參附注射液對小鼠抗缺氧抗疲勞作用的實驗研究*

陳立藝 李玉新 黃倍源 吳俊霖 曾星華 盧慧玲陳 健

（桂林醫學院，廣西 桂林 541000）

·研究報告·

參附注射液對小鼠抗缺氧抗疲勞作用的實驗研究*

陳立藝 李玉新 黃倍源 吳俊霖 曾星華 盧慧玲△陳 健

（桂林醫學院，廣西 桂林 541000）

目的研究參附注射液抗缺氧抗疲勞的作用機制。方法選用單一雄性健康昆明種小鼠60只，體質量（22±2）g，隨機分成6組，每組10只，分別注射等量的高劑量參附注射液0.2 mg/kg、低劑量參附注射液（原液稀釋一半）0.2 mg/kg以及0.9%氯化鈉注射液0.2 mg/kg。1周后，測量缺氧狀態下以及疲勞狀態下小鼠生存的時間，同時取肝組織測定組織中的MDA（丙二醛）、SOD（超氧化物歧化酶）含量。結果耐缺氧和負重游泳狀態下，參附注射液高劑量組比生理鹽水組存活時間長（P＜0.05）；負重游泳狀態下，SOD含量高劑量組比生理鹽水組顯著增高（P＜0.01）。結論參附注射液具有抗缺氧抗疲勞的作用。

參附注射液 抗缺氧 抗疲勞

參附注射液含人參皂苷、烏頭生物堿等生物活性成分，應用于冠心病及心力衰竭治療以及心血管疾病。人參在參附注射液中起重要的作用［1］，常用于肢冷脈微、體虛欲脫、崩漏下血和氣不攝血，以及心力衰竭和心源性休克等，為扶正補虛第一要藥。附子屬于溫里藥，用于胃寒、肢冷、脈微欲絕之虛脫，有“回陽救逆第一品藥”之稱，配伍紅參有較強的回陽救逆、益氣固脫之功效，主要用于陽氣暴脫的厥脫證［2］?，F代藥理學研究表明參附注射液藥效強，能顯著對抗丙二醛（MDA）活性的增高以及超氧化物歧化酶（SOD）的降低［3］。在近年小鼠抗缺氧抗疲勞試驗研究中，發現紅景天納米粉比普通粉在使用量和作用強度上具有明顯優勢［4］，西藏人參果能顯著提高小鼠抗疲勞抗缺氧能力［5］。本研究深入探討參附注射液與小鼠抗缺氧抗疲勞之間的關系。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級單一雄性昆明種小鼠60只（來自桂林醫學院動物中心），體質量（22±2）g，每天12 h日光、12 h黑暗，控制室溫在23～26℃，相對濕度49%～51%，自由飲水，基礎飼料喂養。

1.2 藥物與試劑 參附注射液（規格10 mL/支，批號Z20043117，雅安三九藥業有限公司），超氧化物歧化酶 （SOD）試劑盒 （艾美捷科技有限公司）和丙二醛（MDA）試劑盒（上海酶聯生物科技有限公司）。

1.3 分組與給藥 選用單一雄性昆明種小鼠60只，游泳負重實驗和常壓耐缺氧實驗各設生理鹽水組、參附低劑量組、參附高劑量組，共6組，每組10只。參附低劑量組腹腔注射稀釋1倍的參附注射液原液0.2 mg/kg、參附高劑量組腹腔注射參附注射液原液0.2 mg/kg，生理鹽水組每天腹腔注射0.9%氯化鈉注射液0.2 mg/kg，每日1次，連續7 d，基礎飼料自由攝食，2 d換水1次。

1.4 游泳負重試驗 每組小鼠于末次腹腔注射前禁食12 h，在末次給藥1 h后將小鼠放入游泳箱內做力竭游泳試驗。小鼠尾部負重為體質量5%的鐵絲，放入自制玻璃游泳缸游泳，水深約為35 cm，水溫25℃，計取游泳開始到小鼠游泳疲勞而沉入水中8 s不能浮起為止的時間為游泳時間。處死后并立即取出肝臟，制作肝臟勻漿，離心機分離取上清備用。

1.5 常壓耐缺氧試驗 每組小鼠于末次腹腔注射前禁食12 h，在末次給藥1 h后將小鼠放進250 mL的密封性好的磨口玻璃瓶內，將用紗布包好的15 g鈉石灰裝入瓶內，將小鼠放入瓶內后立即用凡士林密封蓋緊，當小鼠開始出現全身性痙攣癥狀時，立即開啟瓶蓋，將動物取出。記錄從密封至小鼠發生全身性痙攣的時間為耐缺氧時間。處死后并立即取出肝臟，制作肝臟勻漿，離心機分離取上清備用。

1.6 標本檢測 1）MDA檢測方法。依照MDA試劑盒，取小鼠肝臟勻漿上清夜2 mL（對照組取2 mL蒸餾水），再加2 mL 0.6%TBA（2-硫代巴比妥酸）混勻，在試管上加棉塞，置沸水中加熱15 min，迅速拿出水浴鍋冷卻，以4000 r/min離心15 min，于波長450 nm下測定OD值，并計算MDA值。2）SOD檢測方法。依照SOD試劑盒，取1.5 mL緩沖液，在25℃水浴中保溫15 min，加入3 mL小鼠肝臟勻漿上清夜，加入10 μL連苯三酚液，迅速搖勻（對照組取2 mL蒸餾水），計算加酶后連苯三酚自氧化速率，并計算SOD值。

1.7 統計學處理 采用SPSS12.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，采用t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組小鼠抗缺氧作用時間、SOD、MDA水平比較見表1。結果示耐缺氧狀態下，參附注射液高劑量組比生理鹽水組存活時間長（P＜0.05）。SOD和MDA測定未見統計學差異。

表1 各組小鼠常壓耐缺氧實驗結果比較（±s）

表1 各組小鼠常壓耐缺氧實驗結果比較（±s）

與生理鹽水組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別 n M D A含量（n m o l / m L）耐缺氧時間（s）S O D含量（U / m g）生理鹽水組 1 0 6 . 2 9 ± 2 . 4 3參附低劑量組1 0 5 . 6 3 ± 1 . 1 3 9 8 6 . 7 5 ± 1 1 3 . 5 5 2 5 7 . 5 0 ± 1 2 . 2 4 1 0 9 5 . 2 5 ± 9 4 . 3 2 2 6 2 . 2 0 ± 5 . 4 7參附高劑量組1 0 4 . 9 6 ± 0 . 7 2 1 1 7 6 . 6 2 ± 1 4 3 . 5 6△2 6 6 . 6 3 ± 7 . 0 7

2.2 各組小鼠抗疲勞作用的時間、SOD、MDA水平比較 見表2。負重游泳狀態下，參附注射液高劑量組比生理鹽水組存活時間長（P＜0.05），低劑量組比生理鹽水組存活時間長（P＜0.05），測定SOD含量低濃度組比生理鹽水組高（P＜0.05），高劑量組比生理鹽水組顯著增高（P＜0.01）。MDA測定未見統計學差異。

表2 各組小鼠游泳負重結果比較（±s）

表2 各組小鼠游泳負重結果比較（±s）

組別 n M D A含量（n m o l / m L）抗疲勞時間（s）S O D含量（U / m g）生理鹽水組 1 0 5 . 7 8 ± 1 . 6 1參附低劑量組1 0 5 . 4 4 ± 0 . 7 7 4 3 3 . 1 3 ± 1 6 8 . 1 5 2 1 4 . 5 0 ± 1 2 . 0 6 5 1 8 . 3 8 ± 2 5 5 . 4 0△2 5 5 . 4 2 ± 3 8 . 2 9△參附高劑量組1 0 5 . 1 2 ± 0 . 6 0 6 4 5 . 0 0 ± 1 8 1 . 9 1△2 4 7 . 0 8 ± 2 5 . 7 3△△

3 討 論

抗缺氧、抗疲勞的存活時間是機體生理活力的綜合反映，可以表征機體組織、臟器的健康狀況和疲勞程度。由表1及表2時間部分可以看出，參附注射液可有效提高小鼠的抗缺氧抗疲勞能力。參附注射液能改善小鼠體內血流動力學，穩定血壓，增加心肌收縮力，擴張冠脈［6-7］，有效保護大腦、心臟、肝、肺等重要器官，具有較好的抗缺氧、抗疲勞的作用。之前的臨床實驗表明參附注射液能夠調節血壓，維持血壓正常水平［8-9］，參附注射液促進機體產生冠脈舒血管活性物質，增加冠脈血流量，減少冠脈阻力。參附注射液組成中烏頭堿在保護心肌細胞、心率、心律、血壓等方面有積極的作用［10］，其代謝中間產物去烏頭堿能增強心肌收縮力、改善心肌循環及緩解急性心肌缺血損傷，其顯著功能在于變力性和變時性，同時降低主動脈壓［11-12］。參附注射液抗缺氧疲勞的能力可能與上述因素有關，也可能與應急狀態下機體產生SOD，增加抗氧化作用減輕自由基損傷的機制有關。

小鼠注射參附注射液后，測量肝組織中SOD含量，表明參附注射液能提高機體SOD含量，清除體內氧自由基，尤其是重要器官，如大腦、心臟、肝等的自由基，有效保護臟器。小鼠在抗缺氧和抗疲勞環境下，劇烈運動，乳酸堆積，肌肉pH值下降，氧自由基增多，損害機體組織，從而產生疲勞。參附注射液介導的SOD水平提高有助于減少缺血再灌注后產生的氧自由基，減輕腎臟缺血再灌注引起的氧化應激，減輕器官的損傷。參附注射液可以顯著提高SOD的活性，使得體內氧自由基減少，減少了氧自由基引發的脂質過氧化損傷［13］。

MDA是脂質過氧化反應的穩定代謝物，測定MDA含量可反映腎組織中自由基的含量及其引發的脂質過氧化反應程度，間接反映細胞受自由基氧化損傷的程度。有資料表明SFI可減輕缺血再灌注對腎臟組織的脂質過氧化損傷［14］，降低MDA水平［15］。黃瓊等［16］發現SFI處理可提高心肌組織ATP含量和SOD活性，減少MDA生成，保護缺血再灌注后的大鼠心臟。本次實驗小鼠耐缺氧抗疲勞實驗數據未獲得統計學差異，可能和實驗動物數量不足有關。

參附注射液作為一種中藥制劑，具有臨床應用劑量安全范圍寬、毒副作用小的優良特性，具有廣闊的應用前景。參附注射液含人參皂苷、烏頭生物堿等生物活性成分，能夠增強體力、防止衰老和增加活力，具有較好的抗缺氧、抗疲勞作用，其藥理特性被廣泛應用于臨床治療，尤其是心臟病的治療，有效提高患者預后質量。

［1］ Niu CQ，Zhang TX，Xu HQ，et al.Research of vasodilation effect of aconite decoction on the rabbit aorta in vitro［J］.Zhong Yao Yao Li Yu Lin Chuang，2004，20（4）：23-25.

［2］ 卓道勤，呂國焰，閔磊，等.參附注射液對感染性休克早期血流動力學紊亂干預性研究［J］.中國中醫急癥，2011，20（12）：2005.

［3］ Liu Z，Xie GQ，Tang SF，et al.The Therapeutic Tactics on Hemodialysis-induced Hypotension［J］.Journal of New Chinese Medicine，2001，10（13）：1211-1212.

［4］ Li QB，Liu X.Shenfu injection in the clinical application of the rescue of severe hemorrhagic shock［J］.Journal of Guangdong Medical College，1999，17（2）：73-74.

［5］ Zhao D，Wang J，Cui Y，et al.Pharmacological effects of Chinese herb aconite（fuzi）on cardiovascular system［J］.J Tradit Chin Med，2012，32（3）：308-313.

［6］ 江承平，劉福，李毅，等.參附注射液對腦缺血再灌注大鼠MDA、SOD、TXB2及6-keto-P GF1α的影響及意義［J］.中國醫科大學學報，2012，41（2）：124-127.

［7］ 李勤，李秉芝，劉宏.參附注射液的藥理作用及臨床應用［J］.醫學綜述，2008，14（8）：1247-1250.

［8］ 李毅，王穎，李玨，等.參附注射液對缺血再灌注損傷腎臟組織的保護作用［J］.四川大學學報：醫學版，2011，42（1）：41-43.

［9］ 朱玲，周黎明，王正榮.參附注射液的作用及作用機制的研究進展［J］.四川生理科學雜志，2004，26（2）：77-82.

［10］黃瓊，張新風.參附注射液治療心血管疾病的研究進展［J］.時珍國醫國藥，2011，22（12）：3050-3052.

［11］Wang J，Qiao LF，Yang GT.Role of Shenfu injection in rats with systemic in ammatory response syndrome［J］.Chinese Journal of Integrative Medicine，2008，14（1）：51-55.

［12］Zheng SD，Wu HJ，Yu SP，et al.Shenfu Injection suppresses inflammation by targeting haptoglobin and pentraxin 3 in rats with chronic ischemic heart failure［J］.Chin J Integr Med，2015，21（1）：22-28.

［13］Jaworek J，Konturek SJ，Leja-Szpak A，et al.Role of endogenous melatonin and its MT receptor in the modulation of caerulein-induced pancreatitis in the rat［J］.Journal of Physiology and Pharmacology，2002，53（4）：791-804.

［14］李毅，王穎，李玨，等.參附注射液對缺血再灌注損傷腎臟組織的保護作用［J］.四川大學學報：醫學版，2011，42（1）：41-43.

［15］朱玲，周黎明，王正榮.參附注射液的作用及作用機制的研究進展［J］.四川生理科學雜志，2004，26（2）：77-82.

［16］黃瓊，張新風.參附注射液治療心血管疾病的研究進展［J］.時珍國醫國藥，2011，22（12）：3050-3052.

Experimental Study on Anti-hypoxic and Anti-fatigue Effect of Shenfu Injection on Mice

CHEN liyi，LI Yuxin，HUANG Beiyuan，et al. Guilin Medical University，Guangxi，Guilin 541004，China

Objective：To study the anti-hypoxic and anti-fatigue effect of Shenfu injection.Methods：60 single healthy male Kunming mice，weighing（22±2）g，were chosen，randomly divided into 6 groups，10 in each group，respectively injected with the same amount of the reagent.The high concentration of the group was attached to the injection of 0.2 mg/kg，while the low concentration（the half of concentrate）was 0.2 mg/kg and normal saline 0.2 mg/kg.A week later，the survival time of mice was measured under the state of hypoxia and fatigue.At the same time，the content of MDA（malondialdehyde）and SOD（superoxide dismutase）in liver tissues were measured，too.Results：The survival time of mice injected with high concentration of shenfu injection was longer than that of mice injected with physiological saline under the condition of anti-hypoxia and loaded-swimming（P＜0.05）.Content of SOD in high concentration of shenfu injection was significantly more than that of physiological saline group（P＜0.01）.Conclusion：Shenfu injection has an anti-hypoxic and anti-fatigue effect.

Shenfu injection；Anti-hypoxic；Anti-fatigue

R285.5

A

1004-745X（2015）06-0960-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.06.008

2015-02-18）

廣西教育科學“十二五”規劃課題（2013C047）

△通信作者（電子郵箱：626382529@qq.com）