膽囊炎合劑主要藥效學研究

陳英紅 徐宏 董芳 羅浩銘 劉威 姜翔之

1.吉林省中醫藥科學院中藥研究所，吉林長春130012；2.長春中醫藥大學藥學院，吉林長春130117；3.吉林大學中日聯誼醫院藥劑科，吉林長春130021

膽囊炎合劑主要藥效學研究

陳英紅1徐宏1董芳1羅浩銘2劉威1姜翔之3▲

1.吉林省中醫藥科學院中藥研究所，吉林長春130012；2.長春中醫藥大學藥學院，吉林長春130117；3.吉林大學中日聯誼醫院藥劑科，吉林長春130021

目的研究膽囊炎合劑與其功能主治相關的主要藥效學。方法采用石膽酸引起的豚鼠急性膽囊炎模型觀察膽囊炎合劑對膽囊炎的作用；采用四氯化碳及α-萘異硫氰酸酯所致動物急性肝損傷及黃疸型肝損傷模型觀察膽囊炎合劑對肝損傷的保護作用；采用二甲苯引起的小鼠耳水腫和酵母所致大鼠發熱方法觀察其消炎解熱作用。結果與石膽酸所致的急性膽囊炎模型組比較，豚鼠的肝臟、脾臟指數明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）；與四氯化碳所致急性肝損傷模型組和α-萘異硫氰酸酯致黃疸型肝損傷模型組比較，血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、總膽紅素活性顯著降低（P＜0.05）；膽囊炎合劑對二甲苯引起的炎癥及酵母導致的發熱也有顯著的抑制作用（P＜0.05或P＜0.01）。結論膽囊炎合劑具有利膽、消炎、退黃及解熱作用。

膽囊炎合劑；急性膽囊炎；肝損傷；藥效學

按照吉林省對口援疆規劃的總體安排和部署，為了充分發揮新疆阿勒泰地區珍貴藥材的資源優勢，哈醫藥在疾病治療、預防保健等方面的傳統醫藥優勢，對目前臨床使用安全可靠、療效確切、用量較大的處方做出篩選，幫助新疆人民研究開發哈醫藥制劑，實現資源共享、互惠互利、共同發展的目標。膽囊炎合劑由一枝蒿、茵陳、大黃、金絲桃、菊苣和綿馬貫眾六味藥制備而成。本方為新疆哈薩克名老中醫經驗方，臨床應用多年，療效顯著?，F作為院內制劑進行開發，根據其功能與主治對其進行了藥效學的系統研究實驗，現將結果報道如下：

1 材料與方法

1.1 試藥

膽囊炎合劑由新疆阿勒泰地區哈薩克醫院提供，為棕褐色液體，規格：每瓶100 mL，批號：20131204，臨床用量：口服，25mL/次，2次/d。消炎利膽片由廣州白云山和記黃埔中藥有限公司生產，規格：薄膜衣小片（0.26 g，相當于飲片2.6 g），產品批號：G2A009，功能主治：清熱、祛濕、利膽，用于肝膽濕熱所致的脅痛、口苦、急性膽囊炎、膽管炎見上述證候者，用法用量：口服，6片/次，3次/d。

1.2 動物

昆明種大鼠，體重160～200 g，雄性，小鼠，體重22～25 g，均購自吉林大學白求恩醫科大學動物實驗中心，合格證號：SCXK（吉）2008-0005；豚鼠，自由攝食飲水。豚鼠，體重250～350 g，雄性，購自長春生物制品研究所有限責任公司，合格證號：SCXK（吉）2008-0003。

1.3 方法

1.3.1 對石膽酸所致豚鼠急性膽囊炎的影響［1-3］取60只豚鼠隨機分成6組，分別為正常對照組、模型對照組、陽性藥對照組（消炎利膽片0.8 g/kg）、膽囊炎合劑高、中、低劑量組（12、6、3 m L/kg），每組10只。除正常對照組外，每組按100 mg/kg腹腔給予豚鼠膽石酸（LCA），每日1次，連續16 d，正常對照組等容量灌服常水，自由采食和飲水，供給充足青菜。造模后每組給予相應藥物（正常對照組和模型對照組給予等容量常水），每日1次，連續給藥15 d，處死前1 d稱體重，禁食16 h。第15天，藥后1 h處死豚鼠，用注射器吸取膽囊膽汁計量，取肝臟稱重。膽囊組織用10%甲醛液（FAA）固定以備進行組織病理學檢驗。

1.3.2 對大鼠四氯化碳（CCl4）急性肝損傷模型的保護作用［4-13］取60只大鼠隨機分為6組，分別為正常對照組、模型對照組、陽性藥對照組（消炎利膽片1 g/kg）、膽囊炎合劑高、中、低劑量組（14、7、3.5 m L/kg），每組10只，每天給藥1次，連續10 d。末次給藥后1 h，給大鼠（正常對照組除外）腹腔注射5 m L/kg、2%CCl4花生油，20 h后斷頭取血，分離血清，測定血清谷丙轉氨酶（ALT）及血清谷草轉氨酶（AST）含量。

1.3.3 對α-萘異硫氰酸酯（ANIT）致黃疸型肝損傷小鼠的保護作用［14-18］將60只小鼠隨機分成6組，分別為正常對照組、模型對照組、陽性藥對照組（消炎利膽片1.4 g/kg）、膽囊炎合劑高、中、低劑量組（20、10、5 mL/kg），每組10只，每天給藥1次，連續10 d。末次藥后1 h，正常對照組灌胃給予花生油，其余各組灌胃給予ANIT 40 mg/kg（花生油配制），造成小鼠急性肝損傷模型，16 h（禁食不禁水）后摘眼球采血，分離血清，檢測血清ALT、AST、總膽紅素（TB）。

1.3.4 對二甲苯所致小鼠耳水腫的影響［19-22］取50只雄性小鼠隨機分為5組，分別為正常對照組、陽性對照藥組（消炎利膽片1.4 g/kg）、膽囊炎合劑高、中、低劑量組（20、10、5mL/kg），每組10只，每天給藥1次，連續10 d。末次給藥40 min后，于小鼠左耳涂二甲苯20μL，20 min后處死小鼠，利用9 mm鐵沖下動物左右耳，以動物左右耳片重之差值作為腫脹度。

1.3.5 對酵母所致大鼠發熱的影響［23-26］取肛溫正常的雄性大鼠60只，隨機分為6組，分別為正常對照組、模型對照組、陽性藥對照組（消炎利膽片1 g/kg）、膽囊炎合劑高、中、低劑量組（14、7、3.5mL/kg），每組10只，每天給藥1次，連續10 d。末次給藥前4 h以15m L/kg皮下注射20%干酵母，于注射前測量正常肛溫2次，取其均值作為正常體溫，并于給藥后1、2、3 h各測動物肛溫1次，測量值與正常值之差為發熱度。

1.4 統計學方法

采用SPSS 17.0對所得數據進行統計學分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，計數資料采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

圖1 對石膽酸所致豚鼠急性膽囊炎的影響

2 結果

2.1 對石膽酸所致豚鼠急性膽囊炎的影響

結果表明，模型對照組膽囊壁明顯增厚，多數黏膜增生，甚或增生的黏膜連接成網，少數黏膜下血管擴張充血明顯，伴不同程度水腫及大量以淋巴細胞為主的炎癥細胞浸潤，炎性反應重者膽囊內看見紅染的絮狀物質和脫落壞死的黏膜上皮，見圖1A。正常對照組豚鼠膽囊可見四層結構，黏膜層上皮規整，為單層立方狀，黏膜下層、肌層及外膜未見明顯炎細胞浸潤及血管擴張充血及出血改變，為豚鼠正常膽囊組織結構，見圖1B。模型復制成功，膽囊壁增厚，黏膜上皮增生伴黏膜下血管擴張充血及炎癥細胞浸潤符合膽囊炎改變，試驗藥的高劑量對膽囊炎有明顯的改善作用，陽性藥和試驗藥的中劑量對膽囊炎改善作用次之，試驗藥的低劑量組效果最差，見圖1C～F。

與模型對照組比較，膽囊炎合劑高、中劑量組可明顯降低由石膽酸所致的急性膽囊炎，豚鼠的肝臟指數明顯降低，膽汁量也明顯減少，表明膽囊炎合劑具有明顯的利膽作用，見表1。與模型對照組比較，膽囊炎合劑高劑量組對石膽酸引起的豚鼠膽囊炎有較好的治療作用，見表2。

表1 對石膽酸所致豚鼠急性膽囊炎的影響（±s）

表1 對石膽酸所致豚鼠急性膽囊炎的影響（±s）

注：與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；“-”表示無數據

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表2 對石膽酸所致豚鼠急性膽囊炎病理組織形態學的影響（只）

2.2 對大鼠四氯化碳急性肝損傷模型的保護作用

CCl4致小鼠急性肝損傷模型是經典化學性肝損傷動物模型。CCl4在肝細胞內經細胞色素P450激活生成大量自由基，破壞肝細胞膜，導致轉氨酶釋放入血。AST、ALT是反映肝損傷最早的、最敏感的指標［5］。當肝受到損害時AST、ALT從肝細胞內逸出而進入血液，致使血清中兩者含量升高，其升高程度與肝損傷程度呈正相關。由表3結果可見，給予CCl4后，模型對照組大鼠血清ALT、AST明顯升高，膽囊炎合劑能明顯對抗這種改變，且以高劑量尤為顯著，說明其對CCl4造成的大鼠急性肝損傷具有明顯的保護作用。

表3 對四氯化碳所致大鼠急性肝損傷的影響（U/L，±s，n=10）

表3 對四氯化碳所致大鼠急性肝損傷的影響（U/L，±s，n=10）

注：與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；“-”表示無數據；AST：谷草轉氨酶；ALT：谷丙轉氨酶

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2.3 對α-萘異硫氰酸酯所致小鼠黃疸型肝損傷的影響

ANIT是一種造成膽汁瘀積的毒物。據文獻報道，ANIT于小鼠中毒后48～72 h肝損傷明顯，肝細胞變性壞死，小葉間膽管增生，膽管上皮細胞腫脹，部分壞死的上皮細胞脫落后阻塞膽管，導致血清AST、ALT、TB顯著升高，可作為退黃藥物研究的模型［15］。由表4結果可見，給予ANIT后，模型組小鼠血清ALT、AST、TB明顯升高，而膽囊炎合劑能明顯對抗這種改變，且以高劑量表現最佳，說明其對ANIT造成的黃疸型急性肝損傷有明顯的保護作用，具有一定退黃作用。

表4 對α-萘異硫氰酸所致小鼠急性黃疸型肝損傷的影響（±s，n=10）

表4 對α-萘異硫氰酸所致小鼠急性黃疸型肝損傷的影響（±s，n=10）

注：與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；“-”表示無數據

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2.4 對二甲苯所致小鼠耳水腫的影響

二甲苯致小鼠耳腫脹是用于研究炎癥的常見動物模型［19］。表5結果表明，與正常對照組比較，膽囊炎合劑對二甲苯引起的小鼠耳水腫具有明顯的抑制作用，且以高、中劑量最為顯著。

表5 二甲苯所致小鼠耳水腫的影響（mg，±s，n=10）

表5 二甲苯所致小鼠耳水腫的影響（mg，±s，n=10）

注：與正常對照組比較，*P＜0.01；“-”表示無數據

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2.5 對酵母所致大鼠發熱的影響

酵母致大鼠發熱模型是一種常用的發熱模型，由其所致發熱的動物全身表現與臨床常見明顯炎癥的里熱證類似，常用于考察清熱類中藥的解熱作用［23］。表6結果表明，膽囊炎合劑具有一定的解熱作用，且以高、中劑量作用最好。

3 討論

本實驗采用石膽酸所致急性膽囊炎模型，模型對照組與正常對照組比較膽囊壁明顯增厚，多數黏膜增生，甚或增生的黏膜連接成網，少數黏膜下血管擴張充血明顯，伴不同程度水腫及大量以淋巴細胞為主的炎癥細胞浸潤，炎性反應重者膽囊內看見紅染的絮狀物質和脫落壞死的黏膜上皮。實驗結果表明膽囊炎合劑能明顯降低由石膽酸所致的急性膽囊炎，豚鼠的肝臟指數明顯降低，膽汁量也明顯減少。

采用ANIT灌胃給藥誘發大鼠黃疸型急性肝損傷模型。結果顯示，與正常組比較，模型組大鼠毛發凌亂、無光澤，活動量及進食均減少，小便呈深黃色，體重下降顯著，而肝重、肝指數均顯著升高，膽囊炎合劑能有效降低血清轉氨酶、膽管酶及膽紅素水平。表明膽囊炎合劑對ANIT造成的黃疸型急性肝損傷有明顯的保護作用。

上述結果顯示，膽囊炎合劑對急性和慢性膽囊炎、急性黃疸型肝炎有很好的治療作用。本研究內容為下一步的開發利用提供了詳實的研究數據。

表6 對酵母所致大鼠發熱的影響（±s，n=10）

表6 對酵母所致大鼠發熱的影響（±s，n=10）

注：與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；“-”表示無數據

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Study on main pharmacodynam ics of Cholecystitis M ixture

CHEN Yinghong1XU Hong1DONG Fang1LUO Haoming2LIUWei1JIANG Xiangzhi3▲
1.Institute of Chinese Materia Medica,Jilin Academy of Chinese Medical Sciences,Jilin Province,Changchun 130012, China;2.College of Pharmacy,Changchun University of Chinese Medicine,Jilin Province,Changchun 130117,China; 3.Department of Pharmacy,Japan-China Union Hospital of Jilin University,Jilin Province,Changchun 130021,China

Objective To study the main pharmacodynamics of Cholecystitis Mixture related to its major functions. M ethods Themodel of guinea pigswith acute cholecystitis caused by lithocholic acid was used to observe the function of Cholecystitis Mixture for cholecystitis;themodels of animals with acute liver injury and liver injury of jaundice type caused by carbon tetrachloride andα-naphthylisothiocyanatewere used to observe the protective effect of Cholecystitis Mixture for liver injury;themethods of ear edema ofmice caused by xylene and fever of rats caused by yeastwere used to observe the anti-inflammatory and antipyretic functions.Results Compared with model of acute cholecystitis caused by lithocholic acid,the liver and spleen indexes of guinea pigs were decreased significantly(P＜0.05 or P＜0.01); compared with themodel of acute liver injury caused by carbon tetrachloride and themodel of liver injury of jaundice type caused byα-naphthylisothiocyanate,the activity of alanine transaminase,glutamic oxalacetic transaminase,total bilirubin was decreased significantly(P＜0.05);Cholecystitis Mixture had marked inhibition effects for inflammations caused by xylene and fever caused by yeast(P＜0.05 or P＜0.01).Conclusion Cholecystitis Mixture has the effects of choleretic effect,anti-inflammation,removing jaundice and relieving fever.

Cholecystitis Mixture;Acute cholecystitis;Liver injury;Pharmacodynamics

R285.5

A[文獻標識碼]1673-7210（2015）06（c）-0008-05

急性肝損傷模型，在本研究中，模型組小鼠血清生化指 [文獻標識碼]A LT、AST活性明顯增強，膽囊炎合劑可明顯降低CCl4所致肝損傷模型大鼠血清中ALT和AST的活性水平，減輕病理改變，表明膽囊炎合劑對CCl4誘導的肝細胞損傷具有保護作用。

2015-02-06本文編輯：張瑜杰）

吉林省科技發展計劃項目（20115092）。

陳英紅（1970.11-），女，主任藥師，主要從事中藥天然藥物新藥研究與開發。

▲通訊作者