鼠神經生長因子聯合激素治療對格林巴利綜合征患者血清IL-12、IL-18的影響

王 剛，劉力婕，郝 光

鼠神經生長因子聯合激素治療對格林巴利綜合征患者血清IL-12、IL-18的影響

王 剛，劉力婕，郝 光

目的 探討鼠神經生長因子聯合激素治療對格林巴利綜合征患者血清白細胞介素(IL)-12、IL-18的影響。方法 采用雙盲法將我院2013年10月—2014年10月收治的格林巴利綜合征患者80例隨機分為觀察組和對照組，各40例。觀察組采用鼠神經生長因子聯合激素進行治療，對照組單純采用甲潑尼松龍進行治療。觀察對比兩組患者治療前后血清中IL-12、IL-18的蛋白表達情況和淋巴白皮細胞IL-12、IL-18受體的mRNA表達情況，分析兩種治療方法對二者的影響。結果 兩組患者治療后IL-12和IL-18蛋白表達均有所降低(P<0.05)，觀察組降低水平明顯比對照組低(P<0.05)。而且二者蛋白表達和受體mRNA的蛋白表達都具有正相關性。觀察組治療總有效率為95.0%，明顯高于對照組的80.0%(χ2=3.645，P<0.05)，觀察組患者不良反應發生率為2.5%，對照組為5.0%，兩組比較差異無統計學意義(χ2=0.985，P>0.05)。結論 鼠神經生長因子聯合激素治療格林巴利綜合征患者可以有效抑制IL-12和IL-18的蛋白表達，從而抑制促炎癥因子，療效顯著。

格林巴利綜合征；鼠神經生長因子；激素；白細胞介素-12；白細胞介素-18

格林巴利綜合征(GBS)是兒童中比較常見的周圍神經性疾病，又被稱為急性炎癥性脫髓鞘性多發性神經根炎[1]，其特點是周圍神經急性炎性脫髓鞘。格林巴利綜合征的臨床表現為四肢麻痹、無力，且呈對稱性；嚴重的經常累計顱神經支配的肌肉，甚至出現呼吸肌無力，死亡等[2]。白細胞介素(IL)-12和IL-18都是促炎癥因子，IL-12誘導Th0細胞分化成為Th1細胞，并最終成長為炎癥效應細胞，而IL-18的作用是協同并增強IL-12的誘導分化作用[3]。目前格林巴利綜合征的主要治療方法是血漿置換、丙種球蛋白、激素療法等。其中丙種球蛋白可以縮短療程，減緩病情。有學者研究表明[4]，鼠神經生長因子(MNGF)可以對周圍神經損傷進行修復，并且可以促進神經細胞的生長、發育。為了更好的治療格林巴利綜合征患者，同時探究格林巴利綜合征患者治療前后血清白介素IL-12、IL-18的改變狀況。本研究選取2013年10月—2014年10月收治的格林巴利綜合征為研究對象，探討研究鼠神經生長因子聯合激素對格林巴利綜合征患者血清IL-12、IL-18的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機抽取我院2013年10月—2014年10月收治的確診為格林巴利綜合征的患者共80例，男46例，女34例，年齡1歲～11歲(5.3歲±1.2歲)。所有患者病歷均符合公認的Asbury標準，并且沒有其他炎癥、腫瘤、風濕疾病，血細胞沉降率指標在正常范圍內，無外傷和應激反應等。將80例患者平均分為兩組，觀察組40例，男23例，女17例；年齡5.2歲±1.3歲；病程7.8月±2.1月。對照組40例，男23例，女17例；年齡5.4歲±1.1歲；病程7.9月±2.3月。兩組患者在年齡、性別、文化程度、家庭狀況、臨床表現、平均病程等方面差異無統計學意義。

1.2 方法 兩組患者入院之后都需要接受相應的治療，包括應用抗菌藥物，使呼吸道保持順暢，還有各種維生素和能量支持治療方法。對照組采用單純的激素治療方法：給予甲潑尼松龍(Upjon公司生產)15 mg/kg～30 mg/kg，溶于150 mL～250 mL 5%的葡萄糖注射液中靜脈輸注，連續輸注5 d后，改為每天口服潑尼松1.5 mg～2.0 mg，需要持續2周～3周，具體需要根據實際病情酌量減少或者停用。觀察組在對照組的基礎上每天肌肉注射鼠神經生長因子30 μg。兩組均治療1個月。

1.3 檢測指標及方法 觀察兩組IL-12和IL-18的蛋白表達情況、淋巴細胞表面IL-12和IL-18受體mRNA的表達情況以及治療效果、不良反應發生情況。

1.3.1 IL-12和IL-18的蛋白表達 所有患者第2天早晨空腹情況下抽取10 mL靜脈血，然后取出淋巴細胞分離液10 mL加入到試管中，取5 mL抗凝血劑沿著試管壁小心地加入到上層的分離液中，離心5 min，對上層血清進行分裝，放置在-20 ℃的環境下保存備用。用吸管小心地吸取2 mL中間白膜層即淋巴細胞[5]，置入10 mL含有10%胎牛血清的PBS中，離心5 min，撇去上層清液，置入50 μL PBS懸浮淋巴細胞(總數約為6×106/L)。嚴格按照血清蛋白試劑盒(由美國Sigma公司生產)的使用說明書，逐步測定IL-12和IL-18的蛋白表達情況。

1.3.2 淋巴細胞表面IL-12和IL-18受體mRNA的表達 利用Trizol方法[6]提取出細胞總RNA，取其逆轉錄2 μg，PCR反應條件分別為：94 ℃預變性5 min，55 ℃，45 s；95℃，45 s；72 ℃，90 s。引物由杭州聯科生物技術有限公司設計合成：其中β-actin共20個循環；IL-12受體mRNA共30個循環；IL-18受體mRNA共30個循環。然后取出5 μL PCR的樣品，使用2%的瓊脂糖凝膠進行電泳。依據公式[7]：蛋白表達強度Rv=ILR/β-actin。

2 結 果

2.1 兩組患者IL-12、IL-18蛋白表達情況 兩組治療后外周血清中和腦脊液中兩種蛋白表達情況都比治療前有所降低，但是觀察組的效果更為顯著。而且IL-12與IL-18在外周血清和腦脊液中的蛋白表達都呈正相關性(r值分別為0.865，0.754，P<0.05)。詳見表1。

表1 兩組患者IL-12、IL-18蛋白表達情況(±s) pg/mL

2.2 兩組淋巴細胞表面IL-12和IL-18受體mRNA表達情況 治療后兩組患者外周血淋巴細胞表面IL-12、IL-18受體的mRNA表達均比治療前有所降低(P<0.05)，且兩者的蛋白表達呈現顯著的正向相關性(r=0.848)。詳見表2。

表2 兩組治療前后IL-12、IL-18受體的mRNA蛋白表達(±s)

2.3 兩組患者治療效果及不良反應情況 觀察組患者痊愈12例，明顯好轉15例，好轉10例，無效2例，總有效率95.0%；對照組患者痊愈8例，明顯好轉10例，好轉14例，無效8例，總有效率80.0%。觀察組總有效率明顯高于對照組(χ2=3.645，P<0.05)。觀察組患者不良反應發生率為2.5%，對照組為5.0%，兩組比較差異無統計學意義(χ2=0.985，P>0.05)。

3 討 論

格林巴利綜合征是自身免疫系統性周圍神經病，其發病率為0.6/10萬～4.0/10萬[8]。目前為止，其發病機制尚未明確，也沒有顯著的治療方法。有研究表明[9]，格林巴利綜合征是因為感染或者其他原因導致機體免疫系統功能損壞，從而對周圍神經免疫的耐受性進行破壞，T細胞被激活，成為自身的免疫應答細胞，然后釋放出大量的促炎癥因子，使得周圍神經的脫髓鞘炎癥受損，包括IL-12和IL-18在內的大量Th1細胞因子增強表達，而包括IL-4、IL-6、IL-10等在內的拮抗細胞因子Th2的蛋白表達則顯著下降。促炎癥因子和抑炎癥因子協調失衡，導致炎癥的發生。IL-12在Th1細胞因子的活化增強過程中，起到了至關重要的促進作用，同時IL-18起到輔助增強的作用。有研究認為鼠神經生長因子可以對周圍神經損傷進行修復，并且可以促進生精細胞的生長、發育，有效抑制IL-12、IL-18的蛋白表達，以及兩者受體的mRNA的蛋白表達，從而抑制促炎癥因子的作用[10-12]。有文獻指出，激素可以促進IL-4、IL-6、IL-10等Th2細胞因子的表達，增強抑炎癥因子的作用[13，14]。本研究通過對比鼠神經生長因子聯合激素的治療方法和單純地使用鼠神經生長因子對格林巴利綜合征患者進行治療，結果顯示，鼠神經生長因子聯合激素療法可以有效抑制IL-12和IL-18的蛋白表達，對治療格林巴利綜合征效果顯著，而且IL-12、IL-18兩者的蛋白表達具有一定的正相關性。但是本研究中由于所取患者有一定的局限性，而且樣本稍少，難免存在一定的偏頗，還需要廣大學者進一步來完善結論，為格林巴利綜合征患者的治療提供新的可行方案。

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(本文編輯 郭懷印)

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10．3969/j．issn．1672-1349．2015．10．031

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2015-04-06)