結(jié)核菌快速培養(yǎng)法與γ-干擾素釋放試驗(yàn)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價(jià)值

王 馨

結(jié)核菌快速培養(yǎng)法與γ-干擾素釋放試驗(yàn)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價(jià)值

王 馨

目的探討結(jié)核菌快速培養(yǎng)法與γ-干擾素釋放試驗(yàn)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法選擇2013年11月至2014年7月在我院進(jìn)行檢查的與結(jié)核病密切接觸者180例，均進(jìn)行結(jié)核菌快速培養(yǎng)法與γ-干擾素釋放試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)核桿菌，以結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果為對(duì)照，分析兩種檢測(cè)方法結(jié)核桿菌陽性檢出率的敏感性及特異性，并分析導(dǎo)致結(jié)核菌快速培養(yǎng)法誤診的危險(xiǎn)因素。結(jié)果結(jié)核菌快速培養(yǎng)法和γ-干擾素釋放試驗(yàn)結(jié)核菌檢出陽性率分別是13.3% 和16.1%，兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。以結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)核菌快速培養(yǎng)法和γ-干擾素釋放試驗(yàn)的診斷敏感性分別為70.0%和96.7%，特異性分別為98.0%和100.0%。γ-干擾素釋放試驗(yàn)的診斷敏感性明顯高于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。logistic多元回歸分析表明年齡和既往結(jié)核史是導(dǎo)致結(jié)核菌快速培養(yǎng)法誤診的主要因素 (P＜0.05)。結(jié)論相對(duì)于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，γ-干擾素釋放試驗(yàn)結(jié)核病診斷的敏感性更高。

結(jié)核菌快速培養(yǎng)法;γ-干擾素釋放試驗(yàn);結(jié)核病

結(jié)核病(tuberculosis，TB)是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染性疾病，其中分枝桿菌由結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群和非結(jié)核分枝桿菌組成，最重要的種類當(dāng)屬結(jié)核分枝桿菌［1，2］。目前全世界活動(dòng)性結(jié)核病患者達(dá)2 000萬人，每年因此病死 200 ～300 萬人［3，4］。我國活動(dòng)性肺結(jié)核患者約有450萬人，年均死亡約13萬人［5］。因此，快速準(zhǔn)確檢測(cè)結(jié)核菌感染極為重要。結(jié)核菌快速培養(yǎng)法是集分枝桿菌快速培養(yǎng)、檢測(cè)及藥敏技術(shù)為一體的全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)系統(tǒng)，廣泛用于結(jié)核診斷和臨床鑒別診斷，但其確診時(shí)間需3～4周;PCR檢測(cè)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)便和快速等優(yōu)點(diǎn)，但其對(duì)于設(shè)備的要求較高，檢查費(fèi)用也較貴［6］。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，γ-干擾素釋放試驗(yàn)(interferon gamma release assay，IGRA)作為用于診斷結(jié)核分枝桿菌潛伏感染的新方法正在逐漸被廣泛使用，其主要通過檢測(cè)外周血單核細(xì)胞在結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激下釋放γ-干擾素的水平［7，8］。本文對(duì)比分析了結(jié)核菌快速培養(yǎng)法與IGRA檢測(cè)結(jié)核桿菌的陽性檢出率和診斷效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年11月至2014年7月在我院檢查的與結(jié)核病密切接觸者180例，其中男性108例，女性72例;年齡32～78歲，平均(45.34±2.19)歲;與結(jié)核病患者密切接觸時(shí)間3～15年，平均為(6.45±0.45)年;平均受教育年限為(11.87±2.22)年。臨床表現(xiàn):咯血112例，支氣管擴(kuò)張43例，合并肺不張44例，咳嗽109例，胸悶45例，氣促23例;平均體溫(38.31±2.34)℃。納入標(biāo)準(zhǔn):與結(jié)核病患者一起生活時(shí)間≥3年;年齡≥14歲;臨床出現(xiàn)咳嗽咳痰超過2周，伴或者不伴呼吸急促、胸痛、咯血、消瘦、厭食、發(fā)熱;針對(duì)目前病情已進(jìn)行診斷性抗結(jié)核治療超過1月;且知情同意者。排除標(biāo)準(zhǔn):HIV陽性患者;合并嚴(yán)重并發(fā)癥(惡性腫瘤、心臟疾病)等;存在明確的免疫抑制或者免疫低下病史;服用了影響本文檢測(cè)結(jié)果的藥物。

1.2 檢查方法 結(jié)核菌快速培養(yǎng)法:選擇BACT/Alert 3D結(jié)核菌快速培養(yǎng)儀器，選擇患者的痰標(biāo)本，以1∶3的比例加入消化液，漩渦振蕩器振蕩5～10 min，3 000 r/min，離心15 min，取沉淀用PBS重懸，融入儀器進(jìn)行培養(yǎng)與鑒定，干燥后光學(xué)顯微鏡下鏡檢。以致病菌分離出濃度≥105cFu/mL為陽性。IGRA:使用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行檢測(cè)，試劑盒為結(jié)核桿菌特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)監(jiān)測(cè)試劑盒(海口維瑅璦生物研究所提供)，收集每位受試者外周靜脈血3～4 mL，將血漿樣品和γ-干擾素檢測(cè)部分于室溫下(22±5℃)平衡至少30 min，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測(cè)抗體工作液、親和素-辣根過氧化物酶工作液及洗滌液，嚴(yán)格按照試劑盒步驟進(jìn)行檢測(cè)，使用酶標(biāo)儀在450 nm處讀取相應(yīng)OD值。根據(jù)OD值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到T(檢測(cè)值)，根據(jù)樣品的N(陰性對(duì)照)、P(陽性對(duì)照)OD值計(jì)算(P-N)及(T-N)值。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 以結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，大于1.0×103拷貝/mL判定為陽性。結(jié)核菌快速培養(yǎng)法陽性標(biāo)準(zhǔn):以致病菌分離出濃度≥105cFu/mL為陽性。γ-干擾素釋放試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn):N＜0.5 IU/mL時(shí)，(TN)/(P-N)≥0.60時(shí)為陽性，否則為陰性;N≥0.5 IU/mL時(shí)，(T-N)/(P-N)≥0.85 A時(shí)為陽性，否則為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 選擇SPSS 14.0進(jìn)行數(shù)據(jù)的錄入與分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，因素分析選擇多因素logistic多元回歸分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 陽性檢出率對(duì)比 經(jīng)過觀察，結(jié)核菌快速培養(yǎng)法檢出陽性24例，檢出率為13.3%，IGRA檢出陽性29例，檢出率為16.1%，IGRA檢出陽性率高于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。詳見表1。

表1 結(jié)核菌快速培養(yǎng)法與γ-干擾素釋放試驗(yàn)的陽性檢出率對(duì)比(n)

2.2 診斷效果對(duì)比 以結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，判定陽性共30例，陰性共150例;以結(jié)核菌快速培養(yǎng)法判定陽性24例，陰性156例;IGRA判定的陽性29例，陰性151例。因此可得結(jié)核菌快速培養(yǎng)法檢的診斷敏感性(檢測(cè)陽性數(shù)/金標(biāo)準(zhǔn)陽性數(shù))為70.0%，特異性(檢測(cè)陰性數(shù)/金標(biāo)準(zhǔn)陰性數(shù))為98.0%;IGRA的診斷敏感性為96.7%，特異性為100.0%。IGRA的診斷敏感性明顯高于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.94，P＜0.05)。兩組特異性比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.411，P ＞0.05)。

2.3 誤診分析 IGRA誤診的1例是由于標(biāo)本量太少，提取不到足夠的細(xì)胞數(shù)量，導(dǎo)致漏診斷。而通過logistic多元回歸分析，本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致結(jié)核菌快速培養(yǎng)法誤診的因素主要為年齡、既往結(jié)核史(P＜0.05)。詳見表2。

表2 導(dǎo)致結(jié)核菌快速培養(yǎng)法誤診的因素

2.4 病例分析 患者王某某，男性，漢族，45歲，患者于2010年曾患肺結(jié)核，2012年治愈。家中母親長(zhǎng)期患有結(jié)核疾病，且共同居住，2014年1月患者無誘因出現(xiàn)咳嗽，以干咳為主伴少量白色稀薄液，存在發(fā)熱、乏力等臨床癥狀，并出現(xiàn)間斷咯血。在結(jié)核菌快速培養(yǎng)法中，檢查為陰性結(jié)果，予以止血與抗生素治療，效果欠佳。后采用IGRA診斷為結(jié)核病陽性，給予抗癆支持治療，INH 0.4 g 1次/日，RFP 0.45 g 1次/日，PZA 1.5 g 1次/日，SM 0.75 g 1次/日，治療2周后癥狀緩解，無藥物不良反應(yīng)后出院。

3 討論

結(jié)核病是目前世界上首要的感染性疾病，是全球關(guān)注的公共衛(wèi)生和社會(huì)問題，我國為結(jié)核病高負(fù)擔(dān)、高危險(xiǎn)性的國家［9］。肺結(jié)核的病原菌主要為結(jié)核分枝桿菌，不過隨著獲得性免疫缺陷綜合征(ADIS)的出現(xiàn)，醫(yī)源性免疫抑制的發(fā)生率增高，非結(jié)核分枝桿菌疾病發(fā)生率也在不斷增加，為了保持結(jié)核疾病診斷的一致性，本文選擇的患者都為結(jié)核分枝桿菌感染引起的結(jié)核病患者。在診治中，肺結(jié)核患者起病初期常合并一般細(xì)菌感染，可因漏診或者抗感染力度不足而加重病情。主要由于肺結(jié)核患者細(xì)胞免疫功能降低，容易引起條件致病菌感染［10］。

結(jié)核菌快速培養(yǎng)是目前常用的結(jié)核菌培養(yǎng)系統(tǒng)，該系統(tǒng)能進(jìn)行多種標(biāo)本的結(jié)核菌培養(yǎng)，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)陽性可以及時(shí)通知臨床，必要時(shí)立即加做藥敏，可大大縮短了報(bào)告時(shí)間［11］。但該方法存在許多不足之處，其敏感性不高，不能排除潛伏性結(jié)核感染影響，造成特異性也有所降低［12］。而近年來新出現(xiàn)的檢測(cè)受檢者全血或外周血單個(gè)核細(xì)胞對(duì)結(jié)核分枝桿菌特異抗原的γ-干擾素釋放反應(yīng)，已被應(yīng)用于結(jié)核分枝桿菌潛伏感染的診斷。γ-干擾素釋放反應(yīng)技術(shù)的應(yīng)用無疑大大縮短了實(shí)驗(yàn)周期，且操作簡(jiǎn)便［13］。本文結(jié)核菌快速培養(yǎng)法檢出陽性24例，檢出率為13.3%，IGRA檢出陽性29例，檢出率為16.1%，IGRA檢出陽性率高于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)核菌快速培養(yǎng)法的診斷敏感性明顯高于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。不過在漏診中，也可能出現(xiàn)操作不規(guī)范，破壞了細(xì)胞完整性，導(dǎo)致診斷效果不好。另外，檢測(cè)系統(tǒng)的靈敏度，特異性及重復(fù)性也影響著檢出的質(zhì)量［14］。

我們通過二分類logistic多元回歸分析，發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致結(jié)核菌快速培養(yǎng)法誤診的因素主要為年齡、既往結(jié)核史(P＜0.05)。當(dāng)患者既往曾患活動(dòng)性結(jié)核，即使當(dāng)時(shí)己治愈，仍有可能遺留有細(xì)胞免疫記憶，從而可能造成結(jié)核菌快速培養(yǎng)法假陽性。而年齡越大，既往暴露于結(jié)核分枝桿菌的機(jī)會(huì)越高，從而可能造成結(jié)核菌快速培養(yǎng)法假陽性［15］。另外肺結(jié)核病灶引起呼吸道結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，使支氣管引流不暢，深部痰液不易排出。但在我國這種高卡介苗接種率和高結(jié)核感染率的國家，兩種方法檢測(cè)的穩(wěn)定性和應(yīng)用價(jià)值還有待進(jìn)一步研究［16］。

總之，相對(duì)于結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，γ-干擾素釋放試驗(yàn)在結(jié)核病診斷中的臨床應(yīng)用具有好的檢出率，其敏感性更高，值得推廣應(yīng)用。

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The clinical values of TB rapid culture method and γ-interferon release assay in diagnosis of tuberculosis

Wang Xin
Department of Clinical Laboratory，the Fourth People's Hospital of Qinghai Province，Xining 810000，China

ObjectiveTo investigate the clinical values of TB rapid culture method and γ-interferon release assay in the diagnosis of tuberculosis.MethodsA total of 180 close contact cases with tuberculosis from November 2013 to July 2014 in our hospital were selected and given the rapid TB culture and γ-interferon release assay，then the risk factors for misdiagnosis were analysed.ResultsThe detection positive rate of the TB rapid culture method and γ-interferon release assay was respectively 13.3%and 16.1% ，and the difference had no statistical significance(P＞0.05).With mycobacterium tuberculosis sputum culture results as the gold standard，the sensitivity of the TB rapid culture method and γ-interferon release assay was respectively 70.0%and 96.7%，and the specificity was 96.7%and 100.0%.The diagnostic sensitivity of the γ-interferon release assay was significantly higher than that of the rapid culture method(P ＜0.05).Logistic regression analysis showed that the factors leading to TB rapid culture method misdiagnosis were mainly age and previous history of tuberculosis(P＜0.05).ConclusionCompared with TB rapid culture，γ-interferon release assay in the diagnosis of tuberculosis in clinical applications has better detection rate and higher sensitivity.

TB rapid culture;γ-interferon release assay;Tuberculosis

10.3969/j.issn.1000 －0399.2015.05.027

810000 西寧 青海省第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

(2015－01－11收稿 2015－04－15修回)