為樣品溶液定容體積(mL)；m為稱取樣品的質量(g)。

2 結果分析

2.1 標準曲線及譜圖

安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸標準工作液：將標準儲備液用水依次稀釋成質量濃度為1.0， 2.0，5.0，8.0，10.0 mg/L的系列標準工作溶液，溶液經0.45 μm濾膜過濾，上機測定。

圖1為甜味劑和防腐劑混合標準品的色譜。由圖1可以看出，5種物質完全分離，保留時間分別為：5.701，8.128，15.847，19.930，20.951 min。

圖2為牛奶樣品加入5種混標的色譜。由圖2可以看出，5種物質與雜質峰完全分離，無干擾，可準確定性、定量檢測。

甜味劑和防腐劑標準曲線和線性關系如表1所示。由表1可以看出，5種物質濃度和峰面積呈線性關系，相關系數均大于0.9980。

圖1 甜味劑和防腐劑混合標準溶液HPLC色譜

圖2 牛奶中加入5種標品的HPLC色譜

表1 甜味劑和防腐劑線性關系

2.2 回收率和精密度實驗

在液態奶、酸奶和冷飲的空白樣品中加入不同濃度的甜味劑和防腐劑，平行測定3次，得出回收率結果如表2所示。

表2 液態奶、酸奶和冷飲中添加回收率結果

由表2可以看出，本方法測定不同乳制品中安賽蜜回收率為92.0%～117.7%，變異系數2.26%～6.37%；糖精鈉回收率為91.9%～99.5%，變異系數2.96%～5.89%；苯甲酸回收率為89.8%～105.7%，變異系數2.21%～5.69%；山梨酸回收率為93.6%～100.7%，變異系數2.55%～5.57%；脫氫乙酸回收率為80.0%～96.3%，變異系數2.34%～6.85%；5種物質均可達到分析要求。

2.3 線性范圍和檢出限

本方法中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的定量檢出限為1 mg/kg，線性范圍1～100 mg/kg。

3 結 論

在本方法的條件下，5種防腐劑和甜味劑與乳制品其他干擾雜質峰完全分離，可以準確定量檢測，該方法操作簡便、快速，回收率和重復性均符合要求，可以節約檢測成本并提高檢測效率，適合乳制品中防腐劑和甜味劑的日常監控。

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