半胱氨酰白三烯受體CysLT1R在大腸癌組織中的表達及臨床意義

張世強，唐采白，陳衛花(徐州醫學院第二附屬醫院腫瘤內科，徐州 006;徐州醫學院第三附屬醫院消化內科;徐州醫學院第二附屬醫院病理科)

近年來，炎癥因子和大腸癌發生之間的關系逐漸引起人們的重視。研究表明，炎性腸病患者結腸癌發生的風險要高30倍［1］，在許多與腸道炎癥和腫瘤發生有關的炎性因子中，白三烯(leukotrienes，LTs)和前列腺素的作用受到特別的關注，其中LTs包括白三烯B4(LTB4)以及半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes，CysLTs)。LTs與炎性腸病的發生有特殊的相關性［2，3］，然而，國外研究發現 CysLTs能刺激腸道上皮細胞發生增生反應，提示白三烯也可能參與腸道上皮細胞的過度增生和腫瘤形成［4］。本研究通過免疫組化檢測大腸癌組織、癌旁組織及大腸癌前病變腺瘤性息肉組織中CysLT1R的表達，來探討CysLT1R在人類大腸癌發生發展中的可能作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2009-2013年間徐州醫學院第二附屬醫院病理科存檔大腸癌組織蠟塊46例，其中男性26例，女性20例，年齡29-72歲，中位年齡56歲;癌旁組織32例(與32例癌組織標本為同一患者，另外14例患者癌旁組織中發現有點狀癌細胞浸潤，無法作為對照組)，其中男性18例，女性14例，年齡29-68歲;管狀絨毛狀腺瘤15例，其中男性8例，女性7例，年齡35-74歲。所有病例術前均未進行放療和化療。標本分為大腸癌組、腺瘤性息肉組及癌旁黏膜組。

1.2 主要試劑

CysLT1R兔抗人多克隆抗體購自美國Cayman公司，免疫組化DAB顯色試劑盒購自北京中杉生物技術公司。

1.3 實驗方法

免疫組化技術采用EnVision二步法，免疫組化過程:組織切片經脫蠟、水化后，用檸檬酸緩沖液(pH=6.0)微波熱修復抗原5 min，30 g/L過氧化氫封閉內源性的過氧化物酶，山羊血清封閉非特異性反應。PBS替代一抗作陰性對照。參照文獻［5］對染色結果進行判斷。5%以上細胞胞膜或胞質染色判定為陽性。

1.4 統計學分析

將所有實驗數據輸入SPSS 13.0統計軟件包，應用χ2檢驗或Fisher檢驗分析CysLT1R表達與大腸癌臨床病理因素的相互關系，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CysLT1R在大腸癌組織、癌旁組織及腺瘤性息肉組織的表達

CysLT1R免疫組化陽性產物主要定位于細胞膜和細胞質，部分患者可見胞核著色(圖1，見第247頁)。46例大腸癌組織中，CysLT1R陽性表達31例(67.39%)，32例癌旁組織中，CysLT1R陽性表達13例(40.62%)，15例大腸腺瘤性息肉組織中，Cys-LT1R陽性表達6例(40.00%)，大腸癌組織中，Cys-LT1R的陽性表達率高于癌旁組織、腺瘤性息肉組織(P ＜0.05，見表1)。

圖1 CysLT1R在大腸癌組織、癌旁組織及腺瘤性息肉組織中的表達 (EnVision，×400)Figure 1 CysLT1R protein expression in colorectal carcinoma tissues，para-neoplastic tissues and adenomatous polyp tissues(EnVision，×400)

表1 CysLT1R在大腸癌組織、癌旁組織及腺瘤性息肉組織的表達 (例)Table 1 CysLT1R expression in colorectal carcinoma tissues，para-neoplastic tissues and adenomatous polyp tissues (cases)

2.2 CysLT1R的表達與大腸癌臨床病理特征之間的關系

CysLT1R的表達與大腸癌的病理分級、腫瘤最大徑、有無淋巴結轉移及臨床分期有關，其中高分化腺癌、腫瘤最大徑＜5 cm、淋巴結未轉移及臨床分期早的患者CysLT1R的陽性表達率均明顯低于中低分化腺癌、腫瘤最大徑＞5 cm、有淋巴結轉移及中晚期的患者(P＜0.05);但CysLT1R的表達與大腸癌患者的性別無明顯的關系(P＞0.05，見表2)。

表2 CysLT1R的表達與大腸癌臨床病理特征之間的關系Table 2 Correlation of CysLT1R expression in colorectal carcinoma tissues with clinical pathological features

3 討論

大腸癌是目前嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤之一，大腸癌在全球發病率高居惡性腫瘤第四位［6］，我國大腸癌發病率在近30年中總體增加36.7%，年均新發大腸癌病例13萬，并以年均4.2%的增幅攀升［7］。大腸癌的發生發展是一個涉及多因素、多步驟、多基因的過程，具有高復發和高轉移的特點，目前對于大腸癌的發病及其轉移尚無有效的防治手段，其發病機制和防治依然是這一領域中的研究熱點。

近年來研究證實，白三烯及其受體(1eukotriene receptors，LTRs)參與了多種腫瘤的發生，是腫瘤發生的一種新機制，其主要機制可能為腫瘤細胞上白三烯受體高表達，發揮了對腫瘤細胞的促增殖作用。另外有研究發現半胱氨酰白三烯受體1(CysLTR1)在結腸癌細胞中發生核轉位是發揮促增殖作用的重要機制，這種促增殖效應可被相應的受體拮抗劑所阻斷［8］。白三烯B4(LTB4)受體結抗劑LY29311是第二代LTB4受體結抗劑，在臨床試驗中顯示有顯著的抗瘤效應［9，10］。因此，研究白三烯及其受體與腫瘤的發生發展的關系，對于大腸癌的早期防治具有重要的意義。目前雖然已有研究報道LTRs在多種組織細胞中表達，但關于LTRs在結腸腫瘤組織中的表達、分布與功能，以及他們在結腸腫瘤發病中作用的研究少見報道。如果能夠了解白三烯受體在腸黏膜上皮細胞中的表達狀況與功能，對于評價LTRs在結腸腫瘤發病中的作用以及尋求新的治療靶位具有積極的意義。

本研究結果顯示，大腸癌組織中CysLT1R的陽性表達率明顯高于癌旁組織、腺瘤性息肉，而高分化腺癌、腫瘤最大徑＜5 cm、無淋巴結轉移及臨床分期較早期的患者CysLT1R陽性表達率均明顯低于中或低分化腺癌、腫瘤最大徑≥5 cm、有淋巴結轉移及臨床分期較晚的患者，統計分析顯示差異均具有顯著性(P＜0.05)。因此，本研究認為，大腸癌變過程中CysLT1R表達水平明顯上調，陽性表達者進展快，易發生淋巴結轉移，CysLT1R表達水平可能是反映大腸癌發生發展的重要標志物，且其表達水平與大腸癌分化程度、腫瘤大小、淋巴結轉移及臨床分期密切相關，但由于本研究中病例數較少，仍有待積累更多的病例進行更深入的研究。

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