麻仁潤腸軟膠囊特征圖譜研究及苦杏仁氣相鑒別

王枚博， 毛秀紅， 王 柯， 季 申

（上海市食品藥品檢驗(yàn)所，上海201203）

麻仁潤腸軟膠囊特征圖譜研究及苦杏仁氣相鑒別

王枚博， 毛秀紅， 王 柯， 季 申*

（上海市食品藥品檢驗(yàn)所，上海201203）

目的建立麻仁潤腸軟膠囊 （火麻仁、苦杏仁、大黃、木香、陳皮、白芍）高效液相色譜特征圖譜，并建立氣相色譜法用于鑒別其中的苦杏仁成分。方法以大黃素為參照物，采用Zorbax SB-C18色譜柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈為流動(dòng)相A，0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫，檢測(cè)波長210 nm，建立麻仁潤腸軟膠囊的特征圖譜；以苯甲醛和苦杏仁對(duì)照藥材為對(duì)照品，采用聚乙二醇20000毛細(xì)管柱 （30 m×0.25 mm，0.25μm）來鑒別其中的苦杏仁成分。結(jié)果高效液相色譜中有13個(gè)特征峰，并確定了其中7個(gè)；氣相色譜中鑒別出苯甲醛，而且空白樣品 （缺苦杏仁）無干擾。結(jié)論該方法專屬性強(qiáng)，可用于麻仁潤腸軟膠囊的質(zhì)量控制。

麻仁潤腸軟膠囊；特征圖譜；苦杏仁；鑒別；氣相色譜法；高效液相色譜法

麻仁潤腸軟膠囊為北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠獨(dú)家生產(chǎn)的品種，全方由火麻仁、苦杏仁 （去皮炒）、大黃、木香、陳皮、白芍六味藥組成，功效潤腸通便，主治大腸積熱、津液不足所致的大便秘結(jié)，胸腹脹滿。目前，該藥收載于國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn) （新藥試行標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)正式標(biāo)準(zhǔn)）WS3-050（Z-009）-2002Z［1］，規(guī)定了大黃、陳皮、白芍的薄層鑒別以及大黃中大黃素的定量測(cè)定，但對(duì)苦杏仁鑒別和特征圖譜則未作規(guī)定。文獻(xiàn)報(bào)道［2-7］，苦杏仁鑒別大多以苦杏仁苷對(duì)照品或苦杏仁對(duì)照藥材為參照，但上述方法并不適用于麻仁潤腸軟膠囊，因?yàn)榭嘈尤受战?jīng)自身酶或酸水解后可產(chǎn)生苯甲醛［8-11］。本實(shí)驗(yàn)以苯甲醛和苦杏仁為對(duì)照品和對(duì)照藥材，建立了麻仁潤腸軟膠囊中的苦杏仁氣相鑒別方法。另外，中藥特征圖譜是中藥整體性的化學(xué)表征，是近年來研究熱點(diǎn)，而HPLC法具有高效、快速、靈敏、重現(xiàn)性好、應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)，已成為首選方法［12］。因此，本實(shí)驗(yàn)又以大黃素為參照物，建立了麻仁潤腸軟膠囊的HPLC特征圖譜，為其質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 6890N型氣相色譜儀（包括FID檢測(cè)器）、1260型高效液相色譜儀 （包括DAD檢測(cè)器）（美國Agilent公司）；B5500S-MT型超聲波清洗器（美國Branson公司）；5810R型離心機(jī)（德國Eppendof公司）。

1.2 試劑 苯甲醛對(duì)照品 （批號(hào)11650-200301）、苦杏仁苷對(duì)照品 （批號(hào)110820-200403）、木香烴內(nèi)酯對(duì)照品 （批號(hào)111524-200503）、去氫木香烴內(nèi)酯對(duì)照品 （批號(hào)1525-200102）、大黃素對(duì)照品（批號(hào) 110756-200110）、大黃酸對(duì)照品 （批號(hào)0757-9804）、大黃酚對(duì)照品 （批號(hào) 110796-200309）、蘆薈大黃素對(duì)照品 （批號(hào) 110795-200806）、橙皮苷對(duì)照品 （批號(hào)110721-200211）、芍藥苷對(duì)照品 （批號(hào)110736-201035）、α-亞麻酸對(duì)照品 （批號(hào)111631-200502）、苦杏仁對(duì)照藥材（批號(hào) 121554-200601）、木香對(duì)照藥材 （批號(hào)120921-200506）、大黃對(duì)照藥材 （批號(hào)1212149-200402）、陳皮對(duì)照藥材 （批號(hào)120969-201109）、白芍對(duì)照藥材 （批號(hào)120905-200407）、火麻仁對(duì)照藥材 （批號(hào)121097-200402），均購于中國食品藥品檢定研究院；乙醚、乙腈均為色譜純 （德國Merck公司）；水為超純水，經(jīng)Molcel超純水儀制得；其余試劑均為分析純 （國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.3 試藥 麻仁潤腸軟膠囊 （批號(hào)0173480、1172321、12177561、1175471，自編號(hào) 1、2、3、 4）、空白樣品 （缺苦杏仁），均由北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠提供。

2 方法和結(jié)果

2.1 特征圖譜

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Zorbax SB-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；乙腈為流動(dòng)相A，0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫 （0～30 min，10% A→40%A；30～40 min，40%A→90%A；40～50 min，90%A）；柱溫30℃；體積流量1.0 mL/min；檢測(cè)波長210 nm；進(jìn)樣量20μL。

2.1.2 參照物溶液制備 精密稱取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇溶解，制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得參照物溶液。

2.1.3 對(duì)照品溶液制備 精密稱取苦杏仁苷對(duì)照品、木香烴內(nèi)酯對(duì)照品、去氫木香烴內(nèi)酯對(duì)照品、大黃酸對(duì)照品、大黃酚對(duì)照品、蘆薈大黃素對(duì)照品、橙皮苷對(duì)照品、芍藥苷對(duì)照品、α-亞麻酸對(duì)照品適量，分別加甲醇溶解，制成每1 mL含2mg的溶液，即得對(duì)照品溶液；精密稱取苦杏仁對(duì)照藥材、木香對(duì)照藥材、大黃對(duì)照藥材、陳皮對(duì)照藥材、白芍對(duì)照藥材、火麻仁對(duì)照藥材1 g，按“2.1.4”項(xiàng)下方法分別制備，即得對(duì)照藥材溶液。

2.1.4 供試品溶液的制備 精密稱取麻仁潤腸軟膠囊內(nèi)容物2 g，加70%乙醇10 mL溶解，超聲處理30 min，4 000 r/min離心5min，取上清液，即得供試品溶液。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液（批號(hào)0173480）20μL，按 “2.1.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，并以大黃素為參照物峰，計(jì)算各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果，各特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于0.2%，表明儀器精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液（批號(hào)0173480）20μL，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，并以大黃素為參照物峰，計(jì)算各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果，各特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于0.5%，表明供試品溶液于24 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取供試品 （批號(hào)0173480）內(nèi)容物6份，按 “2.1.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，然后精密吸取其中20μL分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，并以大黃素為參照峰，計(jì)算各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果，各特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于0.3%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.8 特征圖譜的建立 分別精密吸取參照物溶液和供試品溶液各20μL，按 “2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄50 min時(shí)的色譜圖，即得特征圖譜。通過綜合比較4個(gè)不同批號(hào)麻仁潤腸軟膠囊的供試品色譜圖，標(biāo)定13個(gè)共有峰作為其特征峰，見圖1。以大黃素參照物相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算其余12個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間，見表1。同時(shí)，其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±5%以內(nèi)，規(guī)定值為：0.100（峰1）、0.112（峰2）、0.314（峰3）、0.423（峰 4）、0.457（峰 5）、0.622（峰 6）、0.684（峰 7）、0.902（峰 8）、0.926（峰 9）、1.000（峰S）、1.072（峰10）、1.156（峰11）、1.227（峰12）。以大黃素參照物相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算其余12個(gè)特征峰的峰面積，見表2，其峰面積RSD為0.05%～2.64%。

圖1 麻仁潤腸軟膠囊特征圖譜Fig.1 Specific chromatogram of M aren Runchang Soft Capsules

表1 特征圖譜中特征峰的相對(duì)保留時(shí)間Tab.1 Relative retention time of specific peaks in specific chromatogram

表2 特征圖譜中特征峰的峰面積Tab.2 Peak area of specific peaks in specific chromatogram

2.1.9 特征峰歸屬 分別精密吸取參照物溶液、對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材溶液和供試品溶液各20μL，按 “2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄50 min的色譜圖，即得特征峰。與對(duì)照品和對(duì)照藥材比對(duì)，并結(jié)合DAD光譜，確定3號(hào)峰為芍藥苷峰，5號(hào)峰為橙皮苷峰，8號(hào)峰為蘆薈大黃素峰，9號(hào)峰為大黃酸峰，10號(hào)峰為大黃酚峰，11號(hào)峰為α-亞麻酸峰。

2.2 苦杏仁氣相色譜鑒別

2.2.1 色譜條件 色譜柱為聚乙二醇20000毛細(xì)管柱 （30m×0.25 mm，0.25μm）；柱溫為程序升溫：初始溫度為80℃，保持20 min，之后以100℃/min的速率升溫至200℃，保持5 min；分流進(jìn)樣，分流比5∶1；進(jìn)樣量1μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取苯甲醛對(duì)照品適量，加乙醚溶解，制成每1 mL含0.02μL的溶液，即得對(duì)照品溶液；精密稱取取苦杏仁對(duì)照藥材0.5 g，按 “2.1.3”項(xiàng)下方法制備，即得對(duì)照藥材溶液。

2.2.3 供試品溶液制備 精密稱取麻仁潤腸軟膠囊內(nèi)容物2 g，加乙醚10 mL溶解，超聲處理30 min，4 000 r/min離心5 min，取上清液，即得供試品溶液。

2.2.4 空白樣品（缺苦杏仁）溶液制備 精密稱取空白樣品 （缺苦杏仁）2 g，按 “2.2.3”項(xiàng)下方法制備，即得空白樣品 （缺苦杏仁）溶液。

2.2.5 結(jié)果 在供試品色譜中，均呈現(xiàn)出與苯甲醛對(duì)照品和苦杏仁對(duì)照藥材色譜峰保留時(shí)間相同的峰，而且空白樣品 （缺苦杏仁）無干擾，見圖2。

圖2 苦杏仁氣相鑒別圖Fig.2 GC identification chromatogram s of bitter ap ricot seed

2.2.6 耐用性試驗(yàn) 分別選用HP-INNOWax（30 m×0.25 mm，0.25μm）、DB-WAX（30 m×0.53 mm，0.25μm）和ZB-WAX plus色譜柱（30 m× 0.32mm，1.00μm）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)保留時(shí)間適中，均能獲得良好的分離效果，故選擇聚乙二醇20000毛細(xì)管柱作為色譜柱。

3 討論

3.1 特征圖譜提取溶劑考察 分別考察了30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、無水乙醇、甲醇的提取效果。結(jié)果顯示，在5種提取溶劑中，70%乙醇和甲醇提取得到的供試品溶液色譜峰多于其他溶劑，從環(huán)保角度考慮，最終選擇70%乙醇作為提取溶劑，見圖3。

圖3 特征圖譜提取溶劑考察Fig.3 Investigation of extraction solvent for specific chromatogram

3.2 特征圖譜檢測(cè)波長考察 麻仁潤腸軟膠囊中有效成分的最大吸收波長多在210～240 nm之間，故分別選取210、220、230、240 nm作為檢測(cè)波長，考察供試品溶液的出峰情況。結(jié)果顯示，在210 nm下，供試品溶液色譜峰最多，故選擇210 nm作為檢測(cè)波長，見圖4。

3.3 苦杏仁氣相鑒別 本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以苦杏仁苷對(duì)照品或苦杏仁對(duì)照藥材為參照，采用薄層色譜法鑒別麻仁潤腸軟膠囊中的苦杏仁時(shí)，樣品斑點(diǎn)不清晰。文獻(xiàn)［8］報(bào)道，苦杏仁苷經(jīng)自身酶或酸水解后可產(chǎn)生苯甲醛，而苯甲醛具有揮發(fā)性，因此最終確定采用氣相色譜法［13-16］建立苦杏仁鑒別方法。另外，苯甲醛遇光和空氣易氧化為苯甲酸，因此檢測(cè)過程中應(yīng)盡量采用棕色玻璃器皿，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)盡可能當(dāng)天完成，苯甲醛對(duì)照品溶液應(yīng)當(dāng)天使用當(dāng)天配制［8］。

圖4 特征圖譜檢測(cè)波長考察Fig.4 Investigation of detection wavelength for specific chrom atogram

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Specific chrom atogram research and GC identification of bitter apricot seed in M aren Runchang Soft Capsules

WANG Mei-bo， MAO Xiu-hong， WANG Ke， JIShen*
（Shanghai Institute of Food and Drug Control，Shanghai 201203，China）

AIMTo establish HPLC specific chromatogram of Maren Runchang Soft Capsules（MRRCSC）（Cannabis Fructus，Armeniacae Semen amarum，Rhei Radix of Rhizoma，Aucklandiae Radix，Citri reticulate pericarpium，Paeonia Radix alba）and GC identification of bitter apricot seed（Armeniacae Semen amarum）.METHODSWith emodin as a reference，specific chromotogram was carried outon a Zorbax SB-C18（250mm× 4.6 mm，5μm）column with 210 nm as detection wavelength，which gradiently eluted with acetonitrile asmobile phase A and 0.1%phosphoric acid solution asmobile phase B.GCmethod of identifying bitter apricot seed was performed on PEG-200M（30 m×0.25 mm，0.25μm）column with benzaldehyde and bitter apricot seed as the reference substances.RESULTSThe HPLC chromatogram comprised thirteen common characteristic peaks，seven peaks ofwhich were identified.The chromatographic peak of benzaldehyde was found in the GC chromatogram，and there was no foreign substance in blank sample（lack of bitter apricot seed）.CONCLUSIONThe HPLC and GCmethod ofMRRCSC is specific for identification ofMaren Runchang Soft Capsules，which could be applied to the quality control.

Maren Runchang Soft Capsules；specific chromatogram；bitter apricot seed；identification；GC；HPLC

R284.1

：A

：1001-1528（2015）06-1262-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.06.022

2014-08-11

2010—2011年度國家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高研究課題項(xiàng)目 （320）。

王枚博 （1981—），男，主管藥師，從事食品藥品質(zhì)量控制與元素分析工作。Tel：（021）38839900-26604，E-mail：wangmb99@163.com

*通信作者：季 申 （1963—），女，主任藥師，從事中藥的有效性和安全性及質(zhì)量控制方法研究。Tel：（021）50798195，E-mail：jishen2008@gmail.com