小兒咳喘靈顆粒質量標準的研究

摘要：目的 在原小兒咳喘靈沖劑質量標準基礎上建立新的質量標準控制方法。方法 在麻黃鑒別的試驗方法上增加過濾；采用TLC法增加對小兒咳喘靈顆粒處方中金銀花的定性鑒別；增加板藍根有效成分氨基酸的茚三酮顯色反應；增加用HPLC法測定小兒咳喘靈顆粒處方中主要成分麻黃堿的含量。結果 定性鑒別TLC法小兒咳喘靈顆粒斑點明顯，陰性空白無干擾；茚三酮顯色反應明顯；HPLC法測定麻黃堿的含量線性范圍為0.4992μg/ml～4.992μg/ml（r=0.99996），平均回收率為98.48%，RSD =1.15%（n=5）。結論 定性定量方法專屬性強，重現性好，易于操作，可用于小兒咳喘靈顆粒的質量控制。

關鍵詞：小兒咳喘靈顆粒；質量標準；TLC；麻黃堿；HPLC

小兒咳喘靈顆粒是在張仲景《傷寒論》麻杏石甘湯基礎上采用科學的提取方法精制而成，收載于部頒標準中藥成方制劑第四冊，標準編號WS3-B-0688-91編號。該品種由麻黃、金銀花、板藍根、苦杏仁、甘草、石膏、瓜蔞七味藥材組成，具有宣肺、清熱，止咳、祛痰、平喘。用于上呼吸道感染，氣管炎、肺炎，咳嗽等[5]。

原質量標準中僅有甘草皂苷的泡沫鑒別反應和麻黃的生物堿定性鑒別，無板藍根、金銀花鑒別，也無含量的測定[1]。企業申報已有國家標準的中成藥中藥注冊9類，為提高質量標準，更有效的控制產品的質量，通過多次科學的方法試驗研究，采用TLC法增加對小兒咳喘靈顆粒處方中金銀花定性鑒別；增加板藍根有效成分氨基酸的茚三酮顯色反應。另針對處方中主藥麻黃，特增加用HPLC法測定麻黃堿的含量，該定量方法專屬性強，重現性好，易于操作，可用于小兒咳喘靈顆粒的質量控制。

1儀器與試藥

1.1儀器 高效液相色譜儀：日本島津LC-10ATvp，島津SPD-10Avp紫外檢測器，N2010色譜工作站；硅膠劑H薄層板由天津天河醫療有限公司提供。

1.2對照品 鹽酸麻黃堿對照品（批號：171241-200303）供含量測定用，由中國藥品生物制品檢定所提供；

1.3樣品 由江蘇神華藥業有限公司生產。

1.4試劑 甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2定性鑒別

2.1麻黃的鑒別 取本品10g，加水20ml使溶解，濾過，取濾液加氨試液使成堿性，再加氯仿15ml，振搖提取，分取氯仿液，置二支試管中，一管加氨制氯化銅試液與二硫化碳各5滴，振搖，靜置，氯仿層顯棕黃色；另一管為空白，以氯仿5滴代替二硫化碳5滴，振搖后氯仿層無色或顯微黃色。

2.2甘草皂苷泡沫反應的鑒別 取本品10g，加水10ml，強力振搖1min，產生持久性泡沫，10min內不消失。

2.3板藍根的鑒別 取本品0.3g，加水10ml使溶解，濾過，取濾液1ml，加茚三酮試液0.5ml，置水浴加熱數分鐘，溶液顯藍紫色。

2.4金銀花的鑒別

2.4.1對照品溶液的制備 取綠原酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。

2.4.2供試品溶液的制備 取本品粉末0.8g，加甲醇5ml，放置12h，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.4.3陰性對照溶液為甲醇溶劑。

2.4.4薄層層析 照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10～20μl、對照品溶液10μl、陰性對照溶液，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以醋酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在于對照品色譜相應的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點。

3含量測定

3.1檢測波長的選擇 選擇鹽酸麻黃堿的最大吸收波長254nm作為檢測波長。

3.2色譜條件 色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑：甲醇-水（1：1）為流動相；檢測波長為254nm；柱溫25℃。在此色譜條件下，鹽酸麻黃堿的理論板數達到3000以上，與其他化合物的峰達到基本分離。

3.3對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿對照品12.5mg，置100ml容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置25ml容量瓶中，加入高碘酸溶液（0.25→10）1ml，0.25mol/L氫氧化鈉溶液2.5ml，搖勻，放置30min，用0.5mol/L的鹽酸溶液調至pH至7，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

3.4供試品溶液的制備 取本品，研細，取約3g，精密稱定，置蒸餾瓶中，加5mol/L的氫氧化鈉溶液120ml，搖勻，加氯化鈉7.5g，超聲處理10min，蒸餾，用預先盛有0.5mol/L的鹽酸溶液5ml的100ml量瓶收集蒸餾液近95ml，加水至刻度，搖勻。精密量取10ml，置25ml容量瓶中，依據對照品溶液的制備項下的方法，自\"加入高碘酸溶液\"起，至\"加甲醇至刻度\"，依法操作，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

小兒咳喘靈顆粒HPLC圖，鹽酸麻黃堿對照品，供試品圖（略）。

3.5系統適應性試驗[2，3] 分別吸取鹽酸麻黃堿對照品溶液和供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。在此條件下，鹽酸麻黃堿峰與其他組分峰基本分離，分離度R﹥1.5；保留時間19min，理論板數以鹽酸麻黃堿峰計不低于3000。

3.6線性試驗 精密稱定鹽酸麻黃堿對照品12.48mg，置100ml容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取1ml、2ml、5ml、8ml、10ml，置100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置25ml容量瓶中，加入高碘酸溶液（0.25→10）1ml、0.25mol/L氫氧化鈉溶液2.5ml，搖勻，放置30min，用0.5mol/L的鹽酸溶液調至pH至7，加甲醇至刻度，搖勻。

分別精密量取5個不同濃度的對照品溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以進樣濃度X（μg/ml）對平均峰面積Y進行回歸處理，得到回歸方程，見表1。

3.7精密度試驗[3] 精密吸取濃度為2.496μg/ml的鹽酸麻黃堿對照溶液20μl，重復進樣5次，測得鹽酸麻黃堿峰面積積分值，見表2。

3.8穩定性試驗 取小兒咳喘靈顆粒3g，精密稱定，分別用\"供試品溶液的制備\"相同方法制得供試品溶液，精密吸取20μl，每間隔1h進一針，檢測供試品溶液中鹽酸麻黃堿的含量，連續考察5h，見表3。

3.9重復性試驗 取小兒咳喘靈顆粒3g，共5份，精密稱定，分別用\"供試品溶液的制備\"相同方法制得供試品溶液，精密吸取20μl，分別檢測供試品溶液中鹽酸麻黃堿的含量，見表4。

3.10加樣回收率試驗 供試品溶液 取重復性試驗批號樣品小兒咳喘靈顆粒3g，共5份，精密稱定，分別置于蒸餾瓶中。另精密稱取鹽酸麻黃堿對照品12.35mg，置100ml蒸餾瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得對照儲備液，精密量取2ml，置蒸餾瓶中（濃度為247.0μg/ml），用\"供試品溶液的制備\"相同方法制得供試品溶液。

精密吸取對照儲備液2ml，置100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置25ml容量瓶中，加入高碘酸溶液（0.25→10）1ml、0.25mol/L氫氧化鈉溶液2.5ml，搖勻，放置30min，用0.5mol/L的鹽酸溶液調至pH至7，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

分別吸取鹽酸麻黃堿對照品溶液和供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見表5。

加樣回收率（100%）=■×100%

結果表明：本方法加樣回收率較好。

3.11樣品測定 取本品樣品5批，精密稱取內容物，分別用\"供試品溶液的制備\"相同方法制得供試品溶液。

精密稱取鹽酸麻黃堿對照品約，按對照品溶液的制備項下的方法制得對照品溶液。精密吸取鹽酸麻黃堿對照品溶液和以上供試品溶液各20μl注入色譜儀。按外標法計算含量，見表6。

4討論

4.1對小兒咳喘靈沖劑[鑒別] 進行修訂，原質量標準中\"取本品10g，加水20ml使溶解，加氨試液使成堿性\"，修訂為\"取本品10g，加水20ml使溶解，濾過，取濾液加氨試液使成堿性…\"因處方中加入糊精，《中國藥典》2010年版二部對糊精性狀的描述為\"本品在沸水中易溶\"，進行[鑒別]試驗時，因冷水中未溶解的糊精對試驗產生干擾，故做上述修訂。

4.2增加板藍根有效成分氨基酸的茚三酮顯色反應[4]；采用TLC法增加對小兒咳喘靈顆粒處方中金銀花進行定性鑒別；依據《中國藥典》2010年版一部收載金銀花的定性鑒別，經過多次試驗證明，該定性鑒別靈敏度高，專屬性強。

4.3現執行部頒標準中無含量測定，無法對處方中規定應有的有效成分進行控制，現因該品種由麻黃、金銀花、板藍根、苦杏仁、甘草、石膏、瓜蔞七味藥材組成.處方中麻黃為主藥，其功能主治為發汗散寒，利水消腫。特增加用HPLC法測定小兒咳喘靈顆粒處方中主藥麻黃的主要成分麻黃堿的含量，該定量方法專屬性強，易于操作，可用于小兒咳喘靈顆粒的質量控制。

參考文獻：

[1]中國藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010版一部）[M].北京：化學工業出版社，2005：224.

[2]熊慧林，鄭茂鑫.HPLC法測定咳喘膠囊中麻黃堿的含量[J].中國藥事，2006，20（12）：749-750.

[3]金鳳珠.清熱止咳糖漿中鹽酸麻黃堿含量的測定[J].時珍國醫國藥，2000，11（12）：1070.

[4]衛生部標準[S].中藥成方制劑第四冊，標準編號WS3-B-0688-91.

[5]藥用植物學與生藥學[S].第四版，2003：229-232.編輯/申磊