Xpert MTB/RIF法和涂片法檢測痰液結核分枝桿菌的比較

陳海強，唐柳生

1.廣西壯族自治區玉林市結核病防治所，廣西玉林537006；2.廣西壯族自治區龍潭醫院中心實驗室，廣西柳州545005

Xpert MTB/RIF法和涂片法檢測痰液結核分枝桿菌的比較

陳海強1，唐柳生2

1.廣西壯族自治區玉林市結核病防治所，廣西玉林537006；2.廣西壯族自治區龍潭醫院中心實驗室，廣西柳州545005

目的 探討痰液Xpert MTB/RIF法和涂片法檢測結核分枝桿菌的結果及二者之間的符合程度。方法對103例臨床診斷為肺結核的痰標本做Xpert MTB/RIF法和涂片法檢測，并將結果進行比較。結果103份痰液兩種方法檢測結核桿菌共有72例陽性，陽性率為69.9%，其中涂片法陽性65例，陽性率為63.1%，Xpert MTB/RIF法陽性61例，陽性率為59.2%；兩種方法均陽性52例，均陰性30例，總的符合率達79.6%，有12例Xpert MTB/RIF法陰性涂片法陽性,有9例涂片法陰性Xpert MTB/RIF法陽性。二者比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。61例Xpert MTB/RIF法檢測陽性對利福平耐藥16例，耐藥率為26.2%。結論兩法檢測結核分枝桿菌結果基本一致，二者相互結合更能提高檢測陽性率。

Xpert MTB/RIF法；涂片法；結核分枝桿菌；利福平；耐藥痰液

在發現結核病傳染源、選擇治療方案及評價防治效果等方面痰涂片鏡檢起到了至關重要的作用，但其陽性率較低。近幾年，結核病擴增檢測技術（Xpert MTB/RIF系統）在Gene Xpert多重平臺上得到了開發，也檢測了結核桿菌對利福平的耐藥性，為探討痰液Xpert MTB/RIF法和涂片法檢測結核分枝桿菌的結果及二者之間的符合程度，該研究整群選取該院2014年10—11月收治的103例臨床診斷為肺結核的痰標本做Xpert MTB/RIF法和涂片法檢測，并將結果進行比較?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 病例來源

整群選取103例標本均來自2014年10—11月到廣西壯族自治區龍潭醫院就診的肺結核患者的痰液，其中男70例，女33例，年齡為13～81歲。

1．2儀器及試劑

美國Cepheid公司的Gene Xpert檢測系統及試劑；熒光染液由珠海貝索公司提供；熒光顯微鏡由舜宇公司提供。

1.3 方法

1.3.1 痰涂片鏡檢熒光抗酸染色，40倍鏡下進行觀察，發現1條以上/300視野報告陽性，全片300個視野無抗酸桿菌報告陰性。

1.3.2 Xpert MTB/RIF法將1 mL痰標本放到有螺旋蓋的前處理管內,將兩倍痰標本體積的痰標本處理液添加到痰標本里。劇烈搖動前處理管大約10～20次或者將其置于渦旋振蕩器震蕩20 s左右，搖晃至沒有可見塊狀痰標本為止。打開Cartridge反應盒，用試劑盒內的專用無菌吸管取出2 mL處理后的痰樣本經過加樣孔慢慢加入Cartridge反應盒里。并將Cartridge反應盒放置入Gene Xpert檢測系統檢測。約2 h后儀器會自動判讀結果。MTB檢出極低:CT值＜16，陽性級別極低，定義為1+；MTB檢出低:CT值=16-22，陽性級別低，定義為2+；MTB檢出中等:CT值=22-28，陽性級別中，定義為3+；MTB檢出高:CT值＞28，陽性級別高，定義為4+；MTB未檢出：MTB檢測陰性。RIF resistance檢出：利福平耐藥（R）；RIF resistance未檢出：利福平敏感（S）。

1.4 統計方法

采用SPSS 13.0統計軟件對所得數據進行分析，計數資料采用χ2檢驗。

2 結果

103份痰液兩種方法檢測結核桿菌共有72例陽性，陽性率為69.9%，其中涂片法陽性65例，陽性率為63.1%，Xpert MTB/RIF法陽性61例，陽性率為59.2%，其中有16例對利福平耐藥，耐藥率為26.2%；兩種方法均陽性52例，均陰性30例，總的符合率達79.6%，有12例Xpert MTB/RIF法陰性涂片法陽性,有9例涂片法陰性Xpert MTB/RIF法陽性。二者比較,差異無統計學意義（χ2= 0.33，P＞0.05），見表1。

表1 兩種方法檢測結核桿菌的情況

3 討論

結核桿菌大部分存在于肺部的壞死病灶組織中，屬于肺結核病人攜帶的一類傳染性病菌，結核桿菌通過患者排痰將其排出體外，所以會有一定量的結核桿菌出現在痰液中，因此，研究者可以將痰液作為標本進行檢驗，并通過檢測陽性結果來確定一個人是否為結核病患者。最早的檢測方法是以痰涂片為主，此種檢測方式檢出率極低，所需時間約為一天，而Xpert MTB/RIF法只需要2 h就能將診斷和耐藥性結果得出，大部分情況下痰涂片的陽性率為13.76%～40.4%[1-2],而該報道的涂片陽性率高達63.1%，可能與所選病例有關，該文所選擇的病例均為臨床上已經確認為肺結核的病例，再加上作者所使用的是熒光染色法，陽性率要比傳統的萋妮氏染色法高10%左右[3]。該文結果顯示兩種方法均陽性52例，均陰性30例，總的符合率達79.6%，Boehme應用Xpert MTB/RIF對陽性患者的痰液培養標本進行檢測，檢測一次的敏感性為90.3%，但涂片鏡檢只有67.1%[4]，其報道的Xpert MTB/ RIF法陽性率高于涂片法，該文報道的Xpert MTB/RIF法陽性率低于涂片法，可能是12例Xpert MTB/RIF法陰性涂片法陽性當中有非結核分枝桿菌的存在[5]，因為Gene Xpert檢測系統只能檢測結核桿菌，而不能檢測非結核分枝桿菌，Helb等最早對Xpert MTB/RIF系統特異度檢驗，對20份不同的非結核分枝桿菌進行檢測，全部被正確排除，特異度為100%，結核分枝桿菌菌體存在對檢測結果不產生影響，高濃度的非結核分枝桿菌和低濃度的結核桿菌混合后，系統對其檢測率仍然為100%[6]。

利福平耐藥被作為耐多藥的一個重要指標。Xpert MTB/RIF系統對利福平耐藥菌株rpoB區的23個不同變異類型均能檢測到。Xpert MTB/RIF對利福平耐藥株的敏感性檢測率為97.6%、對敏感菌株的敏感性檢測率為98.1%[4]，特異度可達100%[7]。該文報道Xpert MTB/RIF系統檢測出利福平耐藥率為26.2%，楊景彬報道的結核桿菌絕對濃度法耐藥試驗顯示利福平耐藥率為21%[8]，低于該文報道的Xpert MTB/RIF法，另外也有報道指出此系統對利福平耐藥檢測時有假陽性出現，美國一項調查表明，表型檢測呈敏感的130份標本，經過Xpert MTB/RIF系統檢測其中3例對利福平耐藥，假陽性率是2.9%。類似的假陽性現象在rpoB區基因序列檢測中也曾出現[9]，由于該文未對所研究病例作結核桿菌培養及其耐藥性試驗，因此，該文研究無法表達該系統的敏感性、特異性和假陽性率，該文無法無天對相關文獻報道的數據進行比較。盡管如此，但從相關資料報道我們得知Xpert MTB/RIF系統無論在特異性和敏感性方面均有較好的檢測功效，即使檢測到MTB陽性也并不確定為“涂陰”或“涂陽”，無法將病例報告系統的患者詳細分類，也就無法制定感染控制干預的措施[10]。雖然有這類問題的存在，但該系統的使用前景依然樂觀，全球范圍內2012年快速診斷方法診斷出結核病患者超過40%[11]。如果將Xpert MTB/ RIF法和涂片法相結合，更能提高分枝桿菌的檢出率，對控制耐多藥結核病疫情有著非常重要的意義。

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Which MTB/RIF and Smear Method to Detect the Comparison of Sputum Mycobacterium Tuberculosis

CHEN Hai-qiang1，TANG Liu-sheng2
1.Guangxi Yulin City Tuberculosis Control,Yulin，Guangxi Province,537006 China;2.Guangxi Longtan Hospital Central Laboratory,Liuzhou,Guangxi Province,545005 China

ObjectiveExplore the sputum which MTB/RIF and smear method the results of the detection of mycobacterium tuberculosis and conform to the degree between the two.Methods103 cases of clinical diagnosis for tuberculosis sputum specimens which MTB/RIF and smear method detection,and the results were compared.Results103sputum of two kinds of methods to detect mycobacterium tuberculosis a total of 72 cases with positive,positive rate was 69.9%,the method of smear positive cases61ositive rate was 63.1%,which MTB positive 61 RIF method,positive rate is 59.2%;Two methods are positive for 52ses,12cases which MTB/RIF negatie smear method is positive,there are 9 cases of smear positive negative which MTB/RIF method.The two comparison,there was no significant difference（P＞0.05).Test positive for 61 cases which MTB/RIF method of rifampin resistance in 16 cases,resistant rate of 26.2%.ConclusionFlow method to detect mycobacterium tuberculosis results are basically identical,the two together can improve the detection positive rate.

Method of MTB/RIF；Smear method；Mycobacterium tuberculosisrifampicin；Drug resistance；Sputum

R4

A

1674-0742（2015）05（a）－0186-03

2015-02-05）

影響因子

陳海強（1970-），男，廣西玉林人，本科，主管技師，主要從事結核病防治工作。

影響因子（Impact factor，IF）是美國科學情報研究所（ISI）的期刊引證報告（JCR）中的一項數據，指的是某一期刊的文章在特定年份或時期被引用的頻率，是衡量學術期刊影響力的一個重要指標。由美國科學情報研究所創始人尤金·加菲得（英語：Eugene Garfield）在1960年創立，其后為文獻計量學的發展帶來了一系列重大革新。影響因子即某期刊前兩年發表（S,T）的論文在統計當年（U）的被引用總次數X（前兩年總被引次數）除以該期刊在前兩年內發表的論文總數Y（前兩年總發文量）。這是一個國際上通行的期刊評價指標。