乳腺癌中神經細胞黏附分子的表達及臨床意義

向亞莉　吳永國　+歐湛賜　等

[摘要] 目的 探討神經細胞黏附分子（NCAM）在乳腺癌中的表達及臨床意義。 方法 應用免疫組織化學方法檢測NCAM在30例乳腺癌組織、癌旁組織及30例乳腺良性病變組織中的表達情況。應用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定NCAM在30例乳腺癌患者、30例乳腺良性病變患者及30例正常人群中的血清濃度并進行統計學分析。 結果 免疫組化結果：乳腺癌組織、癌旁組織及乳腺良性病變組織中NCAM陽性率分別為26.67%、3.33%、3.33%，NCAM在癌組織中表達明顯高于癌旁組織及良性病變組織（P<0.0125），乳腺癌中有神經侵襲組的NCAM 陽性率明顯高于無神經侵襲組（P<0.05） 。ELISA結果：乳腺癌患者的NCAM血清濃度均顯著高于良性病變組及正常人群組（P<0.05）。 結論 神經細胞黏附分子在乳腺癌的發生發展中可能起到了重要作用。NCAM的高表達對于乳腺癌的神經侵襲和轉移可能很重要。

[關鍵詞] 神經細胞黏附分子（NCAM）；乳腺癌；酶聯免疫吸附法；免疫組織化學

[中圖分類號] R737.9 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2014）22-24-04

乳腺癌是嚴重危害女性健康的惡性腫瘤，復發、轉移常是其治療失敗的主要原因。因此，對乳腺癌的早期診斷、早期治療成為提高其治療效果的關鍵。周木秀等[1]發現神經周浸潤與乳腺癌患者的復發及5年存活率有關，是乳腺癌一種重要的預后參數。神經細胞黏附分子（neural cell adhesion molecule，NCAM）對神經組織有親嗜性，對膽管癌的發生、神經浸潤轉移有重要影響[2]。王大東等[3]發現膽管癌中腫瘤細胞神經浸潤陽性與小血管、小

淋巴管的浸潤呈正相關，腫瘤細胞NCAM表達陽性與神經浸潤陽性呈正相關，腫瘤的惡性程度與NCAM表達呈正相關。另外一些研究發現NCAM與胃癌、涎腺腺樣囊性癌等的浸潤轉移相關，推測腫瘤細胞表面的NCAM可能在腫瘤神經侵襲中發揮“錨定”作用[4-5]。為了了解NCAM在乳腺癌的表達情況，探討它與乳腺癌的發生及浸潤轉移的關系，尋找可能的乳腺癌相關血清標志物，為乳腺癌的防治提供新思路，本研究采用免疫組織化學技術對乳腺癌組織、癌旁組織及良性乳腺病變組織中NCAM的表達進行檢測，并用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定乳腺癌患者、良性乳腺病變患者及正常人群的NCAM血清濃度，對結果進行統計學分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 免疫組化檢測 所有病例均來源于深圳市寶安區松崗人民醫院2009～2014年收治的乳腺疾病患者，病理資料完整。乳腺癌30例，經病理組織學確診，均帶有癌旁組織；其中活檢標本12例，癌根治術標本18例；有神經侵襲的10例，無神經侵襲的20例；患者均為女性，年齡33～73歲，腫塊大小3～5cm，所有患者術前未進行抗腫瘤化療或放療。乳腺良性病變30例，包括乳腺纖維腺瘤20例，乳腺腺病4例，囊性乳腺病6例，年齡23～65歲，平均年齡45歲。

1.1.2 酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測 30例乳腺癌患者及30例乳腺良性病變患者同上所述，所有研究對象均排除妊娠、感染、肝腎功能不全、糖尿病、心功能衰竭等并發癥。另外選取本院同期健康體檢人員30例為正常對照組，年齡26～57歲，平均42歲。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化檢測方法 30例乳腺癌組織、癌旁組織及30例乳腺良性病變組織經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，常規切片，HE染色，光鏡觀察。之后連續切片進行免疫組化標記（S-P法），第一抗體為鼠抗人NCAM（CD56）單克隆抗體，試劑均為即用型，購自福州邁新生物技術開發有限公司。以PBS液代替一抗作陰性對照，已知NK-T細胞淋巴瘤陽性結果為陽性對照。NCAM 陽性判斷標準：染色陽性信號為棕黃色，位于細胞膜或細胞漿。

1.2.2 酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測方法 良性腫瘤患者及乳腺癌患者均于手術前取血，正常對照組血清于健康查體時獲得。采用ELISA測定受試對象血清中NCAM濃度（試劑盒購自博士德生物公司）。試驗過程嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 免疫組化分析

2.2 ELISA結果分析

3 討論

乳腺癌是發生在乳腺的一種惡性上皮性腫瘤。乳腺并不是維持人體生命活動的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性，細胞之間連接松散，容易脫落。癌細胞一旦脫落，游離的癌細胞可以轉移、擴散，從而危及生命。近年來，乳腺癌已逐漸成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。目前，關于乳腺癌預后指標的研究已不少見，部分指標已日漸成熟并應用于臨床，如ER、PR、Her-2等，但目前尚無特異性血清腫瘤標志物以監測預后。此外，由于血清取材簡便易行，可以長期、動態、連續觀測，因此，尋找乳腺癌相關血清特異性標志物具有重要意義。

惡性腫瘤細胞的重要生物學特性是其對周圍組織的侵襲和破壞，并在遠隔器官形成轉移灶。其涉及腫瘤細胞與宿主間多環節、多步驟的復雜過程，包括腫瘤細胞轉變，原位脫落和侵襲，內滲和播散，郁積、黏附和外滲，異位生長和增殖，其中細胞黏附參與整個過程并起重要作用，而介導細胞黏附作用的是一大類細胞黏附分子[6]。細胞黏附分子在腫瘤侵襲轉移中的作用是一復雜的過程，主要是參與介導腫瘤細胞與宿主細胞及細胞外基質的相互作用，按其結構可分為5類：免疫球蛋白超家族（IgSF）、鈣黏素家族（cadherins）、整合素家族（integrins）、選擇素家族（selectins）以及尚未歸類的一些受體家族[7-8]。IgSF是人類基因組中最大的蛋白超家族，一般IgSF可分為2組：一組類似于神經細胞黏附分子（NCAM） ，另一組類似于包括細胞間黏附分子-1（ICAM1）、血管細胞黏附分子1 （VCAM1）、L1型細胞黏附分子（L1-CAM）等的細胞黏附分子。endprint

NCAM 是Edelman[9]首次在神經組織中提取的多肽，參與神經細胞間及神經與肌肉間突觸形成，使細胞之間產生分子結合，促使細胞凝集，被認為是介導細胞與細胞黏附的非依賴鈣黏附分子的代表。現已初步證明各種黏附分子的結合能在胞內啟動信號的傳遞過程。有資料表明，由NCAM介導的信號傳遞在細胞生長、分化和行為方面有重要的作用，并有可能介入了經典的傳導途徑[10]。NCAM一向被認為具有抗侵襲轉移活性[8]，而在近幾年的研究中又被認為具有促進癌細胞侵襲轉移的活性[11]，其作用機制尚有待進一步的研究。目前越來越多的研究發現NCAM與腫瘤的發生發展密切相關。夏鷹等[12]發現多聚唾液酸神經細胞黏附分子的表達與垂體腺瘤的大小、侵襲性、增殖指數密切相關。另有研究發現NCAM參與了惡性膠質瘤的形成[13]。還有一些報道表明，NCAM高表達易導致腎癌中樞神經系統和腎上腺轉移[11]。Bockman等[14]認為神經纖維的轉化生長因子（TGF）與胰腺癌細胞表面的表皮生長因子受體（EGFR）相互作用，構成神經-腫瘤之間微環境中的自分泌和（或）旁分泌環，促進腫瘤細胞的生長，減緩凋亡。介導細胞-細胞粘附的非依鈣的細胞黏附分子中，NCAM是其代表分子。它和鈣粘素（cadherin）都是以嗜同結合方式粘附靶細胞，即鈣粘素-鈣粘素，NCAM-NCAM 的方式[15] 。

我們的研究顯示，NCAM在癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁組織及良性病變組織，提示我們NCAM在乳腺癌的發生發展中可能起到了重要作用。乳腺癌組織中有神經侵襲的NCAM陽性表達率要高于無神經侵襲組，我們推測腫瘤細胞表面的NCAM可能在腫瘤神經侵襲中發揮錨定作用，此結果與孫長伏等[16]研究一致，胡振紅[17]等亦發現NCAM與涎腺腺樣囊性癌的發生發展具有一定的相關性，可能在其神經浸潤中起介導作用。本研究中ELISA檢測結果發現乳腺癌患者的NCAM血清濃度均顯著高于良性病變組及正常人群組，提示我們NCAM有望成為乳腺癌相關血清標志物之一，其具體作用機制有待進一步研究。

[參考文獻]

[1] 周木秀，任玉霞，代麗紅.神經周浸潤在乳腺癌中的意義[J].臨床與實驗病理學雜志，1999，15（6）：510-512.

[2] 肖廣發，湯恢煥.NCAM和DPC4的表達與膽管癌神經浸潤的關系[J].中國普通外科雜志，2006，15（10）：806-808.

[3] 王大東，黃志強，周寧新，等.神經細胞粘附分子在膽管癌神經浸潤轉移中的作用[J].中華實驗外科雜志，2000，17（2）：171-172.

[4] 徐斌，居小萍，胡先貴，等.細胞粘附分子與胃癌發生及轉移關系的實驗研究[J].中華胃腸外科雜志， 2001，4（4）：251-253.

[5] 金善恩，王可敬，賞金標，等.神經細胞粘附分子49例涎腺腺樣囊性癌表達及臨床意義[J].腫瘤學雜志，2010，16（4）： 285-287.

[6] Nguyen TH. Mechanisms ofmetastasis[J ].Clin Dermatol，2004， 22（3）：209-216.

[7] Thiery JP.Cell adhesion in development：a complex signaling network[J].Curr Op in Genet Dev，2003，13（4）：365-371.

[8] Reiss K，Ludwig A，Saftig P.Breaking up the tie：disintegrin-like metalloproteinases as regulators of cell migration in inflammation and invasion [J].Pharmacol Ther， 2006，111（3）：985-1006.

[9] Edelman GM.Cell adhesion molecules[J].Science，1983， 219（4584）：450-457.

[10] Boutin C，Schmitz B，Cremer H，et al.NCAM expression induces neurogenesis in vivo[J].Eur J Neurosci，2009，30（7）：1209-1218.

[11] Daniel L，Bouvier C，Chetaille B，et al.Neural cell adhesion molecule expression in renal cell carcinomas：relation to metastatic behavior[J].Hum Pathol，2003，34（6）：528-532.

[12] 夏鷹，陳煥雄，曹作為，等.多聚唾液酸神經細胞黏附分子在垂體腺瘤中的表達及其臨床意義[J].中華實驗外科雜志，2010（7）： 926-927.

[13] 祝峙，王建軍，李莉.神經細胞黏附分子對惡性膠質瘤細胞體外侵襲能力的影響[J].中華實驗外科雜志，2001，18：62-63.

[14] Bockman DE，Chler M，Beger HG，et al.Interaction of pancreatic ductal carcinoma with nerves leads to nerve damage[J].Gastroenterology，1994，197：219-230.

[15] 王學銘.鈣依粘附蛋白和神經細胞粘附分子的結構與功能[J].生命的化學，1995，15（2）：18-20.

[16] 孫長伏，王兆元，王玉新，等.涎腺腺樣囊性癌嗜神經性與神經細胞粘附分子關系的研究[J].中華口腔醫學雜志，1999，2（2）：22-23.

[17] 胡振紅，彭琪琳，傅祖紅，等.神經細胞黏附分子CD56在肺癌中的表達[J].中國醫師雜志，2004，6（9）： 1208-1209.

（收稿日期：2014-09-18）endprint

NCAM 是Edelman[9]首次在神經組織中提取的多肽，參與神經細胞間及神經與肌肉間突觸形成，使細胞之間產生分子結合，促使細胞凝集，被認為是介導細胞與細胞黏附的非依賴鈣黏附分子的代表。現已初步證明各種黏附分子的結合能在胞內啟動信號的傳遞過程。有資料表明，由NCAM介導的信號傳遞在細胞生長、分化和行為方面有重要的作用，并有可能介入了經典的傳導途徑[10]。NCAM一向被認為具有抗侵襲轉移活性[8]，而在近幾年的研究中又被認為具有促進癌細胞侵襲轉移的活性[11]，其作用機制尚有待進一步的研究。目前越來越多的研究發現NCAM與腫瘤的發生發展密切相關。夏鷹等[12]發現多聚唾液酸神經細胞黏附分子的表達與垂體腺瘤的大小、侵襲性、增殖指數密切相關。另有研究發現NCAM參與了惡性膠質瘤的形成[13]。還有一些報道表明，NCAM高表達易導致腎癌中樞神經系統和腎上腺轉移[11]。Bockman等[14]認為神經纖維的轉化生長因子（TGF）與胰腺癌細胞表面的表皮生長因子受體（EGFR）相互作用，構成神經-腫瘤之間微環境中的自分泌和（或）旁分泌環，促進腫瘤細胞的生長，減緩凋亡。介導細胞-細胞粘附的非依鈣的細胞黏附分子中，NCAM是其代表分子。它和鈣粘素（cadherin）都是以嗜同結合方式粘附靶細胞，即鈣粘素-鈣粘素，NCAM-NCAM 的方式[15] 。

我們的研究顯示，NCAM在癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁組織及良性病變組織，提示我們NCAM在乳腺癌的發生發展中可能起到了重要作用。乳腺癌組織中有神經侵襲的NCAM陽性表達率要高于無神經侵襲組，我們推測腫瘤細胞表面的NCAM可能在腫瘤神經侵襲中發揮錨定作用，此結果與孫長伏等[16]研究一致，胡振紅[17]等亦發現NCAM與涎腺腺樣囊性癌的發生發展具有一定的相關性，可能在其神經浸潤中起介導作用。本研究中ELISA檢測結果發現乳腺癌患者的NCAM血清濃度均顯著高于良性病變組及正常人群組，提示我們NCAM有望成為乳腺癌相關血清標志物之一，其具體作用機制有待進一步研究。

[參考文獻]

[1] 周木秀，任玉霞，代麗紅.神經周浸潤在乳腺癌中的意義[J].臨床與實驗病理學雜志，1999，15（6）：510-512.

[2] 肖廣發，湯恢煥.NCAM和DPC4的表達與膽管癌神經浸潤的關系[J].中國普通外科雜志，2006，15（10）：806-808.

[3] 王大東，黃志強，周寧新，等.神經細胞粘附分子在膽管癌神經浸潤轉移中的作用[J].中華實驗外科雜志，2000，17（2）：171-172.

[4] 徐斌，居小萍，胡先貴，等.細胞粘附分子與胃癌發生及轉移關系的實驗研究[J].中華胃腸外科雜志， 2001，4（4）：251-253.

[5] 金善恩，王可敬，賞金標，等.神經細胞粘附分子49例涎腺腺樣囊性癌表達及臨床意義[J].腫瘤學雜志，2010，16（4）： 285-287.

[6] Nguyen TH. Mechanisms ofmetastasis[J ].Clin Dermatol，2004， 22（3）：209-216.

[7] Thiery JP.Cell adhesion in development：a complex signaling network[J].Curr Op in Genet Dev，2003，13（4）：365-371.

[8] Reiss K，Ludwig A，Saftig P.Breaking up the tie：disintegrin-like metalloproteinases as regulators of cell migration in inflammation and invasion [J].Pharmacol Ther， 2006，111（3）：985-1006.

[9] Edelman GM.Cell adhesion molecules[J].Science，1983， 219（4584）：450-457.

[10] Boutin C，Schmitz B，Cremer H，et al.NCAM expression induces neurogenesis in vivo[J].Eur J Neurosci，2009，30（7）：1209-1218.

[11] Daniel L，Bouvier C，Chetaille B，et al.Neural cell adhesion molecule expression in renal cell carcinomas：relation to metastatic behavior[J].Hum Pathol，2003，34（6）：528-532.

[12] 夏鷹，陳煥雄，曹作為，等.多聚唾液酸神經細胞黏附分子在垂體腺瘤中的表達及其臨床意義[J].中華實驗外科雜志，2010（7）： 926-927.

[13] 祝峙，王建軍，李莉.神經細胞黏附分子對惡性膠質瘤細胞體外侵襲能力的影響[J].中華實驗外科雜志，2001，18：62-63.

[14] Bockman DE，Chler M，Beger HG，et al.Interaction of pancreatic ductal carcinoma with nerves leads to nerve damage[J].Gastroenterology，1994，197：219-230.

[15] 王學銘.鈣依粘附蛋白和神經細胞粘附分子的結構與功能[J].生命的化學，1995，15（2）：18-20.

[16] 孫長伏，王兆元，王玉新，等.涎腺腺樣囊性癌嗜神經性與神經細胞粘附分子關系的研究[J].中華口腔醫學雜志，1999，2（2）：22-23.

[17] 胡振紅，彭琪琳，傅祖紅，等.神經細胞黏附分子CD56在肺癌中的表達[J].中國醫師雜志，2004，6（9）： 1208-1209.

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NCAM 是Edelman[9]首次在神經組織中提取的多肽，參與神經細胞間及神經與肌肉間突觸形成，使細胞之間產生分子結合，促使細胞凝集，被認為是介導細胞與細胞黏附的非依賴鈣黏附分子的代表。現已初步證明各種黏附分子的結合能在胞內啟動信號的傳遞過程。有資料表明，由NCAM介導的信號傳遞在細胞生長、分化和行為方面有重要的作用，并有可能介入了經典的傳導途徑[10]。NCAM一向被認為具有抗侵襲轉移活性[8]，而在近幾年的研究中又被認為具有促進癌細胞侵襲轉移的活性[11]，其作用機制尚有待進一步的研究。目前越來越多的研究發現NCAM與腫瘤的發生發展密切相關。夏鷹等[12]發現多聚唾液酸神經細胞黏附分子的表達與垂體腺瘤的大小、侵襲性、增殖指數密切相關。另有研究發現NCAM參與了惡性膠質瘤的形成[13]。還有一些報道表明，NCAM高表達易導致腎癌中樞神經系統和腎上腺轉移[11]。Bockman等[14]認為神經纖維的轉化生長因子（TGF）與胰腺癌細胞表面的表皮生長因子受體（EGFR）相互作用，構成神經-腫瘤之間微環境中的自分泌和（或）旁分泌環，促進腫瘤細胞的生長，減緩凋亡。介導細胞-細胞粘附的非依鈣的細胞黏附分子中，NCAM是其代表分子。它和鈣粘素（cadherin）都是以嗜同結合方式粘附靶細胞，即鈣粘素-鈣粘素，NCAM-NCAM 的方式[15] 。

我們的研究顯示，NCAM在癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁組織及良性病變組織，提示我們NCAM在乳腺癌的發生發展中可能起到了重要作用。乳腺癌組織中有神經侵襲的NCAM陽性表達率要高于無神經侵襲組，我們推測腫瘤細胞表面的NCAM可能在腫瘤神經侵襲中發揮錨定作用，此結果與孫長伏等[16]研究一致，胡振紅[17]等亦發現NCAM與涎腺腺樣囊性癌的發生發展具有一定的相關性，可能在其神經浸潤中起介導作用。本研究中ELISA檢測結果發現乳腺癌患者的NCAM血清濃度均顯著高于良性病變組及正常人群組，提示我們NCAM有望成為乳腺癌相關血清標志物之一，其具體作用機制有待進一步研究。

[參考文獻]

[1] 周木秀，任玉霞，代麗紅.神經周浸潤在乳腺癌中的意義[J].臨床與實驗病理學雜志，1999，15（6）：510-512.

[2] 肖廣發，湯恢煥.NCAM和DPC4的表達與膽管癌神經浸潤的關系[J].中國普通外科雜志，2006，15（10）：806-808.

[3] 王大東，黃志強，周寧新，等.神經細胞粘附分子在膽管癌神經浸潤轉移中的作用[J].中華實驗外科雜志，2000，17（2）：171-172.

[4] 徐斌，居小萍，胡先貴，等.細胞粘附分子與胃癌發生及轉移關系的實驗研究[J].中華胃腸外科雜志， 2001，4（4）：251-253.

[5] 金善恩，王可敬，賞金標，等.神經細胞粘附分子49例涎腺腺樣囊性癌表達及臨床意義[J].腫瘤學雜志，2010，16（4）： 285-287.

[6] Nguyen TH. Mechanisms ofmetastasis[J ].Clin Dermatol，2004， 22（3）：209-216.

[7] Thiery JP.Cell adhesion in development：a complex signaling network[J].Curr Op in Genet Dev，2003，13（4）：365-371.

[8] Reiss K，Ludwig A，Saftig P.Breaking up the tie：disintegrin-like metalloproteinases as regulators of cell migration in inflammation and invasion [J].Pharmacol Ther， 2006，111（3）：985-1006.

[9] Edelman GM.Cell adhesion molecules[J].Science，1983， 219（4584）：450-457.

[10] Boutin C，Schmitz B，Cremer H，et al.NCAM expression induces neurogenesis in vivo[J].Eur J Neurosci，2009，30（7）：1209-1218.

[11] Daniel L，Bouvier C，Chetaille B，et al.Neural cell adhesion molecule expression in renal cell carcinomas：relation to metastatic behavior[J].Hum Pathol，2003，34（6）：528-532.

[12] 夏鷹，陳煥雄，曹作為，等.多聚唾液酸神經細胞黏附分子在垂體腺瘤中的表達及其臨床意義[J].中華實驗外科雜志，2010（7）： 926-927.

[13] 祝峙，王建軍，李莉.神經細胞黏附分子對惡性膠質瘤細胞體外侵襲能力的影響[J].中華實驗外科雜志，2001，18：62-63.

[14] Bockman DE，Chler M，Beger HG，et al.Interaction of pancreatic ductal carcinoma with nerves leads to nerve damage[J].Gastroenterology，1994，197：219-230.

[15] 王學銘.鈣依粘附蛋白和神經細胞粘附分子的結構與功能[J].生命的化學，1995，15（2）：18-20.

[16] 孫長伏，王兆元，王玉新，等.涎腺腺樣囊性癌嗜神經性與神經細胞粘附分子關系的研究[J].中華口腔醫學雜志，1999，2（2）：22-23.

[17] 胡振紅，彭琪琳，傅祖紅，等.神經細胞黏附分子CD56在肺癌中的表達[J].中國醫師雜志，2004，6（9）： 1208-1209.

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