樟子松松針石蠟切片制備

王健+林清鵬

摘 要：以樟子松松針為材料，結合松針的結構特點，對石蠟切片制作條件進行摸索。在FAA固定劑配比中采用70%乙醇；粘片時材料置于40℃水浴鍋中展開，用防脫載玻片撈取，置35℃烘箱24h；松針切8um厚度，染色條件為伊紅5min，蘇木精1min條件下，獲得的切片效果較好。

關鍵詞：樟子松；松針；石蠟切片

樟子松又名海拉爾松，是我國三北地區主要優良造林樹種之一。樟子松葉兩針一束，稀有三針。石蠟切片技術是觀察研究動植物形態發育和內部構造的重要技術，但對于不同植物組織制片需要不同的具體條件，切片的質量不僅和材料自身的特性以及實驗操作的室溫相關，還和固定、脫水、透明、浸蠟、染色等每一步驟的規范操作和時間控制相關，因而需要根據植物的組織結構特點摸索適用的制片方法。本實驗在傳統植物石蠟切片技術的基礎上，結合樟子松松針結構特點，對固定、脫水、粘片、染色等環節進行了摸索，以便更好地觀察松針的微觀形態。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料采自春季凈月潭公園樟子松林，選取新鮮、幼嫩松針進行石蠟制片。

1.2 試劑配制

FAA固定劑：70%乙醇：冰醋酸：37%甲醛=90： 5： 5

乙醇質量分數梯度溶液：70%、80%、85%、90%、95%、100%

伊紅染液：稱取1g伊紅溶于100ml蒸餾水中，加入1～2%冰醋酸10滴。

其他試劑常規配制。

1.3 實驗方法

依據傳統的石蠟切片流程：固定、脫水、透明、浸蠟、包埋及修蠟、切片、粘片、脫蠟及染色、封片，著重在脫水、透明、透蠟、包埋、染色等步驟根據樟子松松針的結構特點進行摸索改進。選取染色效果優良、完整的切片在OlympusDPController數碼顯微系統下進行顯微觀察并拍照。

2 結果與分析

2.1 不同固定、包埋時間對切片的影響

單一固定劑使用時乙醇會使原生質收縮，甲醛的滲透力較慢，冰醋酸使組織發脹，混合固定劑FAA使用方便，效果較好，應用也最廣。松針質地較堅硬，FAA固定液配制中使用70%乙醇，滲透力最好，同時具備一定的脫水效果。實驗中曾采用過1h、1.5h、2h固定時間，1h、1.5h都會在切片階段發生較嚴重的碎片現象，2h切片效果好。（圖A1、A2）

由于實驗時間在春夏之交，溫度有較為明顯的變化，加上材料質地較硬，故選擇熔點較高的蠟包埋。包埋后將蠟塊置于4℃冰箱中充分凝固。切片操作分別在蠟塊凝固3d、5d、7d進行，放置3d、5d的蠟塊在切片過程中均出現較為嚴重的材料與石蠟的分離情況，放置7d的蠟塊較少出現上述情況，說明凝固效果比較好，也使浸蠟更為充分。（圖B1、B2）

2.2 不同切片厚度對切片效果的影響

在其他實驗條件不變的情況下，曾選擇5um、8um、10um厚度進行切片，5um切片容易出現不完整現象，8um、10um切片效果未有明顯差異。實驗中發現，切片的質量除了與前面的固定、脫水等步驟相關外，切片刀是決定因素，刀片必須鋒利，否則在切片時蠟片會自行卷起或皺起，或會使組織出現傷痕，甚至使切片破碎、不完整。（圖C1、C2）

A1 固定2h，凝固3d；A2 固定2h，凝固7d；

B1 固定2h，厚度5um；B2 固定2h，厚度8um；

C1 固定1h，染色4min；C2 固定2h，染色4min

3 討論

本實驗結合材料特點對傳統石蠟切片方法進行條件摸索，除上述提及的固定、浸蠟、包埋及切片外，脫水、粘片、染色等環節如果處理不當也會影響切片效果。為使材料不致收縮，實驗設計了適合松針的乙醇梯度，同時松針在無水乙醇中的浸泡時間略長，保證脫水徹底。本實驗由于所切取的材料小，又輕又薄，故粘片時只需將其置于39℃水浴鍋中，讓其充分展開，再用防脫載玻片撈取，擺正位置，吸去多余水分， 置35℃烘箱24h即可。該方法操作簡便，在后續步驟中很少出現脫片現象。實驗中首先選取少數材料染色以摸索適合的染色時間，伊紅染色時間依次按3min、4min、5min進行實驗探索，最終確定伊紅中浸泡5min，蘇木精中浸泡1min為宜。石蠟切片是組織學常規制片技術中最為廣泛應用的方法，本實驗在借鑒傳統植物石蠟切片技術基礎上摸索了一套適合樟子松松針石蠟切片的制作條件和方法。切片的質量不僅和材料自身的特性以及實驗操作的室溫相關，還和每一步驟的規范操作與控制相關，所以還需要在不斷摸索和探討中加以完善。

參考文獻：

[1] 楊捷頻.常規石蠟切片方法的改良[J].生物學雜志，2006，23（1）：0045-0046.

[2] 朱莉艷.石蠟切片龜裂的原因分析[J].浙江中西醫結合雜志，2008，18（10）：634-635.

[3] 帥煥麗，楊途熙，魏安智，等.杏花芽石蠟切片方法的改良 [J] .果樹學報.2011，28（3）：536-539.

摘 要：以樟子松松針為材料，結合松針的結構特點，對石蠟切片制作條件進行摸索。在FAA固定劑配比中采用70%乙醇；粘片時材料置于40℃水浴鍋中展開，用防脫載玻片撈取，置35℃烘箱24h；松針切8um厚度，染色條件為伊紅5min，蘇木精1min條件下，獲得的切片效果較好。

關鍵詞：樟子松；松針；石蠟切片

樟子松又名海拉爾松，是我國三北地區主要優良造林樹種之一。樟子松葉兩針一束，稀有三針。石蠟切片技術是觀察研究動植物形態發育和內部構造的重要技術，但對于不同植物組織制片需要不同的具體條件，切片的質量不僅和材料自身的特性以及實驗操作的室溫相關，還和固定、脫水、透明、浸蠟、染色等每一步驟的規范操作和時間控制相關，因而需要根據植物的組織結構特點摸索適用的制片方法。本實驗在傳統植物石蠟切片技術的基礎上，結合樟子松松針結構特點，對固定、脫水、粘片、染色等環節進行了摸索，以便更好地觀察松針的微觀形態。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料采自春季凈月潭公園樟子松林，選取新鮮、幼嫩松針進行石蠟制片。

1.2 試劑配制

FAA固定劑：70%乙醇：冰醋酸：37%甲醛=90： 5： 5

乙醇質量分數梯度溶液：70%、80%、85%、90%、95%、100%

伊紅染液：稱取1g伊紅溶于100ml蒸餾水中，加入1～2%冰醋酸10滴。

其他試劑常規配制。

1.3 實驗方法

依據傳統的石蠟切片流程：固定、脫水、透明、浸蠟、包埋及修蠟、切片、粘片、脫蠟及染色、封片，著重在脫水、透明、透蠟、包埋、染色等步驟根據樟子松松針的結構特點進行摸索改進。選取染色效果優良、完整的切片在OlympusDPController數碼顯微系統下進行顯微觀察并拍照。

2 結果與分析

2.1 不同固定、包埋時間對切片的影響

單一固定劑使用時乙醇會使原生質收縮，甲醛的滲透力較慢，冰醋酸使組織發脹，混合固定劑FAA使用方便，效果較好，應用也最廣。松針質地較堅硬，FAA固定液配制中使用70%乙醇，滲透力最好，同時具備一定的脫水效果。實驗中曾采用過1h、1.5h、2h固定時間，1h、1.5h都會在切片階段發生較嚴重的碎片現象，2h切片效果好。（圖A1、A2）

由于實驗時間在春夏之交，溫度有較為明顯的變化，加上材料質地較硬，故選擇熔點較高的蠟包埋。包埋后將蠟塊置于4℃冰箱中充分凝固。切片操作分別在蠟塊凝固3d、5d、7d進行，放置3d、5d的蠟塊在切片過程中均出現較為嚴重的材料與石蠟的分離情況，放置7d的蠟塊較少出現上述情況，說明凝固效果比較好，也使浸蠟更為充分。（圖B1、B2）

2.2 不同切片厚度對切片效果的影響

在其他實驗條件不變的情況下，曾選擇5um、8um、10um厚度進行切片，5um切片容易出現不完整現象，8um、10um切片效果未有明顯差異。實驗中發現，切片的質量除了與前面的固定、脫水等步驟相關外，切片刀是決定因素，刀片必須鋒利，否則在切片時蠟片會自行卷起或皺起，或會使組織出現傷痕，甚至使切片破碎、不完整。（圖C1、C2）

A1 固定2h，凝固3d；A2 固定2h，凝固7d；

B1 固定2h，厚度5um；B2 固定2h，厚度8um；

C1 固定1h，染色4min；C2 固定2h，染色4min

3 討論

本實驗結合材料特點對傳統石蠟切片方法進行條件摸索，除上述提及的固定、浸蠟、包埋及切片外，脫水、粘片、染色等環節如果處理不當也會影響切片效果。為使材料不致收縮，實驗設計了適合松針的乙醇梯度，同時松針在無水乙醇中的浸泡時間略長，保證脫水徹底。本實驗由于所切取的材料小，又輕又薄，故粘片時只需將其置于39℃水浴鍋中，讓其充分展開，再用防脫載玻片撈取，擺正位置，吸去多余水分， 置35℃烘箱24h即可。該方法操作簡便，在后續步驟中很少出現脫片現象。實驗中首先選取少數材料染色以摸索適合的染色時間，伊紅染色時間依次按3min、4min、5min進行實驗探索，最終確定伊紅中浸泡5min，蘇木精中浸泡1min為宜。石蠟切片是組織學常規制片技術中最為廣泛應用的方法，本實驗在借鑒傳統植物石蠟切片技術基礎上摸索了一套適合樟子松松針石蠟切片的制作條件和方法。切片的質量不僅和材料自身的特性以及實驗操作的室溫相關，還和每一步驟的規范操作與控制相關，所以還需要在不斷摸索和探討中加以完善。

參考文獻：

[1] 楊捷頻.常規石蠟切片方法的改良[J].生物學雜志，2006，23（1）：0045-0046.

[2] 朱莉艷.石蠟切片龜裂的原因分析[J].浙江中西醫結合雜志，2008，18（10）：634-635.

[3] 帥煥麗，楊途熙，魏安智，等.杏花芽石蠟切片方法的改良 [J] .果樹學報.2011，28（3）：536-539.

摘 要：以樟子松松針為材料，結合松針的結構特點，對石蠟切片制作條件進行摸索。在FAA固定劑配比中采用70%乙醇；粘片時材料置于40℃水浴鍋中展開，用防脫載玻片撈取，置35℃烘箱24h；松針切8um厚度，染色條件為伊紅5min，蘇木精1min條件下，獲得的切片效果較好。

關鍵詞：樟子松；松針；石蠟切片

樟子松又名海拉爾松，是我國三北地區主要優良造林樹種之一。樟子松葉兩針一束，稀有三針。石蠟切片技術是觀察研究動植物形態發育和內部構造的重要技術，但對于不同植物組織制片需要不同的具體條件，切片的質量不僅和材料自身的特性以及實驗操作的室溫相關，還和固定、脫水、透明、浸蠟、染色等每一步驟的規范操作和時間控制相關，因而需要根據植物的組織結構特點摸索適用的制片方法。本實驗在傳統植物石蠟切片技術的基礎上，結合樟子松松針結構特點，對固定、脫水、粘片、染色等環節進行了摸索，以便更好地觀察松針的微觀形態。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料采自春季凈月潭公園樟子松林，選取新鮮、幼嫩松針進行石蠟制片。

1.2 試劑配制

FAA固定劑：70%乙醇：冰醋酸：37%甲醛=90： 5： 5

乙醇質量分數梯度溶液：70%、80%、85%、90%、95%、100%

伊紅染液：稱取1g伊紅溶于100ml蒸餾水中，加入1～2%冰醋酸10滴。

其他試劑常規配制。

1.3 實驗方法

依據傳統的石蠟切片流程：固定、脫水、透明、浸蠟、包埋及修蠟、切片、粘片、脫蠟及染色、封片，著重在脫水、透明、透蠟、包埋、染色等步驟根據樟子松松針的結構特點進行摸索改進。選取染色效果優良、完整的切片在OlympusDPController數碼顯微系統下進行顯微觀察并拍照。

2 結果與分析

2.1 不同固定、包埋時間對切片的影響

單一固定劑使用時乙醇會使原生質收縮，甲醛的滲透力較慢，冰醋酸使組織發脹，混合固定劑FAA使用方便，效果較好，應用也最廣。松針質地較堅硬，FAA固定液配制中使用70%乙醇，滲透力最好，同時具備一定的脫水效果。實驗中曾采用過1h、1.5h、2h固定時間，1h、1.5h都會在切片階段發生較嚴重的碎片現象，2h切片效果好。（圖A1、A2）

由于實驗時間在春夏之交，溫度有較為明顯的變化，加上材料質地較硬，故選擇熔點較高的蠟包埋。包埋后將蠟塊置于4℃冰箱中充分凝固。切片操作分別在蠟塊凝固3d、5d、7d進行，放置3d、5d的蠟塊在切片過程中均出現較為嚴重的材料與石蠟的分離情況，放置7d的蠟塊較少出現上述情況，說明凝固效果比較好，也使浸蠟更為充分。（圖B1、B2）

2.2 不同切片厚度對切片效果的影響

在其他實驗條件不變的情況下，曾選擇5um、8um、10um厚度進行切片，5um切片容易出現不完整現象，8um、10um切片效果未有明顯差異。實驗中發現，切片的質量除了與前面的固定、脫水等步驟相關外，切片刀是決定因素，刀片必須鋒利，否則在切片時蠟片會自行卷起或皺起，或會使組織出現傷痕，甚至使切片破碎、不完整。（圖C1、C2）

A1 固定2h，凝固3d；A2 固定2h，凝固7d；

B1 固定2h，厚度5um；B2 固定2h，厚度8um；

C1 固定1h，染色4min；C2 固定2h，染色4min

3 討論

本實驗結合材料特點對傳統石蠟切片方法進行條件摸索，除上述提及的固定、浸蠟、包埋及切片外，脫水、粘片、染色等環節如果處理不當也會影響切片效果。為使材料不致收縮，實驗設計了適合松針的乙醇梯度，同時松針在無水乙醇中的浸泡時間略長，保證脫水徹底。本實驗由于所切取的材料小，又輕又薄，故粘片時只需將其置于39℃水浴鍋中，讓其充分展開，再用防脫載玻片撈取，擺正位置，吸去多余水分， 置35℃烘箱24h即可。該方法操作簡便，在后續步驟中很少出現脫片現象。實驗中首先選取少數材料染色以摸索適合的染色時間，伊紅染色時間依次按3min、4min、5min進行實驗探索，最終確定伊紅中浸泡5min，蘇木精中浸泡1min為宜。石蠟切片是組織學常規制片技術中最為廣泛應用的方法，本實驗在借鑒傳統植物石蠟切片技術基礎上摸索了一套適合樟子松松針石蠟切片的制作條件和方法。切片的質量不僅和材料自身的特性以及實驗操作的室溫相關，還和每一步驟的規范操作與控制相關，所以還需要在不斷摸索和探討中加以完善。

參考文獻：

[1] 楊捷頻.常規石蠟切片方法的改良[J].生物學雜志，2006，23（1）：0045-0046.

[2] 朱莉艷.石蠟切片龜裂的原因分析[J].浙江中西醫結合雜志，2008，18（10）：634-635.

[3] 帥煥麗，楊途熙，魏安智，等.杏花芽石蠟切片方法的改良 [J] .果樹學報.2011，28（3）：536-539.