終末期腎病患者腹膜透析和血液透析對自然殺傷細胞和T細胞亞群的影響

汪晶華 劉 宇 趙鳳龍 楊 潔

1.解放軍白求恩國際和平醫院腎臟病科袁河北石家莊050000曰2.河北衡水市武邑縣醫院內科袁河北衡水053400

終末期腎病患者腹膜透析和血液透析對自然殺傷細胞和T細胞亞群的影響

汪晶華1劉 宇1趙鳳龍2楊 潔1

1.解放軍白求恩國際和平醫院腎臟病科袁河北石家莊050000曰2.河北衡水市武邑縣醫院內科袁河北衡水053400

目的探討腹膜透析和血液透析對終末期腎病患者自然殺傷細胞(NK細胞)和T細胞亞群的影響。方法選取2012年2月耀2014年2月解放軍白求恩國際和平醫院腎內科收治的終末期腎病患者88例袁根據透析方式分為腹透組(44例袁采用非臥床持續性腹膜透析治療)和血透組(44例袁采用常規血液透析治療)。于透析前及透析6個月后采用流式細胞術檢測兩組患者血液中CD4 T淋巴細胞堯CD8 T淋巴細胞堯CD4/CD8堯調節性T細胞(Treg細胞)比例以及NK細胞比例袁NK細胞活性采用MTT比色法檢測。結果腹透組和血透組治療前CD4 T淋巴細胞堯CD8 T淋巴細胞堯CD4/CD8堯Treg細胞比例堯NK細胞比例和活性分別為(30.05依3.96)%堯(25.13依3.14)%堯(1.42依0.25)堯(5.96依1.95)%堯(11.5依1.6)%堯(80.6依5.6)%和(30.86依3.54)%堯(24.25依3.40)%堯(1.39依0.29)堯(5.82依2.06)%袁(11.8依1.7)%堯(78.6依5.3)%袁兩組比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療6個月后兩組CD4 T淋巴細胞堯CD8 T淋巴細胞堯CD4/CD8堯Treg細胞比例以及NK細胞比例堯活性分別為(25.32依2.41)%堯(26.42依3.78)%堯(1.25依0.16)堯(4.33依1.45)%堯(8.6依1.1)%堯(56.7依4.4)%和(19.88依2.68)%堯(26.16依3.74)%堯(1.05依0.25)堯(3.15依1.05)%堯(6.4依0.8)%堯(44.5依3.8)%袁兩組較治療前均有顯著改善袁差異有統計學意義(P<0.05)曰且血透組較腹透組改善更為明顯袁差異有統計學意義(P<0.05)。結論腹膜透析和血液透析均可一定程度上調節終末期腎病患者NK細胞和T細胞亞群比例袁改善細胞免疫功能袁腹膜透析效果更顯著。

終末期腎病；腹膜透析；血液透析；NK細胞；T細胞

終末期腎病(end-stage renal disease)是慢性腎臟病發展的最終表現袁其危害性僅次于心血管疾病以及惡性腫瘤[1]。終末期腎病患者可出現免疫功能紊亂袁包括免疫器官堯細胞堯細胞因子和基因表達等多方面問題袁其中細胞免疫受損尤為嚴重。腎移植是治療終末期腎病的有效措施袁但受到器官來源堯費用等多方面的影響袁大部分患者無法接受治療。目前中終末期腎臟病的主要治療方法為腹膜透析以及血液透析[2]。為了探討腹膜透析以及血液透析對患者免疫功能的影響袁為臨床上治療終末期腎臟病提供理論依據袁本研究對88例患者進行了對比研究袁現將結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年2月耀2014年2月解放軍白求恩國際和平醫：腎內科收治的終末期腎病患者88例作為研究對象。入選標準：符合美國腎臟病基金會關于終末期腎臟病的診斷標準[3]袁腎小球濾過率<15 mL/min曰一般情況良好袁無腹膜炎堯心力衰竭堯消化道出血堯感染等情況曰治療依從性好袁可按醫囑進行治療以及服用藥物。排除標準：嚴重肝功能損害曰近1年內有過大型手術史曰近3個月內應用過影響免疫系統的藥物或激素曰合并免疫系統疾病曰精神病患者或妊娠期婦女。88例患者按照治療方式分為腹透組和血透組袁每組各44例。本研究經醫：倫理研究委員會批準通過袁所有患者和/或家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 治療方法

患者入：后收集性別堯年齡堯體重指數堯血生化指標等一般資料。腹透組患者采用非臥床持續性腹膜透析治療袁雙滌綸套透析管為Baxter公司生產袁手術置入后行間斷性透析袁術后4 d采用不臥床持續性腹膜透析袁透析液采用1.5%的乳酸鹽雙聯腹透液袁每日4袋。血透組采用常規血液透析治療袁透析機為德國費森尤斯Fresenius 4008s透析機袁透析液為碳酸氫鹽溶液。設定透析液流量500mL/min袁血流量250mL/min袁透析有效面積1.6 m2。透析過程中給予透析常規對癥支持治療袁包括鈣離子拮抗劑堯鐵劑堯葉酸堯維生素等。

1.3 觀察指標及檢測方法

分別于入：后及透析6個月后采集清晨空腹靜脈血10 mL袁加入紅細胞裂解液使得紅細胞全部裂解袁在1200 r/min下離心5 min袁磷酸緩沖鹽溶液(PBS)洗滌2次袁調整細胞濃度為1伊106個/mL。采用流式細胞數分析細胞亞群變化袁上述制備的樣本分為4份袁1200 r/min離心5 min后取沉淀袁根據說明書進行細胞亞群分析袁計算T淋巴細胞亞群比例。自然殺傷細胞(NK細胞)活性采用MTT比色法檢測袁從患者外周血中分離NK 1.1陽性的NK細胞袁調整濃度為2伊105個/mL袁作為效應細胞。將濃度為1伊105個/m L的K562細胞作為靶細胞。隨后將效應細胞和靶細胞各100滋L按照體積比1頤1加入96孔板中袁作為實驗孔袁同時設立效應細胞堯靶細胞對照孔袁培養20 h加入10滋L MTT袁隨后在37益培養箱內培養4 h袁培養箱內二氧化碳濃度為5%袁棄上清液加入100滋L二甲基亞砜(DMSO)袁震蕩混勻后用酶標儀檢測光密度(optical density袁OD)。每孔重復檢測3次袁計算NK細胞活性。NK細胞活性=[1-(實驗孔OD值-效應對照組孔OD值)/靶細胞對照組孔OD值]伊100%。

1.4 統計學方法

采用統計軟件SPSS 19.0對數據進行分析袁正態分布計量資料以均數依標準差(x依s)表示袁兩組間比較采用t檢驗曰計數資料以率表示袁采用字2檢驗。以P< 0.05為差異有統計學意義。

表1 兩組一般資料比較(依s)

表1 兩組一般資料比較(依s)

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2 結果

2.1 兩組一般資料比較

兩組性別堯年齡堯體重指數堯血生化指標等一般資料比較袁差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2 兩組T細胞亞群變化

兩組治療前CD4 T淋巴細胞堯CD8 T淋巴細胞堯CD4/CD8堯Treg細胞比例比較袁差異無統計學意義(P> 0.05)曰治療6個月后CD4 T淋巴細胞堯CD8 T淋巴細胞堯CD4/CD8堯Treg細胞比例均較治療前顯著改善袁差異有統計學意義(P<0.05)曰且血透組較腹透組改善更為明顯袁差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3 兩組NK細胞變化情況

兩組治療前NK細胞比例堯活性比較袁差異無統計學意義(P>0.05)。治療6個月后袁兩組NK細胞比例堯活性均較治療前顯著下降袁差異有統計學意義(P <0.05)曰且血透組較腹透組下降更為明顯袁差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表2 兩組T細胞亞群比例變化情況比較(依s)

表2 兩組T細胞亞群比例變化情況比較(依s)

注：與腹透組治療6個月后比較袁*P<0.05曰Treg細胞：調節性T細胞

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表3 兩組NK細胞比例、活性比較(%袁依s)

表3 兩組NK細胞比例、活性比較(%袁依s)

注：與腹透組治療6個月后比較袁bP<0.05曰NK細胞：自然殺傷細胞

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3 討論

終末期腎病患者往往并發感染袁嚴重者可出現死亡。并發感染的主要原因就是終末期腎病患者存在嚴重免疫功能缺陷[4-5]。T淋巴細胞是機體免疫系統重要的組成部分之一袁具有介導細胞免疫堯調節免疫功能的作用袁并在適應性免疫應答過程中起到重要作用。有研究[6]指出袁終末期腎病患者存在嚴重的T淋巴細胞亞群比例失調和功能異常。隨著透析技術的不斷發展袁慢性腎功能衰竭患者的存活率越來越高袁長期透析的患者也越來越多[7]。目前袁治療終末期腎病患者的主要方法為腹透透析和血液透析袁臨床上已取得了明確的療效袁但隨之而來的是免疫力低下等各種遠期并發癥[8-9]。本研究著重比較了這兩種方法對于患者NK細胞和T細胞亞群的影響。

有研究[10-12]指出袁終末期腎臟病患者往往體液免疫基本正常袁但細胞免疫存在不同的功能障礙。T淋巴細胞是細胞免疫反應中較為重要的環節之一袁主要負責特異性細胞免疫以及免疫功能的調節袁根據表型和功能的不同可分為輔助性T細胞和抑制性/細胞毒T細胞兩個亞群袁一般采用抗體檢測相應T細胞的總數。許多先天性或后天性疾病均可導致輔助性T細胞下降。在免疫功能異常的患者中CD4 T細胞可減少袁而CD8細胞可增多袁因此CD4/CD8比值可作為評價患者細胞免疫功能的主要指標[13-15]。不同于T淋巴細胞袁NK細胞由骨髓造血干細胞直接分化發育而來袁其在骨髓微環境中發育成熟袁與胸腺無關袁因此其被稱為第三類淋巴細胞[16]。NK細胞具有細胞體積大的特點袁其內還含有嗜苯胺顆粒袁該顆粒中具有穿孔素袁可直接溶解破壞靶細胞。此外袁其還可激活內源性內切酶系統袁通過裂解靶細胞DNA導致細胞凋亡。因此袁NK細胞在細胞免疫中也發揮著重要作用袁NK細胞比例堯活性在判斷細胞免疫功能方面具有重要意義。

本研究中發現袁腹膜透析與血液透析均會使患者CD4 T淋巴細胞堯CD8 T淋巴細胞堯CD4/CD8堯Treg細胞比例袁NK細胞比例堯活性顯著改善(P<0.05)袁且行血液透析患者改善更為顯著(P<0.05)。這一結果提示腹膜透析和血液透析都能有效改善患者病情袁而腹膜透析相對于血液透析療效更好。孫續祿[17]在研究血液透析對尿毒癥患者T細胞亞群的影響中指出袁尿毒癥患者均有不同程度的T細胞亞群比例異常袁相對于未行透析治療的患者袁行血液透析患者T細胞亞群比例更為接近正常水平袁提示透析可一定程度上改善患者T細胞亞群比例袁但無法使患者T細胞功能恢復至正常水平。通過閱讀相關文獻[18-20]以及結合臨床實際工作袁本研究認為透析對于患者免疫功能的影響主要表現在以下幾個方面：淤透析治療可有效清除患者血清中的毒素袁從而改善甲狀旁腺功能亢進狀態袁降低了血清中淋巴細胞抑制物濃度曰于透析可改善患者體內鈣磷代謝紊亂狀態袁改善其對于吞噬細胞的聚集抑制曰盂透析規律治療后袁患者腎性貧血狀態可得到有效的改善袁紅細胞數目可有明顯增加袁而紅細胞也具有一定的免疫功能袁同時也可參與到淋巴細胞的免疫調控中袁增強細胞免疫功能。本研究中行血液透析對于改善患者免疫功能的效果不如腹膜透析患者袁推測這可能與腹膜透析不間斷持續性透析有關[21-22]。腹膜透析可持續清除終末期腎病患者體內毒素袁且不存在血液透析過程中慢性失血的問題袁更有利于改善貧血狀態。因此袁腹膜透析更有利于患者細胞免疫功能的恢復袁具體機制尚需進一步的研究證實。

綜上所述袁腹膜透析和血液透析可一定程度上調節終末期腎病患者NK細胞和T細胞亞群比例袁改善細胞免疫功能袁但無法使患者恢復至正常水平。

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Effect of peritoneal dialysis and hem odialysis on NK cell and T cell subsets in patientsw ith end-stage renal disease

WANG Jinghua1LIU Yu1ZHAO Fenglong2YANG Jie1
1.Department of Nephrology,Norman Bethune International Peace Hospital of PLA,Hebei Province,Shijiazhuang 050000,China;2.Department of Internal Medicine,Wuyi County Hospital of Hengshui City,Hebei Province,Hengshui 053400,China

Ob jective To investigate the effect of peritoneal dialysis and hemodialysis on NK cell and T cell subsets in patients with end-stage renal disease.M ethods From February 2012 to February 2014,in Department of Nephrology, Norman Bethune International Peace Hospital of PLA,88 patients with end-stage renal diseasewere divided into peri鄄toneal dialysis groups(44 cases,given continuous ambulatory peritoneal dialysisand)and hemodialysis group(44 cases, given conventional hemodialysis treatment),according to dialysismethods.Before dialysis and after dialysis 6 months, flow cytometry was used to detect CD4 T cell,CD8 T cell and CD4/CD8,Treg cells proportion and NK cells proportion in two groups,the activity of NK cellswas detected by MTTmethod.Results Before treatment,the CD4 T lymphocytes, CD8 T lymphocytes,CD4/CD8,Treg cells proportion,NK cells proportion and activity,of peritoneal dialysis group and hemodialysis group respectively were(30.05依3.96)%,(25.13依3.14)%,(1.42依0.25),(5.96依1.95)%,(11.5依1.6)%,(80.6依5.6)%and(30.86依3.54)%,(24.25依3.40)%,(1.39依0.29),(5.82依2.06)%,(11.8依1.7)%,(78.6依5.3)%,there were no statisti鄄cally significant differences between two group(P>0.05).After 6months of treatment,the CD4 T lymphocytes,CD8 T lymphocytes,CD4/CD8,Treg cells proportion,NK cells proportion and activity of peritoneal dialysis group and hemodialysis group respectively were(25.32依2.41)%,(26.42依3.78)%,(1.25依0.16),(4.33依1.45)%,(8.6依1.1)%,(56.7依4.4)%and(19.88依2.68)%,(26.16依3.74)%,(1.05依0.25),(3.15依1.05)%,(6.4依0.8)%,(44.5依3.8)%,both two groups im鄄proved significantly than before the treatmnet,the differenceswere statistically significant(P<0.05);and the hemodialy鄄sis group improved more obviously than peritoneal dialysis group,the differences were statistically significant(P< 0.05).Conclusion Peritoneal dialysis and hemodialysis can both adjust the NK cell and T cell subsets in patients with ESRD,improve the cellular immune function,and the effect of peritoneal dialysis ismore significant.

End-stage renal disease;Peritoneal dialysis;Hemodialysis;NK cell;T cell

R459.5

A[文獻標識碼]1673-7210（2015）06（c）-0047-04

2015-03-15本文編輯：蘇暢)