奶牛乳頭高效藥浴消毒劑殺菌效果試驗

文∕周慶民 侯美如 馮萬宇 徐 馨 黃 健

（黑龍江省獸醫科學研究所）

奶牛擠奶后用消毒劑對乳頭進行消毒是生產中預防奶牛乳房炎發生的主要方法。奶牛乳頭藥浴消毒劑的質量對殺滅病原微生物的效果起到最為關鍵的作用。但奶牛的生活條件、乳頭生理位置和特殊生理功能，決定了奶牛乳頭始終處于十分復雜的環境中，這就要求乳頭的藥浴消毒劑必須具有廣譜殺菌、殺菌速度快、安全可靠的特點。為了檢驗奶牛乳頭高效藥浴消毒劑的消毒效果，本文對其進行了殺菌速度和載體浸泡消毒效果試驗。

1 材料與方法

1.1 材料

硫代硫酸鈉、無水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀；營養瓊脂培養基、營養肉湯培養基、鮮血瓊脂培養基、LB培養基；奶牛乳頭高效藥浴消毒劑（由本研究室研制）；菌種（金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、大腸桿菌）由本研究室分離培養。

1.2 儀器設備

電子天平、超凈臺、高壓滅菌器、干燥箱、恒溫箱、顯微鏡。

1.3 方法

1.3.1 培養基的制作

參照《獸醫微生物學實驗指導（第2版）》[1]制作所有液體培養基和普通平板培養基。

1.3.2 硫代硫酸鈉中和劑的制備

稱取無水磷酸氫二鈉 2.83 g、磷酸二氫鉀1.36 g，加蒸餾水至1 000 mL，待完全溶解后，調pH值到7.2～7.4，于121 ℃高壓滅菌器中滅菌20 min，配制成0.03 mol/L、pH值為7.2～7.4的磷酸鹽緩沖液。

取1.0 g硫代硫酸鈉，溶解于100 mL 0.03 mol/L、pH值7.2～7.4的磷酸鹽緩沖液中，于121 ℃高壓滅菌器滅菌15 min，制備成1.0%的硫代硫酸鈉中和劑。

1.3.3 試驗菌液的制備

將金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、大腸桿菌分別接種到營養瓊脂培養基培養24 h后，再將金黃色葡萄球菌接種到營養肉湯培養基、無乳鏈球菌和停乳鏈球菌接種至鮮血瓊脂培養基，大腸桿菌接種到LB培養基中，37 ℃培養18～24 h，備用。

1.3.4 殺菌速度試驗

試驗分為4組，分別為金黃色葡萄球菌殺滅試驗組、無乳鏈球菌殺滅試驗組、停乳鏈球菌殺滅試驗組、大腸桿菌殺滅試驗組，每組設6 個反應管，每組每管分別加入1 mL相應的菌液，隨即加入5 mL奶牛乳頭高效藥浴消毒劑（邊加入邊搖勻）。6 個管依次在加入奶牛乳頭高效藥浴消毒劑5、10、15、20、25、30 s時，各取1 mL加入9 mL1.0%的硫代硫酸鈉中和劑，搖勻，中和10 min，取出1 mL加入9 mL相應的液體培養基，搖勻后放入恒溫箱37 ℃培養24 h，觀察各管中細菌的生長情況。

1.3.5 載體浸泡消毒試驗

選擇大小為26 mm×76 mm的長方形載玻片24 片為載體，首先將載玻片放在含洗滌劑的水中煮沸30 min，然后用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水煮沸10 min，再用蒸餾水漂洗至pH值呈中性，晾干、單片包裝，于恒溫干燥箱160 ℃干熱滅菌2 h，備用。分別取金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、大腸桿菌液體培養物0.1 mL（含菌量約106個）均勻涂抹在滅菌的載玻片上，每種細菌涂抹6 片，放入恒溫箱37 ℃培養1 h，取出放入室溫的奶牛乳頭高效藥浴消毒劑中，依次作用5、10、15、20、25、30 s；取出放入1.0%的硫代硫酸鈉中和劑中，作用10 min；取出放入液體培養基中，于恒溫箱37 ℃培養24 h，觀察細菌生長情況。

2 結果

2.1 殺菌速度試驗

從表1可以看出，奶牛乳頭高效藥浴消毒劑在10 s即可殺滅懸液中的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌，在15 s殺滅懸液中的無乳鏈球菌和停乳鏈球菌，15 s可殺滅全部懸液細菌。

表1 不同消毒時間消毒劑對懸液細菌作用情況

2.2 載體浸泡消毒試驗

從表2可以看出，奶牛乳頭高效藥浴消毒劑對載體金黃色葡萄球菌在10 s即可殺滅，對載體無乳鏈球菌、停乳鏈球菌和大腸桿菌在15 s殺滅，對載體細菌15 s即可全部殺滅。

表2 不同消毒時間消毒劑對載體細菌作用情況

3 分析與討論

3.1 奶牛乳頭高效藥浴消毒劑是用目前臨床常用的碘制劑研制而成的，含有碘的激活劑，可激活碘的活性，快速增加消毒劑中有效碘的含量，提高有效碘的濃度，增強對病原微生物的殺滅能力，效果快速而徹底。

3.2 奶牛乳房炎發病原因復雜，但90%以上是由外源性病原微生物通過乳頭管口感染引起的，通過乳頭藥浴可以大大減少乳頭上的病原微生物，盡可能地消除傳染源，有效地預防奶牛乳房炎的發生，因此，乳頭藥浴消毒劑在使用安全的基礎上，必須殺菌速度快、殺菌譜廣，才能達到理想效果。本試驗表明，奶牛乳頭高效藥浴消毒劑無論是懸液殺菌試驗，還是載物殺菌試驗，15 s即可全部殺滅引起奶牛乳房炎的主要細菌，殺菌率達到100%，2種試驗效果基本一致，能夠達到奶牛乳頭藥浴高效消毒的目的。

[1]姚火春.獸醫微生物學實驗指導（第二版）.北京：中國農業出版社，2012.