核轉(zhuǎn)錄因子-κB和腫瘤壞死因子-α在動脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血患者血清中的表達

梁漢才，楊福義

（1.黑龍江省牡丹江市第二人民醫(yī)院神經(jīng)外科，黑龍江 牡丹江 157000；2.黑龍江省佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007）

核轉(zhuǎn)錄因子-κB和腫瘤壞死因子-α在動脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血患者血清中的表達

梁漢才1，楊福義2

（1.黑龍江省牡丹江市第二人民醫(yī)院神經(jīng)外科，黑龍江 牡丹江 157000；2.黑龍江省佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007）

目的探討核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）與動脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血（aSAH）后腦血管痙攣（CVS）之間的關系。方法選取aSAH患者42例的血液NF-κB、TNF-α分別進行動態(tài)檢測，并采用經(jīng)顱多普勒超聲（TCD）檢測大腦中動脈血流速度（VMCA）。結(jié)果aSAH患者血液NF-κB在發(fā)病后1～3天、7～9天各均值明顯高于對照組，TNF～α在發(fā)病后l～3天、7～9天各均值明顯高于對照組。結(jié)論aSAH患者NP-κB、TNF-α含量變化與CVS呈正相關。

aSAH；腦血管痙攣；NF-κB；TNF-α；經(jīng)顱多普勒

CVS是aSAH后最嚴重的并發(fā)癥之一，是aSAH病人致殘、致死的主要原因［1］。aSAH后CVS的發(fā)生機制目前尚不十分清楚，但炎癥反應在其中起了重要作用［2］。研究表明，TNF-α等細胞因子在其中起了重要作用，而NF-κB是TNF-α等諸多細胞因子的啟動子。因此，通過對aSAH病人血液NF-κB、TNF-α的動態(tài)檢測，探討其作為判斷病情、觀察療效、指導臨床治療的有效指標的可行性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集了近期本院aSAH患者42例作為研究對象，其中男20例，女22例；年齡32～74歲，平均年齡（56.4 14.2）歲；所有患者入院后第3、7、9、14天分別進行TCD檢測，將任何一次大腦中動脈的平均流速（VMCA）＞120 cm/s視為CVS。根據(jù)TCD檢測結(jié)果將患者分為：無CVS組13例，CVS組29例。再將CVS組繼續(xù)分為：輕度CVS組（VMCA 120～140 cm/s）11例，中度CVS組（VMCA 140～200 cm/s）12例，重度CVS組（VMCA＞200 cm/s）6例。選擇同期健康體檢者40名作為對照組，其中男19名、女21名；年齡22～70歲，平均年齡（54.9 10.1）歲。對照組和患者組的平均年齡及性別，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

所有病例均在發(fā)病后1～3天、7～9天、13～15天清晨同一時間段分別采取外周靜脈血5m l/人次，肝素抗凝，在4℃條件下離心10 min，分離血漿，提取外周血單核細胞，涂片并同定，置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。一抗選用兔抗NF-κB p65亞單位的多克隆抗體，用SABC試劑盒（武漢博士德公司提供）進行操作，白細胞NF-κB活性測定用HPLAS-1000彩色病理圖像分析系統(tǒng)測定，其活性用吸光度A值表示。另外在相同時段空腹采集靜脈血5 mL，ELISA法進行檢測（試劑盒由武漢博士德公司提供）TNF-α水平。對照組采血后檢測方法同上。

1.3 統(tǒng)計學處理

使用SPSS 13.0對各項資料進行統(tǒng)計、分析，計量資料以“±s”表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用x2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同患者血清中NF-κB（A值）含量比較

患者組（無論有無腦血管痙攣）血清中NF-κB含量均有升高，與對照組比較（1～3天和7～9天），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。CVS組與無CVS組比較差異只在SAH早期1～3天，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），之后7～9天和13～15天，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 不同患者血清中NF-κB（A值）含量比較（±s）

表1 不同患者血清中NF-κB（A值）含量比較（±s）

注：與對照組比較：*P＜0.05，#P＜0.05；與無CVS組同一時間點比較：#P＜0.05

對照組 40 0.077f 0.030 0.108f 0.023 0.071f 0.015無CVS組 13 0.251f 0.057* 0.128f 0.032* 0.083f 0.029 CVS組 29 0.377f 0.095*#0.147f 0.043* 0.095f 0.017

2.2 不同患者血清中TNF-α含量比較

患者組（無論有無腦血管痙攣）血中TNF-α含

量均有升高，但在第7～9天含量最高，CVS組患者TNF-α含量升高更明顯，各組之間TNF-α含量比較。差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.02）。見表2。

表2 不同患者血清中TNF-α含量比較（pg/ml）

2.3 不同血管痙攣程度患者血清中NF-κB含量比較

各CVS組患者血中NF-κB含量均有升高，并且痙攣程度越重NF-κB升高越明顯，各CVS組之間NF-κB升高程度存在差異，這種差異只在SAH早期（1～3天）有顯著性（P＜0.05），之后差異無顯著性。見表3。

表3 不同血管痙攣程度患者血清中NF-κB（A值）含量比較（±s）

表3 不同血管痙攣程度患者血清中NF-κB（A值）含量比較（±s）

注：同一時間點，與輕度CVS組比較：*P＜0.05，#P＜0.05，與中度CVS組比較：#P＜0.05

?

2.4 不同血管痙攣程度患者血清中TNF-α含量比較

各CVS組患者血清中TNF-α含量均有升高，7～9天最高，并且痙攣程度越重TNF-α升高越明顯，各CVS組之間不同時間點TNF-α含量比較差異均有顯著性（P＜0.05。見表4。

表4 不同血管痙攣程度患者血清中TNF-α含量比較（pg /mL）

3 討論

aSAH后CVS發(fā)生的原因和機理至今尚未完全闡明，但總體認為炎癥反應在CVS的發(fā)生中起重要作用。TNF-α是主要的致炎因子，TNF-α等參與了CVS的發(fā)生，并與CVS密切相關。在本實驗中CVS患者的TNF-α含量明顯高于無CVS的患者，說明TNF-α異常升高可能與aSAH后血管的炎癥反應及CVS關系密切。NF-κB是具有多向性調(diào)節(jié)作用的一類蛋白質(zhì)因子，通過調(diào)控多種基因的表達，發(fā)揮NF-κB對不同靶基因的調(diào)控作用［3］。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，在aSAH患者不同時間段血液中NF-κB的濃度均相應的升高，但在SAH早期（1～3天）升高更為明顯，之后7～9天維持在一個較高水平，隨后逐漸恢復。而CVS主要發(fā)生在SAH后7～9天。NF-κB的高表達發(fā)生在SAH的早期，與CVS的發(fā)生有時段上的先后性。提示CVS的發(fā)生可能是受NF-κB啟動誘發(fā)的。

本實驗研究發(fā)現(xiàn)CVS組與無CVS組不同時間段NF-κB的表達只在CVS的早期差異有統(tǒng)計學意義，之后差異無統(tǒng)計學意義，這同樣說明NF-κB只在CVS的早期發(fā)生作用。中、重度痙攣患者NF-κB，TNF-α表達較輕度患者明顯升高，說明NF-κB，TNF-α表達程度與腦血管痙攣程度相一致，并且NF-κB的高表達與TNF-α的高表達是相一致的。同樣提示了早期NF-κB的高表達誘發(fā)了隨后TNF-α的高表達，二者在表達強度上有一定的相關性，早期NF-κB的高表達導致TNF-α的高表達，進而引發(fā)CVS的發(fā)生。NF-κB的高表達與TNF-α的高表達有時段上的先后性，NF-κB的高表達發(fā)生在SAH的早期、CVS的前期，TNF-α的高表達發(fā)生在CVS期，恰恰與CVS的發(fā)生相一致。提示CVS的發(fā)生可能是受NF-κB啟動誘發(fā)，而由TNF-α等炎癥因子作用表達的。NF-κB的高表達提示病情較重，預示有CVS的發(fā)生；TNF-α的高表達表示病情較重，有CVS的發(fā)生。

［1］ Treggiari MM，Walder B，Suter PM，et al.Systematic review of the prevention of delayed ischemic neurological deficits with hypertension［J］.Neurosurg，2003，98：978-984.

［2］張 健，王 中，周 岱，等. NF-κB、ICAM-1在實驗性SAH后基底動脈壁上的表達變化［J］.中風與神經(jīng)疾病雜志，2009，26（6）：684-688.

［3］冀 勇，王志剛，丁 璇，等.兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后NF-κB在基底動脈的表達［J］.中華神經(jīng)外科雜志，2007，23（10）：780-782.

本文編輯：徐 陌

R730.5

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ISSN.2095-6681.2015.33.049.02