HSV-2對血管內皮樣細胞ECV304的致病特性

田麗茹

（黑龍江省杜爾伯特蒙古族自治縣腰新鄉衛生院，黑龍江　大慶　166200）

HSV-2對血管內皮樣細胞ECV304的致病特性

田麗茹

（黑龍江省杜爾伯特蒙古族自治縣腰新鄉衛生院，黑龍江大慶166200）

通過對單純皰疹病毒2型（HSV-2）進行研究，探討其血管內部的皮樣細胞-ECV304的致病特性，并在實驗室環境下使得HSV-2對血管內部的皮樣細胞ECV304進行感染，從而對其進行細致的觀察。通過觀察可知，在HSV-2感染管內部的皮樣細胞ECV304一天時間內，能夠檢查到潛伏的有關轉錄體基因發生感染現象。在經歷感染后的第二天時間，可以發現細胞開始出現病變現象，可以得出，HSV-2對血管內部的皮樣細胞ECV304具有較強的感染性，從而對ECV304產生破壞作用

HSV-2；血管內皮樣細胞ECV304；細胞；病變

HSV-2屬于α皰疹病毒類型，大部分在新生兒感染和外生殖器的感染中出現［1］。通過最近幾年研究發現其和宮頸癌的發生有著較多的聯系。而血管內皮樣細胞ECV304屬于具有較強增殖活性的一種細胞，和腫瘤等相關病癥有著一定的相似性，所以通過使HSV-2對ECV304進行感染，從而可以研究HSV-2在人體內引發細胞感染的因素，為未來的實際治療工作做好鋪墊。

1　材料與方法

1.1病毒、細胞與相關使用試劑

廣東第一醫院提供了HSV-2，而西南醫院腎內科實驗室則提供了血管內皮樣細胞ECV304。通過杭州的相關生物制品公司購買了胎牛血清，通過武漢博士德生物有限公司購買了羊抗鼠二抗等相關試驗必備用品。

1.2對細胞的培養和病毒接種工作

把HSV-2病毒接種到Vero的細胞里，在經過6天后對其進行滴度測試。將ECV304按照正常的培養方式進行培養，并將其接種到胎牛血清的MEM生長的培養基中，等到實際成熟時，將HSV-2在36℃的環境下安放1 h，在放入牛血清培養基中急性培養，并且從第二天開始每隔1天進行1次細胞對照試驗，這個過程可以利用高倍顯微鏡和高清數碼相機進行拍攝［2］。

1.3LAT基因蛋白的檢查工作

通過運用間接免疫熒光法對LAT蛋白進行檢測。具體而言，在六個孔板內插入ECV304的細胞蓋玻片，在進行感染試驗的1 h后，將2%多聚甲醛同0.1%的X-100的溫度穩定30 min，并用1/5的養血清進行PBS稀釋，20 min稀釋3次，再通過熒光顯微鏡進行觀察

1.4HSV-2對ECV304生長的影響

運用MTT對HSV-2對ECV304生長的影響進行測量，當細胞形成單層的時候，就將病毒放入懸液中放在36℃的培養箱中進行培養，并用具有PBS的洗液洗滌2次，后去除舊液，進行搖晃，并且用EL340酶聯免疫儀測量每孔的OD數值，測量16次，運用相關軟件，進行測驗。

2　結果與分析

2.1對GADPH和LAT基因的相關測試

運用RT-PCR擴增GADPH和LAT基因進行測試，從而可知，當感染體感染后，會增加約148 bp的特異性條帶，而且呈陰性。而受感染的血管內部的皮樣細胞ECV304則增加約485 bp。

2.2經受HSV-2感染的ECV304觀測

當ECV304受到HSV-2感染后，相關細胞逐漸發生病變反應，具體說來就是細胞會逐漸擴增，并且發生核膜位移變化，而接種兩天后，其感染加劇，細胞核破裂，在第四天后，發生細胞脫落現象，多核細胞破裂。

2.3電鏡下感染的ECV304形態

通過電鏡對受到HSV-2感染的ECV304進行觀察可以發現，開始階段對比細胞核正常，并且細胞的膜和核膜都是具有整體性，核仁較為清晰，染色質無異常現象；而在ECV304感染半天后，ECV304細胞開始逐漸發生變化，細胞之間開始互相融合，并且可以發現較為顯著的空泡現象，期內有一些沒有成熟的病毒分子；在ECV304感染一天后，可以發現多核巨細胞，并且對照組的線粒體結構較為明顯，受到感染的細胞體出現空泡化現象、自噬化現象［3］。

3　結 論

在臨床醫學中，宮頸癌、動脈硬化是較為常見的疾病，雖然我國目前醫學水平已經取得了極大的進步，但是對于這些疾病的病因還不了解。血清流行病相關專家通過研究發現HSV-2和宮頸癌、動脈硬化有著較為密切的關系，在本文的試驗中，通過對受感染的細胞進行測試，可以發現ESC-2缺失可以使得ECV304受到感染，而且可以存活和繁衍，使受到感染的細胞感染程度加劇，在宿主體內逐漸變多，從而影響宿主的生命健康［4］。

通過具體的試驗可以發現，當血管內部的皮樣細胞ECV304受到HSV-2感染后，會使得ECV304受到改變，通過改變可以使得次集體逐漸產生抗體，而抗體則可以和皮內細胞的抗原互相結合，從而使補體激活，進而使得皮內細胞受損。而對病毒的增殖曲線進行研究可以發現由于HSV-2的自我繁殖，使得具有感染性病毒的顆粒出現，它的出現既可以讓血管局部區域得到病毒滴度上升，從而為病毒進入周圍的實質細胞提供便利，也可以讓ECV304的新陳代謝功能產生變異。

在這次試驗中通過對受到感染后的ECV304進行研究，可以發現細胞的具體變化程度，這表明HSV-2對于ECV304具有較為直接的影響，HSV-2作為重要的感染因素，一旦進入細胞體內，會導致細胞外貌的改變，從而引發人體內的免疫功能，導致新陳代謝混亂的現象［5］。這些年的研究可以表明HSV-2和很多疾病的發生有關，已經嚴重的影響了人們生活健康，在本次試驗中研究了HSV-2對于感染細胞具體的形態變化，為今后研究克制HSV-2的工作提供了相關的理論依據。

［1］ 徐 放，遇廣輝，王 普，等.抗HSV-2單鏈抗體和堿性磷酸酶融合蛋白的制備［J］.浙江工業大學學報，2014，42（1）：45-49.

［2］ 李成德，李 玲，歐麗紅，等.宮頸病灶HSV-2感染及其與宮頸癌的關聯性［J］.海南醫學，2014，（16）：2395-2397，2398.

［3］ 郭立方，王 榮，賈正平，等.氨甲喋呤對映體對ECV304細胞抑制作用及其機制［J］.中國藥理學通報，2010，26（2）：213-216.

［4］ 陳小義，徐忠偉，王 娜，等.哇巴因對血管內皮細胞ECV304細胞凋亡及胞內游離鈣離子和活性氧濃度的影響［J］.中國藥理學與毒理學雜志，2010，24（4）：241-248.

［5］ 劉 寧，薛耀明，朱 波，等.低濃度葡萄糖誘導ECV304細胞損傷機制的初探［J］.南方醫科大學學報，2010，30（10）：2314-2317.

本文編輯：楊 志

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ISSN.2095-6681.2015.020.004.02